荸荠英抑菌成分活性跟踪方法的研究

本文通过抑菌活性分析，确定敏感菌，运用硅胶板层析技术，研究生物自显影对荸荠英提取物抑菌成分的活性跟踪方法：用200mg／ml荸荠英提取物丙酮溶液点样4μl，以二元溶剂氯仿：甲醇=8．5：1．5展开，贴板10min，37℃培养10h即可得到清晰的抑菌斑色谱图。应用该方法可将荸荠英粗提物乙酸乙酯部分分离得到六个活性组分。     

酸菜中具有抑菌活性乳酸菌的分离鉴定及其产细菌素特性

目前已有研究陆续从不同的乳酸菌中分离到细菌素,但是这些细菌素存在着抑菌谱窄的问题,寻找广谱抗菌性能的新一代细菌素具有重要的理论价值和应用前景。以市售保质期较长的8种不同品牌的酸菜为材料,将青霉菌作为指示菌,通过抑菌实验筛选出一株能产生抑菌物质的菌株L3,经过生理生化鉴定、16S rDNA测序分析确定该菌株为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),故命名为植物乳杆菌L₃,NCBI序列号为MT781360。该菌株在MRS培养基中于37℃培养18～24 h时产细菌素L3的抑菌活性最强。将该培养上清液采用乙酸乙酯萃取,葡聚糖凝胶柱Sephadex G-50过滤分离纯化,再经Trinice-SDS-PAGE电泳结果显示,细菌素L3的分子质量约为4～5 kDa。细菌素L3对蛋白酶敏感,但其活性不受过氧化氢酶的影响,初步结果显示细菌素L3为蛋白质类物质。细菌素L3在60～100℃处理20 min或121℃处理15 min仍具有较高的抑菌活性,pH值2～10范围内有良好的稳定性;对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌以及部分真菌具有抑菌活性。植物乳杆菌L_3<...     

罗布麻内生细菌的分离鉴定及抑菌活性

目的:研究罗布麻内生细菌及其抑菌活性,旨在深入开发新资源。方法:以红花罗布麻为研究对象,采用平板分离法从中分离内生细菌,利用牛津杯法对其发酵物进行抑菌活性研究,对有抑菌活性的菌株进行形态特征观察和16S rRNA序列同源性分析。结果:筛选出的D1菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌四株供试指示菌均有明显的抑制作用,D3菌株对藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌有一定的抑菌作用。结合菌株的形态学特征和16S rRNA序列同源性分析,将D1鉴定为假单胞菌,D3鉴定为菠萝泛菌。结论:罗布麻中蕴含着具有抑菌活性的内生细菌资源,可进一步的开发利用。     

一株芒果炭疽病拮抗菌抑菌活性的研究及其鉴定

从芒果表皮分离得到29株内生细菌,对峙培养法发现菌株B2-1对芒果炭疽病菌丝的生长具有较强的抑制作用。通过离体实验和活体实验对拮抗菌株B2-1抑菌活性进行了研究,离体实验结果表明,B2-1的发酵滤液、挥发性代谢产物以及非挥发性代谢产物都对芒果炭疽病菌丝的生长有很强的抑制作用,其中B2-1发酵液的非挥发性代谢产物对芒果炭疽病菌丝生长的抑制率达到了99.86%,抑菌效果显著。活体实验结果表明,B2-1的菌悬液和发酵液与对照相比显著降低了芒果炭疽病的发病率,提高了芒果的可食用果率。进一步对菌株B2-1进行鉴定,综合形态学观察和生理生化特征检测以及16S rDNA序列分析,B2-1菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌。      

植物乳杆菌D1501发酵黄浆水的抑菌活性及其中细菌素的分离与鉴定

将植物乳杆菌D1501(Lactobacillus plantarum D1501)接种于黄浆水中,37 ℃静置培养24h后制成酸浆。抑菌活性测定表明,该方法制备的酸浆对供试的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌具有明显的抗菌活性,对假丝酵母有弱的抑菌活性,但对酿酒酵母和2株霉菌没有抑制作用。经中和及酶解实验推测酸浆中的抑菌物质为细菌素。将经过30、10、3 kDa超滤分离得到的无细胞超滤液旋蒸浓缩定容后,采用RESOURCE-Q阴离子交换柱和300SB-C18反相层析柱依次纯化,得到色谱纯度细菌素物质,命名为Lp100。该细菌素经液相色谱-串联质谱法分析,确定分子质量约为1 434.90 Da,氨基酸序列为MCCKVLLLLSRR。最终细菌素比活力为7 247.00 IU/mg,纯化倍数为79.94 倍,回收率为1%。     

一株黄曲霉拮抗细菌的分离筛选及鉴定

通过稀释分离法从土壤中分离纯化出一株具有黄曲霉拮抗活性的菌株。该菌株的次生代谢产物具有抑制黄曲霉生长的效果,抑菌率可达63%。该菌对多种病原真菌抑制效果明显,具有广谱抑菌效果。根据形态学观察、生理生化反应和16SrDNA鉴定,该菌株为枯草芽孢杆菌。     

四个国家雪茄外包皮烟叶表面细菌分离与活性测定

研究不同国家雪茄外包皮烟叶表面细菌差异,并为筛选菌株在雪茄外包皮烟叶发酵中的利用奠定基础。利用常规分离方法对美国、巴西、多米尼加及中国4个国家的7个雪茄外包皮烟样表面细菌进行分离鉴定,并初步测定筛选细菌的功能活性。结果表明,4个不同国家雪茄外包皮烟叶表面共分离获得细菌100株;属水平上不同地区雪茄外包皮烟叶表面细菌多样性及数量存在差异,基本以芽孢杆菌和葡萄球菌为主,尤其芽孢杆菌属为优势菌属;细菌种类多米尼加 > 美国-2=中国-1 > 巴西-1 > 巴西-2 > 中国-2 > 美国-1。活性分析结果显示,具有纤维素酶、果胶酶和蛋白酶分泌功能的菌株分别为24株、20株和22株,耐烟碱菌株46株,有7株芽孢杆菌同时具有上述4种活性。本研究证明国内外不同地区雪茄外包皮烟叶表面细菌种类存在差异,以芽孢杆菌属为优势细菌,其次是葡萄球菌,且芽孢杆菌属酶活更全面,不同菌株间活性差异较大。     

凤凰单丛茶内生拮抗细菌的筛选与鉴定

从潮州凤凰单丛茶树中分离筛选具有抑菌活性的内生细菌,为新型生物抗菌剂的研究开发提供理论基础。对凤凰单丛茶树的内生细菌进行分离纯化,采用双层平板法筛选对供试指示细菌具有抑制作用的菌株,平板对峙法筛选对供试植物病原菌具有抑制作用的菌株,并对拮抗细菌进行形态特征观察、生理生化试验及16S r DNA鉴定。结果表明:凤凰单丛茶树中共分离出内生细菌9株,其中FH01菌株抑菌效果最好,且对供试菌的抑菌谱广,对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为14.92 mm和12.36 mm,对梨果黑斑病菌、核桃叶枯病菌、红枣黑斑病菌、立枯丝核菌的菌丝抑制率分别为82.10%、81.52%、75.06%、67.10%。经形态学、生理生化试验及16S r DNA鉴定,内生拮抗细菌FH01为甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus strain)。      

造纸法再造薄片浆料中腐败菌的分离鉴定与抑菌研究

采用平板划线分离方法对造纸法再造烟叶上网浆中的主要微生物群进行分离,再根据细菌的菌落形态、菌体形态、生理生化实验和16S r DNA序列分析对菌株进行了鉴定。结果表明,引起造纸法再造烟叶上网浆腐败变质的主要菌群为约氏不动杆菌和恶臭假单胞菌。此外,还考察了山梨酸钾、双乙酸钠、尼泊金酯钠、乙二胺四乙酸二钠和ε-聚赖氨酸等5种防腐剂对这两种腐败菌的抑菌效果。结果表明5种防腐剂的抑菌效果强弱顺序为ε-聚赖氨酸乙二胺四乙酸二钠尼泊金酯钠双乙酸钠山梨酸钾,其中ε-聚赖氨酸对约氏不动杆菌和恶臭假单胞菌的最小抑菌质量浓度分别为0.075 mg/m L和0.05 mg/m L。     

一株蓝麻黄内生细菌的分离鉴定和抑菌活性研究

为筛选具有拮抗活性的植物内生菌,以新疆有毒植物蓝麻黄(E.glauca)为材料,采用研磨法和琼脂扩散法从中分离并筛选出一株对多种植物致病菌具有较强抗性的内生细菌XJEG-GB-13。对其生物学特性进行初步研究,研究表明,最适生长温度为37℃,最适生长pH 值为6.0。根据其形态特征、生理生化检测、16S rDNA 测序,将其鉴定为枯草芽孢杆菌的一个亚种Bacillus subtilis subsp. subtilis。XJEG-GB-13 的获得可为进一步研究高效拮抗菌的拮抗机制提供实验材料。     

酵素中具有抑菌能力乳酸菌的筛选及鉴定

该研究探讨了从酵素中分离纯化具有抗菌性能的12株乳酸菌,对其进行生理生化实验和API鉴定。利用牛津杯法对阪崎大肠杆菌、鼠伤寒沙门氏菌和宋内志贺氏菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌进行抑菌特性研究,并探讨了乳酸菌是否产生物胺能力和偶氮还原酶。结果表明,酵素源的12株乳酸菌对肠道致病菌均具有不同程度的抑菌活性,其抑菌圈直径为14~22 mm,对大肠杆菌的抑菌效果较好,其抑菌圈直径为15~23 mm,对金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径为14~24 mm,12株乳酸菌都不具有产生物胺和偶氮还原酶的能力。通过生理和API生化鉴定确定XZJ003、XZJ006、XZJ015均为副干酪乳杆菌,通过16S rDNA和同源性确证XZJ015为副干酪乳杆菌,该研究结果对今后益生菌的深入研究和功能性食品的开发具有一定的作用。     

采后番木瓜果实炭疽病病原菌分离鉴定及其拮抗菌的筛选

从采后发病番木瓜果实上分离炭疽病的病原菌,同时采用平板对峙法和滤纸片法从番木瓜果园土壤中筛选得到炭疽菌的拮抗菌W-2。通过形态学和分子生物学分别鉴定了病原菌和拮抗菌相关种属,并测试了拮抗菌W-2的拮抗活性。结果表明:番木瓜炭疽病病原菌鉴定为番木瓜炭疽菌Glomerella magna,拮抗菌W-2为萎缩芽孢杆菌(Bacillus atrophaeus)。拮抗菌W-2能够引起Glomerella magna菌丝体膨大和孢子畸形,且W-2浓度为1×10⁸ CFU/mL时,对菌丝生长抑制作用最强,浓度为1×10⁸和1×10⁹ CFU/mL时,对孢子萌发的抑制作用最为显著(P<0.05)。活体生防实验表明,浓度为1×10⁸ CFU/mL的W-2菌悬液处理能够有效控制番木瓜果实炭疽病病斑的扩展,并显著降低果实的发病率(P<0.05)。     

响应面试验优化双水相萃取大吴风草总黄酮工艺及抑菌活性测定

目的：优化大吴风草总黄酮（total flavonoids of Farfugium,TFF）双水相萃取体系并研究其抑菌活性。方法：超声波辅助C2H5OH-(NH4)2SO4双水相萃取TFF,依据Box-Behnken试验设计原理,采用三因素三水平响应面分析法,以TFF萃取率为响应值进行方差分析,获取多元二次线性回归方程;采用K-B纸片扩散法测定6 种供试菌种的抑菌圈直径,对比最小抑菌浓度（minimum inhibitory concentration,MIC）和最小杀菌浓度（minimumbactericidal concentration,MBC）确定其抑菌活性。结果：24% C2H5OH-18% (NH4)2SO4双水相萃取体系条件下TFF萃取率最高,响应面试验方差分析表明,粗提液质量分数显著影响TFF萃取率（P=0.023 9＜0.05）,而pH值和NaCl质量分数对萃取率的影响不显著;最佳双水相萃取条件为粗提液质量分数20%、pH 7.64、NaCl质量分数2.68%,萃取率模型预测最大值为96.366 7%（P=0.994）;TFF对枯草芽孢杆菌抑制作用最强,高剂量作用下抑菌率可达98.67%,MIC为1.56 mg/mL;对沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑制作用次之,对青霉和黑曲霉抑制作用最弱。结论：粗提液质量分数对萃取率影响较大,pH值和NaCl质量分数对萃取率的影响较小;TFF对6 种供试菌种均表现出较强的抑菌活性,抑菌率与TFF质量浓度呈正相关,TFF对细菌的抑制效果相对强于真菌。     

海洋湿地环境中拮抗水产品腐败菌的乳酸菌筛选与鉴定

从渤海锦州海岸湿地植物根系中筛选对腐败希瓦氏菌、铜绿假单胞菌和副溶血弧菌具有较强抑制作用的乳酸菌,为研发一种海产品防腐保鲜生物制剂奠定基础。应用牛津杯打孔法从碱蓬草、芦苇根部筛选拮抗性乳酸菌菌株,应用生长曲线分析菌株拮抗作用变化,通过pH、蛋白酶、温度、NaCl浓度等因素,分析乳酸菌无细胞上清液(CFS)的拮抗性能。从碱蓬草根部获得1株拮抗能力较强的乳酸菌株JP-12,初步判定其抑菌活性物质存在于CFS中,生长曲线结果显示其抑菌活性在培养28 h时达到峰值。CFS经不同蛋白酶处理后,抑菌活性均有所下降。对胃蛋白酶最为敏感,活性丧失率为24.21%;CFS经40~121 ℃等不同温度处理30 min,其抑菌活性基本不变;在pH3.0~4.5范围内抑菌活性保持稳定;3.0%~3.5% NaCl条件下其抑菌活性较强,抑菌直径达到18.46、18.15 mm。经生理生化实验和16S rRNA菌株JP-12被鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。本文为挖掘拮抗性乳酸菌的资源及在水产品防腐保鲜中的应用提供一条新的途径。     

响应面法优化山毛豆抑菌物质提取条件的研究

以山毛豆种子为试验材料,对水浴浸提法提取山毛豆种子中抑菌物质的工艺进行研究,研究温度、提取时间、提取溶剂、提取pH对山毛豆种子中抑菌物质提取效果的影响。在单因素试验基础上,利用响应面分析法(RSM)优化山毛豆抑菌物质的提取条件。得到山毛豆抑菌活性物质的最佳提取工艺条件为:温度64℃,提取时间11 h、体积分数52%乙醇为溶剂,溶剂pH 6。该条件下体积分数为20%的山毛豆提取液对3种供试菌的抑菌圈直径均值为18.34 mm,与理论最优值18.42 mm接近。     

猕猴桃果实中酚类物质的分离鉴定及抗氧化活性

采用高速逆流色谱与制备型高效液相色谱联用技术对猕猴桃果实中酚类化合物进行分离,共获得8 种化合物。利用波谱方法鉴定出7 种化合物,分别为：新绿原酸（化合物1）、咖啡酸-3-O-葡萄糖苷（化合物2）、2-O-咖啡酰基苏糖酸（化合物3）、表儿茶素（化合物5）、原花青素C1（化合物6）、Malaxinic acid（化合物7）、槲皮苷（化合物8）。化合物4经初步推测为B-型原花青素二聚体。化合物2、5、6、7对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼和2,2’-联氮-二-(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)阳离子自由基都有清除效果,清除能力排序为：原花青素C1＞表儿茶素＞咖啡酸-3-O-葡萄糖苷＞Malaxinic acid。     

1 株广谱抗菌活性菌株的筛选鉴定及其抗菌蛋白的分离纯化

从湖南传统腊肉中分离筛选得到1 株具有广谱抑菌活性的菌株HLR13,该菌株发酵液对蜡样芽孢杆菌、荧光假单胞菌、藤黄微球菌和肠炎沙门菌等食品中常见的致病菌具有较强的抑制活性。通过形态学特征、生理生化特征及16S rRNA序列分析,该菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌斯皮兹仁亚种（Bacillus subtilis subsp. spizienii）。采用硫酸铵分级沉淀、离子交换层析（Q Sepharose FF）和凝胶过滤层析（Sephadex G-75）等方法对该菌株所产抗菌蛋白进行分离纯化,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测显示纯化后的蛋白为单一条带,通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析和NCBI/nr蛋白数据库比对初步确定该抗菌蛋白分子质量为31?494?Da,是枯草芽孢杆菌产生的一种假定蛋白。本实验可为新型天然防腐剂的开发提供一定理论依据。     

一株海洋梅久兰链霉菌的分离鉴定及其抗真菌作用研究

采用梯度稀释分离法从连云港海域海水、海泥、近海土壤、海洋动物以及海洋植物样品中,分离出海洋放线菌22株,采用平板对峙培养法测定不同放线菌菌株的抑菌作用,有9个放线菌菌株有抑菌作用。其中ZW-1菌株的抑制活性最强,该菌株及其发酵液对供试的小麦雪腐镰刀菌(Fusarium nivale)、小麦赤霉病菌(Fusarium graminearum)、斑点落叶病菌(Alternaria alternata)、油菜菌核病菌(Sclerotinia sclerotiorum)、菠菜早疫病菌(Alternaria solani)、玉米圆斑病菌(Helminthosporium carbonum)、西瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.niveum)、棉花枯萎病菌(Fusarium oxysporum f.sp.vasinfectum)等8种植物病原真菌都有较强的抑制作用,可导致病原真菌菌丝细胞壁膨大,原生质体收缩,同时可抑制菠菜早疫病菌(A. solani)分生孢子的萌发和芽管的伸长。通过培养特性、细胞形态观察、生理生化实验和16S rDNA序列分析,将海洋放线菌ZW-1菌株鉴定为梅久兰链霉菌(Streptomyces mediolani)。