积累5-甲基四氢叶酸双抗突变株的选育及条件优化

目的选育积累5-甲基四氢叶酸（5-MTHF）的双重药物抗性高产突变株,探讨发酵时间和温度对叶酸积累形式的影响。方法紫外线和EMS联合诱变;磺胺、甲氨蝶呤药物培养基筛选菌株;单因素实验检测发酵条件对叶酸积累形式的影响;HPLC检测叶酸含量和存在形式。结果获得稳定性良好的抗性突变株,其叶酸产量是原始菌株的2.2倍。适合5-MTHF积累的发酵时间为16 h,积累量为68.94μg/g干菌。结论抗性突变株能提高菌株产叶酸能力,5-MTHF含量受发酵时间影响大,而发酵温度对产物形式和产量影响不显著。     

积累5-甲基四氢叶酸双抗突变株的选育及条件优化

目的 选育积累5-甲基四氢叶酸(5-MTHF)的双重药物抗性高产突变株,探讨发酵时间和温度对叶酸积累形式的影响.方法 紫外线和EMS联合诱变;磺胺、甲氨蝶呤药物培养基筛选菌株;单因素实验检测发酵条件对叶酸积累形式的影响;HPLC检测叶酸含量和存在形式.结果 获得稳定性良好的抗性突变株,其叶酸产量是原始菌株的2.2倍.适合5-MTHF积累的发酵时间为16 h,积累量为68.94 μg/g干菌.结论 抗性突变株能提高菌株产叶酸能力,5-MTHF含量受发酵时间影响大,而发酵温度对产物形式和产量影响不显著.     

大豆叶酸的三酶法提取及微生物检测技术研究

采用大豆品种Williams 82为试验材料,用α-淀粉酶、蛋白酶和大鼠血清酶三种酶来提取大豆中的叶酸,并用微生物法对叶酸含量进行测定。利用优化的三酶法,对121份北方地区栽培大豆的种子进行总叶酸含量测定。结果表明:α-淀粉酶、蛋白酶和大鼠血清的组合在8、100、10μl的条件下能够最大程度地提取大豆种子中的叶酸;北方地区121份栽培大豆的种子中叶酸含量为143.57~309.57μg/100g。优化得到的三酶法提取大豆种子中叶酸的方法可行,为今后谷类作物叶酸含量测定提供了参考。     

9个柑橘品种不同组织中5-甲基四氢叶酸含量的比较

以9个不同种和品种柑橘为试验原料,采用反相高效液相荧光检测法(RP-HPLC-FLD)测定不同柑橘品种中各组织5-甲基四氢叶酸的含量。结果表明:甜橙类果实果肉中含5-甲基四氢叶酸最高,尤以哈姆林甜橙最高,为29.28μg/100 g;其次为柚类,沙田柚果肉中5-甲基四氢叶酸的含量为23.45μg/100 g,梁平柚15.01μg/100 g;柑类品种果实果肉5-甲基四氢叶酸的含量较低,早津温州蜜柑果肉中的5-甲基四氢叶酸含量为15.58μg/100 g,台湾椪柑8.92μg/100 g;柠檬中的含量最低,只有4.1μg/100 g。大多数品种中,不同组织5-甲基四氢叶酸含量的基本排序为种子>果肉>囊衣>果皮。从整体上看,甜橙类果实中5-甲基四氢叶酸的含量最高。     

高效液相荧光检测法测定柑橘中5-甲基四氢叶酸的含量

利用5-甲基四氢叶酸自身产生荧光的特性,建立高效液相荧光检测法来测定柑橘中5-甲基四氢叶酸的含量。使用ODS-C18反相色谱分离柱,流动相为6%乙腈,94%0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(pH3.0)作为流动相,流速1.0mL/min,柱温23℃,进样量为20μL,激发波长为290nm,发射波长为360nm。结果表明,5-甲基四氢叶酸在0.003μg/mL-0.1μg/mL有良好的线性关系,相关系数为0.9999,检出限为0.01ng/mL,样品测定的精密度为0.99%,样品加标平均回收率为96.6%。建立的高效液相荧光检测法具有良好的精密度和回收率,适合用于柑橘中5-甲基四氢叶酸的测定。     

高效液相色谱-串联质谱法测定水果中叶酸及其稳定性

建立了高效液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)法测定水果中叶酸(PteGlu)、四氢叶酸(H4PteGlu)、5-甲基一四氢叶酸(5-CH3-H4PteGlu)的方法,同时研究了不同温度、处理时间、pH对3种叶酸稳定性的影响。以0.1%甲酸乙腈溶液-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,在电喷雾正离子模式下,以多反应监测(MRM)模式进行检测。结果表明,3种叶酸在10-100 ng/mL质量浓度范围内线性关系良好,线性相关系数(R²)均大于0.99,5-甲基-四氢叶酸的检出限为1 ng/mL,叶酸、四氢叶酸的检出限均为2 ng/mL,平均回收率为59.34%～65.67%。不同水果3种叶酸的含量差异较大,叶酸的含量范围在3.11～27.33μg/100 g之间,四氢叶酸的含量范围在10.65～26.87μg/100 g之间,5-甲基-四氢叶酸的含量范围在8.33～32.72μg/100 g之间。pH对3种叶酸稳定性的影响较大,温度和时间影响相对较小,叶酸在pH 7较稳定,四氢叶酸和5-甲基-四氢叶酸在pH 6较稳定。该方法简单、快速,灵敏度高,可为水果中叶...     

高效液相色谱法测定保健食品多维康胶囊中叶酸的含量

目的建立高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)测定多维康胶囊中叶酸含量的方法。方法采用C₁₈(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,以磷酸二氢钾-甲醇溶液为流动相,流速0.8 mL/min,检测波长254 nm,柱温30℃,进样体积10μL。结果叶酸的线性关系良好,相关系数为1.000;方法检出限为0.034μg/mL,定量限为0.091μg/mL;方法平均加标回收率为98.80%~104.17%,平均相对标准偏差为0.02%。结论该方法操作简单,灵敏度高,可作为保健食品多维康胶囊中叶酸的测定方法。     

超高效液相串联质谱测定四棱豆中总叶酸和多聚谷氨酸叶酸的含量

本文建立了超高液相色谱串联三重四级杆质谱(UPLC-MS/MS)定量测定四棱豆中总叶酸的含量和多聚谷氨酸叶酸分布的方法。四棱豆在缓冲液中蒸煮灭活内源多聚谷氨酸水解酶和破坏叶酸结合蛋白,使结合态叶酸变成游离态,过滤得提取液。将提取的各种形式叶酸转化为5-甲基四氢蝶酰多聚谷氨酸(5MTHFGlun),并经C18萃取小柱除盐后,采用UPLC分离不同形态的5MTHFGlun,电喷雾正离子电离模式(ESI+)和多反应监控扫描模式(MRM)测定不同形态的5MTHFGlun含量。方法采用Pte Glu(1-6)作为内标,5MTHFGlu(1-6)外标进行定量。该方法灵敏度高,最低检测限(LOD)为40~1133 fmol,最低定量限(LOQ)为120~3400 fmol,精密度为0.5%~6.8%,平均回收率为43%。研究发现四棱豆中多聚谷氨酸叶酸的主要形式是蝶酰五谷氨酸,占叶酸总量的65%;其次是蝶酰五谷氨酸占30%;其它形式只占5%;总叶酸含量为1.1μmol/100 g,其含量显著高于菠菜和西兰花等蔬菜。该方法快捷、灵敏、精确,适用于蔬菜中叶酸的分析。     

利用钛胶高效液相色谱法测定食品中叶酸含量

建立了利用钛胶高效液相色谱法测定食品中叶酸含量的方法。色谱条件:钛胶固定相(250mm×4.6mmi.d.,5μm),流动相为水:甲醇=70:30(v/v)、流动相中含磷酸盐(PBS)20mmol/L,流速0.9mL/min,柱温60℃,检测波长280nm。线性范围为5～25μg/mL,检出限1.9220μg/mL,回收率为92.7%～95.1%,RSD(n=8)<0.68%。应用于食品样品中叶酸的测定,结果满意。     

高效液相色谱-质谱联用测定婴幼儿配方食品中叶酸的含量

建立了婴幼儿配方食品中叶酸含量的高效液相色谱-质谱联用测定方法。采用C18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm)进行分离,以5 mmol/L乙酸铵(含0.1%甲酸)溶液-甲醇为流动相梯度洗脱,柱温25℃,流速1.0 mL/min,进样量20μL,柱后分流比为1∶3,质谱采用多离子反应监测(MRM)方式进行检测,正离子模式,定量离子为m/z442.0→295.2。叶酸在0.001~2.500μg/mL的范围内线性关系良好(r=0.9989),该方法相对标准偏差(RSD)为2.6%~6.0%,回收率为83.9%~104.0%,检出限(S/N=3)和定量限(S/N=10)分别为1.0 ng/mL、3.3 ng/mL。该方法操作简便、灵敏度高、重复性好,可用于婴幼儿配方食品中叶酸的测定。     

基于5种生物碱定量分析的马钱子总碱提取工艺优化

首先以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,体积流量1 mL/min,柱温35℃,检测波长260 nm,建立同时测定5种马钱子生物碱(士的宁、马钱子碱、士的宁氮氧化物、马钱子碱氮氧化物与番木鳖次碱)含量的反相HPLC法;然后以上述5种生物碱的总量为指标,采用L9(33)正交实验法,对马钱子总碱的回流提取工艺条件(溶剂用量、质量浓度和提取次数)进行优化。结果表明,上述5种马钱子生物碱质量浓度线性范围依次为14.64~468.48、11.625~372.0、0.555~17.76、0.891~28.512μg/mL与2.5~80.0μg/mL,回收率分别为100.3%、101.7%、97.7%、98.8%与99.6%。优化后马钱子总碱的回流提取工艺条件为:加入20倍量体积分数70%的酸性乙醇,回流提取4次,每次1 h。在此提取条件下,马钱子提取物中5种生物碱总质量分数达3.633%。反相HPLC法同时测定5种马钱子生物碱含量的方法简便、准确;以此作为马钱子总碱提取工艺优化的指标更为全面、可靠。     

微生物阻抗法快速测定乳粉中的叶酸含量

为建立一种基于微生物阻抗法快速测定乳粉中叶酸含量的新方法,在GB 5009.211—2022第一法的基础上制作标准系列管,优化测定条件,探索菌体的阻抗变化与叶酸含量之间的线性关系,建立微生物阻抗法标准曲线。以乳粉质控样品和市售乳粉为试验样品,考察此方法的检测性能。结果表明：当标准系列管培养20 h,采用离心+超声破碎处理时,测定菌体的电阻率值与叶酸含量在0.000～0.100 ng/mL之间的线性关系最好。拟合出标准曲线方程为Y=8866.3X+177.38,相关性系数R2=0.9952。检出限为1.26μg/100 g,定量限为4.20μg/100 g,加标回收率为96.2%～103.6%。对乳粉质控样品和4种市售乳粉的相对标准偏差(Relative standard deviation, RSD)值在3.4%～6.4%之间,总检测时间为3 d左右。与国家标准方法相比,该方法的重复性、准确度相当,但检测时间更短,可快速测定乳粉中的叶酸含量。     

微生物法与试剂盒法测定婴幼儿配方奶粉中叶酸含量的方法比较

目的比较GB 5413.16-2010与试剂盒法测定的配方乳粉质控样品的叶酸含量。方法通过国标和试剂盒法各检测10组质控样品,得到20个检测数据,从检出限和相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)对2种方法进行方法学考察。结果国标法和试剂盒法叶酸测试结果平均值分别为231μg/100 g和228μg/100 g,RSD分别为8.36%和8.01%。2个方法测定结果的平均值偏差为1.16%,RSD值偏差为2.14%。结论国标法与试剂盒法测定婴幼儿配方奶粉中叶酸含量的结果相近,实验室可以根据自身实际情况选择适合的检测方法。     

微生物法测定蔬菜中叶酸含量

采用微生物法使用鼠李糖乳杆菌测定了某地区25种常见蔬菜的叶酸含量。结果显示,在当地常见蔬菜中菠菜叶酸含量最高（236μg/100 g）,西兰花（137μg/100 g）的叶酸含量也较高。其他叶类蔬菜的叶酸含量在45～100μg/100 g,瓜类、豆类和根茎类蔬菜的叶酸含量低于叶类蔬菜。菠菜和大白菜的叶酸在放置一周后仅保留23.0%和42.9%。     

高效液相色谱-柱后光化学衍生-荧光检测法测定强化食品中的叶酸

建立柱后光化学衍生-高效液相色谱法(HPLC)测定强化食品中叶酸的分析方法。方法 采用SunFire C₁₈(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-50 mmol/L磷酸二氢钾溶液(pH=5.0)为流动相梯度洗脱,叶酸在254 nm紫外光照射下进行柱后衍生,荧光检测器检测,激发和发射波长分别为344和428 nm。结果 本方法的线性范围为0.01～2.0 μg/ml,r=0.999 9;方法的定性检出限和定量检出限分别为0.01和0.03 μg/g;加标回收率为90.0%～98.0%,RSD均小于5%。结论 本方法简便、快速、准确、重现性好,适用于强化食品中叶酸含量的测定。     

HPLC法测定莲子中还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH)含量

利用5,5'-二硫双-2-硝基苯甲酸(DTNB)为衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化提取、HPLC法测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)含量。本文对样品前处理过程和色谱流动相的选择分别进行了优化,有效的阻止了前处理过程中巯基氧化变性对测定灵敏度降低而导致的漏检及消除了衍生化产物3,5-硝基-3-巯基-苯甲酸(NTB)色谱峰拖尾所造成的干扰,并借此选择性测定了莲子中GSH和总巯基(-SH)含量。结果表明;三次测定莲子中GSH和总巯基(-SH)含量均值分别为0.971 1μmol/g和1.368 6μmol/g,方法的回收率分别为101.02%和100.09%,检测限分别为4.21μmol/L和4.63μmol/L。     

富含叶酸血糯米西米保健酸奶的研制

以牛奶、血糯米和西米为原料,并添加叶酸进行营养强化,制备富含叶酸血糯米西米保健酸奶。以酸度、黏度和感官评价为考察指标,以血糯米与西米比例及添加量、蔗糖添加量、接种量、均质时间和发酵时间为影响因素,通过单因素试验和响应面试验优化其工艺条件。结果表明,最佳工艺条件为血糯米与西米(质量比1∶1)添加量15%、蔗糖添加量7%、接种量0.2%、发酵时间7 h。此优化条件下,成品感官评分为89.6分,黏度为5.78 Pa·s,酸度为78.5°T,蛋白质、脂肪、叶酸含量分别为2.85 g/100 g、2.7 g/100 g、424.7μg/100 g,乳酸菌总数为4.2×10⁷ CFU/g。叶酸在酸奶发酵、后熟及冷藏过程中损失率分别为13.5%、1.5%及4.6%,总损失率为19.6%,表明血糯米西米保健酸奶兼具血糯米与西米风味,同时可为孕妇和乳母补充叶酸。     

富含叶酸血糯米西米保健酸奶的研制

以牛奶、血糯米和西米为原料,并添加叶酸进行营养强化,制备富含叶酸血糯米西米保健酸奶。以酸度、黏度和感官评价为考察指标,以血糯米与西米比例及添加量、蔗糖添加量、接种量、均质时间和发酵时间为影响因素,通过单因素试验和响应面试验优化其工艺条件。结果表明,最佳工艺条件为血糯米与西米(质量比1∶1)添加量15%、蔗糖添加量7%、接种量0.2%、发酵时间7 h。此优化条件下,成品感官评分为89.6分,黏度为5.78 Pa·s,酸度为78.5°T,蛋白质、脂肪、叶酸含量分别为2.85 g/100 g、2.7 g/100 g、424.7μg/100 g,乳酸菌总数为4.2×10⁷ CFU/g。叶酸在酸奶发酵、后熟及冷藏过程中损失率分别为13.5%、1.5%及4.6%,总损失率为19.6%,表明血糯米西米保健酸奶兼具血糯米与西米风味,同时可为孕妇和乳母补充叶酸。     

免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定乳粉中游离叶酸含量

建立了免疫亲和柱净化-高效液相色谱法测定乳粉中游离叶酸的方法该方法样品处理为样品用磷酸盐缓冲液溶解后,样液通过叶酸免疫亲和柱净化、甲醇洗脱液洗脱、浓缩富集后直接测定 色谱条件为:Waters C1s柱(4.6mm×250mm,5μm),以20mg己烷磺酸钠+10mL冰乙酸+1.3mL三乙胺定容1L,pH3.2):甲醇(80:20,V/V)作为流动相;流速为1 mL/min;检测波长为280nm标准曲线回归方程v=-185.68+290.29x,相关系数R2=0.9997;回收率为88.2％;RSD为1.99％.本方法检出限为40μg/kg.该法较国标方法具有样品处理简单方便、灵敏度高、重现性好、分析时间短等优点,可以满足调制乳粉及婴幼儿配方乳粉中叶酸含量的测定.     

婴幼儿乳粉叶酸含量两种测定方法的研究

目的:对比婴幼儿乳粉中叶酸含量检测的两种方法,探究其准确性及更方便快捷的检测流程。方法:分别采用GB5009.211-2014与试剂盒法测定乳粉质控样品及市售的30批次婴幼儿乳粉样品中叶酸含量。结果:国标法和试剂盒法对质控乳粉样品中叶酸含量的测定值分别为147.6±5.8μg/100g、146.4±2.9μg/100g,RSD分别为3.93%和1.98%;两种方法的回收率分别为110.38%±3.39%、98.03±8.62%。对使用国标法和试剂盒法测定30批次婴幼儿乳粉样品叶酸含量的两组数据进行配对t检验,t=1.881,P=0.070,P>0.05说明两组检测结果无显著性差异。结论:国标法及试剂盒法均能对婴幼儿乳粉中叶酸含量进行有效测定且结果接近,均可作为检验方法及质控方式用于实际检验工作当中。