紫芝胞外多糖分离纯化及抗氧化性的研究

目的:探讨紫芝(Ganoderma Sinense)胞外多糖的分离纯化及抗氧化活性.方法:采用乙醇沉淀法、聚酰胺脱蛋白法,DEAE-52阴离子交换色谱柱法分离纯化紫芝胞外多糖;通过对DPPH自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基的清除能力的测定确定抗氧化活性.结果:粗多糖经DEAE-52柱层析纯化得到三种多糖组分GSP1、GSP2和GSP3,均具有抗氧化活性.其中GSP2的抗氧化活性尤为明显,在1.6mg/mL时DPPH自由基清除率达到76.3％;在5mg/mL时羟自由基的清除率达到81.5％.结论:三种紫芝胞外多糖组分具有较强的抗氧化活性,其中GSP2最为明显.     

玉米淀粉及黄浆发酵产小核菌多糖抗氧化活性

玉米淀粉及黄浆发酵产小核菌粗多糖,探究其体外抗氧化活性,分别考察小核菌粗多糖对ABTS自由基、超氧阴离子自由基和亚硝基自由基的清除能力及其对亚油酸过氧化的抑制作用。小核菌粗多糖经Sephacryl S400-HR凝胶柱层析分离纯化,得到两个组分FRAC1和FRAC2,红外光谱分析表明FRAC1和FRAC2中存在C==O键及—OH基团。小核菌粗多糖对ABTS自由基有较好的清除效果;对超氧阴离子自由基和亚硝基自由基有一定的清除效果,清除能力随粗多糖的质量浓度增大而升高。试验表明,玉米淀粉及黄浆发酵获得的小核菌粗多糖具有一定的抗氧化活性。     

化橘红多糖的提取纯化及抗氧化活性研究

对化橘红粗多糖及其纯化组分的抗氧化活性进行研究。化橘红粉末经热水提取、乙醇沉淀、sevage法脱蛋白、透析得到粗多糖,粗多糖经DEAE-52纤维素阴离子交换层析柱分离,得到2个纯化组份ECP1和ECP2。采用化学法分别测定了粗多糖及其纯化组分的体外清除自由基(DPPH.,.OH,ABTS.+)能力、还原能力。粗多糖的多糖含量为74.29%,经DEAE-52纯化的组分ECP1和ECP2的多糖含量分别为83.39%和85.77%。结果表明粗多糖及其两个纯化组分均具有较好的抗氧化清除自由基的能力,并且抗氧化能力与多糖浓度之间存在良好的相关性。其中ECP2的抗氧化清除自由基能力强于ECP和ECP1,但是低于对照VC。     

软枣猕猴桃多糖的体外抗氧化活性

利用水提醇沉法提取软枣猕猴桃粗多糖,经脱蛋白、脱脂,软枣猕猴桃粗多糖的提取率为1.41%。利用DEAE-52纤维素离子交换层析对软枣猕猴桃多糖进行初步分离,得到4种软枣猕猴桃多糖组分。利用SephadexG-200凝胶柱层析对组分Ⅱ和Ⅲ实现了完全分离。通过测定清除自由基能力,评价软枣猕猴桃多糖组分Ⅱ的抗氧化活性。结果表明:软枣猕猴桃多糖对DPPH自由基及烷基自由基(R)有较强的清除能力,IC50值分别为0.497、0.547mg/mL。在受试范围内,随软枣猕猴桃多糖质量浓度的增加,清除能力增强,当软枣猕猴桃多糖质量浓度达到1mg/mL时,其对DPPH自由基及R的清除率分别达到86.4%、87.1%,与VC的清除率相近。软枣猕猴桃多糖对羟自由基(OH)有一定的清除能力,IC50值为0.668mg/mL。其清除能力随多糖质量浓度的增加而有所增加,但其对OH的清除率较VC有一定的差距。软枣猕猴桃多糖对O-2.的清除率较低,清除能力较弱。由此可见,软枣猕猴桃多糖具有较强的抗氧化活性。     

胶红酵母胞外多糖镇痛及抗氧化作用的研究

目的:研究胶红酵母粗多糖的镇痛活性和不同给药方式对镇痛作用的影响,以及多糖纯化后各组分的体外抗氧化活性。方法:采用温浴甩尾实验分别测定小鼠给药前、皮下注射和腹腔注射粗多糖后60 min内的痛阈值,考察胶红酵母胞外粗多糖的镇痛作用,利用DEAE-52离子柱层析对粗多糖进行纯化,得到EPS-1,EPS-2,EPS-3,EPS-4,EPS-5 5种多糖,研究纯化后各组分对羟自由基(·OH)和超氧阴离子自由基(O_2~—·)的清除能力。结果:在小鼠温浴甩尾实验中,胶红酵母多糖能够显著延长小鼠的痛阈值,皮下注射30 min后和腹腔注射20 min后药效达到最大,中剂量组(25 mg/kg)效果最佳,痛阈提高率分别达99.9%和124.9%,具有显著的镇痛活性。与Vc相比,EPS-4和EPS-5对·OH自由基具有很强的清除能力,且效果高于Vc,各组分对O_2~—·自由基均有一定的清除能力。     

浒苔多糖的纯化及抗氧化活性研究

利用DEAE-Cellulose52离子交换层析和Sepharose4B凝胶过滤层析时浒苔粗多糖进行了纯化,并采用Fenton反应和邻苯三酚自氧化法研究了粗多糖和纯化多糖EP-Ⅱ的体外抗氧化活性.结果显示,利用热水浸提、sevag法除掉蛋白质和95%乙醇沉淀后得到的粗多糖,经两步层析后可得到纯化的多糖组分EP-Ⅱ.浒苔粗多糖和EP-Ⅱ都能有效地清除羟基自由基(·OH),且均呈现一定的量效关系,当浓度为0.6mg/mL时,对羟基自由基(·OH)的清除率分别达到44%和59%.两种多糖对超氧阴离子自由基(O2-·)清除作用较弱.     

不同纯化方法对花生多糖抗氧化活性的影响

以冷榨花生饼为原料,经提取得到花生多糖粗液,分别采用双酶水解和DEAE-52纤维素柱层析的方法进行纯化得到花生多糖PPS-a、PPS-2组分,并研究二者的抗氧化能力。研究表明:两个组分具有一定的清除羟基自由基、超氧阴离子、DPPH、还原力和抗脂质过氧化能力,且其清除效果随着浓度增加而增加,其中PPS-a的抗氧化活性较PPS-2强。与VC相比,PPS-a和PPS-2的浓度大于5 mg/mL时,两种多糖对羟基自由基清除能力均高于VC;从清除超氧阴离子和DPPH自由基及抗脂质过氧化方面来看,其抗氧化能力均低于VC;两种多糖的还原力最差,仅达到VC的16%左右。     

黄粉虫抗氧化活性肽的分离纯化研究

为制备具有抗氧化活性的黄粉虫生物活性肽,采用双酶水解黄粉虫蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖SephadexG-25 凝胶柱层析和阳阴离子交换柱层析分离纯化,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,纯化得到的抗氧化多肽对羟自由基和超氧阴离子自由基具有很强的清除作用,清除率可分别达到74.20% 和87.32%。     

黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

研究黑果枸杞多糖的分离纯化及抗氧化活性。采用超声波辅助法提取,HPD100大孔树脂吸附柱吸附脱色、制备型高效液相色谱精制多糖样品;采用二苯代苦味酰基(DPPH)自由基、超氧阴离子自由基和羟自由基为底物研究多糖的抗氧化活性。结果表明,在相同质量浓度条件下,精制多糖的抗氧化活性由于粗多糖质量浓度达到1 mg/mL时,黑果枸杞多糖粗样品和精制样品对DDPH的清除率分别是50.23%和61.02%,对超氧阴离子自由基清除率分别是44.03%和54.32%,对羟自由基的清除能力分别是55.23%和64.62%。     

蛹虫草多糖的化学修饰及体外抗氧化能力

将醇沉法得到的粗多糖,经柱层析得多糖纯品。对多糖纯品进行硫酸化、羧甲基化、乙酰化化学修饰,用于体外抗氧化活性研究。纯化后的蛹虫草多糖可以被多种化学试剂修饰,其取代度大小的顺序是：羧甲基化＞乙酰化＞硫酸化;修饰后的多糖表现出不同程度的抗氧化活性,其中羧甲基化和硫酸化可以明显提高多糖的抗氧化能力,对烷基自由基清除率提高最大,分别达到95.19%和73.58%,其次是清除羟自由基和超氧阴离子自由基,乙酰化修饰后抗氧化能力有所下降。因此,采用合适的修饰方法,可以明显提高蛹虫草多糖的抗氧化活性。     

鹿茸多糖分离纯化及抗氧化活性研究

采用DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对鹿茸粗多糖进行分离纯化,并通过对DPPH自由基、羟基自由基(·OH)、超氧阴离子自由基(O2-·)清除能力和还原能力的测定,研究了粗多糖及纯化后多糖的抗氧化能力。结果表明:DEAE-52离子交换层析和Sepharose CL-6B凝胶排阻层析对鹿茸多糖分离效果较好,可以分离纯化得到一种单一多糖;粗多糖和纯化后多糖对DPPH·、·OH、O2-·均有清除作用,且具有一定的还原能力,纯化后多糖抗氧化活性和还原能力均大于粗多糖。     

桦褐孔菌多糖的分离纯化及其抗氧化活性测定

以桦褐孔菌为原料,测定其化学组分,并采用水提醇沉法提取桦褐孔菌粗多糖（IOP）。将获取的桦褐孔菌粗多糖进行脱蛋白、脱色素的初步纯化,然后利用DEAE-52纤维素层析柱及Sephadex-100凝胶柱对多糖提取液进行分离纯化,通过抗氧化活性筛选出活性较高的多糖组分,并通过高效液相色谱分析多糖组分的纯度。实验结果表明,桦褐孔菌子实体的化学成分组成丰富,其中多糖13.10%±0.31%、还原糖4.21%±0.40%、蛋白质2.70%±0.71%、灰分9.60%±0.31%。通过对桦褐孔菌粗多糖脱蛋白、脱色素的试验方法进行筛选,得到聚酰胺层析法为最佳的脱除方法。蛋白质的脱除率为93.1%、脱色率为75.8%,多糖的保留率为90.3%。IOP经过DEAE-52纤维素柱层析后得到四个单糖组分:IOP-1、IOP-2、IOP-3、IOP-4。对四个多糖组分进行抗氧化实验发现,IOP-2对DPPH自由基的清除率最高,清除率为81.9%。IOP-2经过Sephadex-100层析柱后获得两个多糖组分:IOP-2a、IOP-2b。对比其抗氧化活性,筛选出活性较高的多糖组分为IOP-2a。采用高效液相色谱法鉴定多糖组分IOP-2a,只检查出一个对称峰,说明IOP-2a为均一性多糖。     

葛根多糖纯化工艺及其抗氧化性能研究

目的:以葛根为原料,采用大孔树脂法分离纯化葛根多糖,研究其抗氧化性质。方法:通过对葛根多糖吸附及解吸筛选出最优树脂,分析吸附解吸时间、样液浓度、样液pH以及乙醇的体积分数对多糖纯化的影响,在静态分析条件下再运用层析柱法进行动态纯化,对纯化后的葛根多糖进行抗氧化分析。结果:D101树脂分离纯化效果较好,其对葛根多糖静态吸附和解吸最佳工艺条件吸附时间为8 h,解吸时间为3 h,吸附浓度0.75 mg/mL,样液pH6.0,乙醇解吸体积分数为60%,其对动态吸附和解吸最佳工艺条件为上样液质量浓度1.0 mg/mL,解吸剂体积(60%乙醇)51 mL,在此条件下纯化的葛根多糖纯度达到55.34%。经纯化后的葛根多糖对DPPH·和·OH具有较强的清除作用,最大清除率分别为81.74%和85.11%。结论:大孔树脂法纯化葛根多糖工艺条件合理,且纯化效果好,杂质去除率高,纯化后的葛根多糖抗氧化性得到提高。     

冬枣多糖的分离纯化及抗氧化活性研究

目的：分离纯化冬枣多糖,并研究其组分、结构特征和抗氧化活性。方法：采用水提醇沉、脱蛋白脱色、DEAE-52纤维素柱和Sephadex G-100凝胶色谱柱分离纯化冬枣多糖;利用Sephadex G-100凝胶色谱柱进行纯度鉴定和分子质量的测定;通过紫外光谱、红外光谱、气相色谱法进行了初步结构分析;采用邻二氮菲法和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）体系对纯化多糖进行抗氧化活性的研究。结果：冬枣多糖经DEAE-52分离和Sephadex G-100纯化得到2 个组分DPA和DPB,经Sephadex G-100鉴定均为均一组分,DPA和DPB分子质量分别为1.04×104、3.02×105 D,不含蛋白质和核酸,为吡喃型糖苷环骨架,DPA的单糖组成为阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物质的量比为6.66∶1.00∶6.75∶2.09;DPB的单糖组成为鼠李糖、阿拉伯糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖,其物质的量比为4.33∶10.90∶1.00∶3.25∶4.78;DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性,随着多糖质量浓度的增加,其抗氧化活性增强,在质量浓度为8 mg/mL时对羟自由基清除率分别为28.52%、78.79%,在质量浓度为0.4 mg/mL时对DPPH自由基清除率分别为9.97%、24.54%。结论：DPA和DPB均具有一定的抗氧化活性。     

茶粕多糖纯化及其理化特性、抗氧化和抑菌活性

以热水浸提法提取的茶粕多糖(TSCP)为原料,采用DEAE-Sepharose离子柱纯化,研究茶粕多糖和纯化组分的理化特性、抗氧化性以及抑菌活性。结果表明,纯化后的茶粕多糖主要组分(TSCP-1、TSCP-2)均为硫酸根多糖,主要由葡萄糖组成。TSCP-1和TSCP-2对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有较好的抑制效果,TSCP-1和TSCP-2对大肠杆菌的抑菌直径为12.4、13.1 mm,对金黄色葡萄球菌的抑菌直径为12.5、11.2 mm。原茶粕多糖粗品对DPPH、ABTS和·OH自由基清除率均优于纯化组分,且清除率随多糖浓度升高而增大,并于10 mg/mL达到最大清除率,分别为59.15%、45.23%和50%。因此,茶粕多糖具有潜在的抗氧化效果和抑菌效果。     

裂褶菌胞内多糖的提取纯化及生物活性分析

为提高裂褶菌胞内多糖得率,并研究裂褶菌多糖纯化组分的生物活性,本研究采取超声波破碎和热水浸提相结合的方法提取裂褶菌胞内粗多糖,利用响应面法对提取条件进行优化,通过DEAE-52离子交换柱层析和Sephadex G-100凝胶柱层析对提取的粗多糖进行分离纯化,并进行结构表征、抗氧化性和抑菌性试验。结果表明,裂褶菌胞内粗多糖的最优提取条件为:提取温度90 ℃,水料比30:1,超声时间30 min,超声功率230 W,裂褶菌胞内粗多糖得率达到了18.14%±0.33%。纯化多糖组分NSPG-1为β型吡喃糖,分子量为1.05×106 Da,NSPG-1多糖具有较好的抗氧化性和抑菌性,其对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基的IC₅₀值分别为6.97、1.07和11.41 mg/mL,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的IC₅₀值分别为7.56、12.54和10.42 mg/mL。本研究结果为裂褶菌多糖的工业化生产和开发利用提供了基础。     

沙棘多糖分离纯化及抗氧化活性

分离纯化沙棘多糖（sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) polysaccharides,SBP）,并对其单糖组分、结构表征及体外抗氧化活性进行分析。通过水提醇沉、Sevag法除蛋白得到沙棘粗多糖,利用DEAE-52纤维素柱对其进行分离纯化得到中性多糖SBP-I和酸性多糖SBP-II、SBP-III 3 种组分。单糖组分结果表明,SBP-I由物质的量比为1.18∶1∶2.20∶32.17∶1.45的阿拉伯糖、木糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖组成;SBP-II由物质的量比为1∶0.28∶1.02∶0.20的木糖、甘露糖、葡萄糖及半乳糖组成;SBP-III由物质的量比为1∶2.15∶0.28的木糖、葡萄糖及半乳糖组成;红外光谱测定表明,3 种组分均具有多糖的特征吸收峰;体外抗氧化实验结果表明,粗多糖及3 种纯化多糖组分均具有较好的抗氧化性且随样品质量浓度的增加抗氧化活性也随之升高,抗氧化能力大小顺序为：VC＞SBP-III＞SBP-II＞SBP-I＞粗多糖。     

硫酸化修饰对红枣多糖结构及抗氧化活性的影响

目的：探究纯化红枣多糖ZJP-1和硫酸化红枣多糖S-ZJP-1的结构和抗氧化活性之间的关系。方法：以残次红枣为原料,经热水浸提、DEAE-52离子交换色谱及Sephadex-200葡聚糖凝胶柱层析纯化得到纯化红枣多糖(ZJP-1),通过氯磺酸—吡啶法硫酸化修饰获得红枣多糖硫酸化衍生物(S-ZJP-1)。结果：ZJP-1和S-ZJP-1均由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖3种单糖组成,但是比例有所不同。两种多糖具有多糖特征吸收峰,S-ZJP-1具有硫酸基的特征吸收峰,表示硫酸化修饰成功。ZJP-1和S-ZJP-1不具有三股螺旋结构,表观呈片状结构。活性试验结果证实多糖ZJP-1和S-ZJP-1对DPPH自由基具有显著的清除活性,并具有一定的还原力,当多糖质量浓度达到0.5 mg/mL时,DPPH自由基清除活性分别为40.4%和47.6%,还原力分别为0.419和0.531。结论：硫酸化修饰的红枣多糖抗氧化活性更高,是一种良好的天然抗氧化剂。     

小球藻胞内多糖提取纯化及其抗氧化活性

为提高小球藻胞内粗多糖得率,并探究小球藻胞内多糖纯化组分的抗氧化作用。本研究采取超声波破碎和热水浸提相结合的方法提取小球藻胞内粗多糖,利用响应面法进行提取条件优化,在此基础上,采用阴离子交换柱和葡聚糖凝胶柱层析对提取得到的粗多糖进行分离纯化,并进行结构表征和抗氧化试验。响应面结果显示,小球藻胞内粗多糖最优提取条件为:NaOH质量分数为2.0%,料液比为1:25（g/mL）,超声功率为200 W,超声时间为20 min,提取温度为80 ℃,提取时间为1.5 h,在此条件下,小球藻胞内粗多糖的得率为18.086%±0.143%。结构表征和体外抗氧化结果显示,纯化多糖（Purification of intracellular polysaccharide,SCIP）,主要由葡萄糖、鼠李糖及半乳糖成分组成,是一种含有糖醛酸的吡喃糖。其在20 mg/mL时,对1,1-二苯基-2-苦基肼（1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基的清除率最大,为75.64%±1.56%,在25 mg/mL时,对羟基自由基清除率最大,为71.08%±0.58%,IC₅₀分别6.42 mg/mL和8.59 mg/mL。研究结果为深入了解小球藻胞内多糖理化性质及小球藻多糖的开发利用提供基础。