酶法制备联合Plastein反应修饰牡蛎ACE抑制肽工艺优化

以牡蛎为原料,采用酶解联合Plastein反应修饰的方法,获得高活性血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme,ACE)抑制肽。以ACE抑制率和水解度为指标,对比胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶这5种蛋白酶对牡蛎肉的酶解效果,筛选出木瓜蛋白酶最佳。通过单因素试验和正交试验对酶解工艺进行优化,得到最佳酶解工艺为料液比1∶8(g/m L)、加酶量2.0%、温度65℃、时间1.0 h、pH6.0,此条件下酶解产物的ACE抑制率可达到63.30%,在此基础上采用Plastein反应对酶解产物进行修饰,以游离氨基酸减少量和ACE抑制率为指标,考察反应过程中酶种类、底物质量分数、加酶量、时间和温度对修饰结果产生的影响。通过该反应的修饰,得到选用中性蛋白酶、底物质量分数40%、加酶量1.0%、温度30℃、时间2.5h、pH7.0时,ACE抑制率最高可达82.31%,比修饰前提高了19%。     

龙须菜蛋白的提取工艺优化及降血压组分制备

目的 优化龙须菜蛋白的提取工艺,并制备降血压组分。方法 从胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选能获得最佳蛋白提取率的蛋白酶,采用单因素试验考查pH、底物浓度、酶解温度、酶底比、酶解时间对蛋白提取率和ACE抑制率的影响,采用响应面法确定最佳工艺条件,采用超滤膜分离技术龙须菜蛋白酶解液中制备血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)抑制肽,并考察其ACE抑制率。结果 最佳酶解工艺条件为:pH 8.4、底物浓度18%、温度55℃、酶底比2.0%、碱性蛋白酶酶解3 h,酶解液的蛋白提取率为(19.54±0.56)%、ACE抑制率为(91.12±0.17)%;将酶解液分别通过10、5、1 kDa超滤膜,利用ACE抑制率来验证降血压活性, 1 kDa超滤膜的酶解液ACE活性最高,达到(71.37±0.22)%。结论 龙须菜可作为分离纯化制备龙须菜降血压肽的优质资源。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

酶解花生蛋白制备血管紧张素转化酶抑制肽

采用碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶、复合风味酶（固／液）、木瓜蛋白酶水解花生蛋白制备血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽,通过体外检测法测定其ACE抑制率。结果表明,碱性蛋白酶水解物的ACE抑制率最大。根据Box—Behnken的中心组合实验设计原理对碱性蛋白酶酶解工艺进行优化,结果表明：当温度为53．7℃,底物浓度为7．72％,酶与底物质量比4．18％,pH=8．0,水解时间为120min时,其ACE抑制率可达72．78％。     

酶解法制备牡丹籽ACE抑制肽及其稳定性

以牡丹籽粕为原料,用酶解法制备ACE抑制肽及其稳定性研究。以血管紧张素转化酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制率为指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和风味蛋白酶中筛选出最佳ACE抑制肽制备酶为中性蛋白酶。以单因素实验为基础,进行酶解条件的响应面优化,结果显示牡丹籽ACE抑制肽酶法制备的最优条件为:底物浓度2%,pH7.5,加酶量7200 U/g,酶解温度43℃,酶解时间2 h,此时酶解液ACE抑制率可达到86.93%±2.38%。此外,稳定性分析显示该ACE抑制肽具有良好的温度和酸碱稳定性,在温度20~100℃与pH2~10的环境下,ACE抑制活性没有显著变化(P>0.05),并且经过体外胃肠模拟消化后,ACE抑制活性变化不显著(P>0.05),仍能保持良好的抑制活性。     

酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的工艺研究

为获取酶解蛋清蛋白制备血管紧张素转化酶(ACE)抑制肽的工艺参数,研究4种蛋白酶酶解蛋清蛋白所得产物对ACE的抑制活性,筛选出胰蛋白酶作为制备蛋清蛋白ACE抑制肽的适宜用酶。运用响应曲面法研究酶解时间、底物浓度([S])和酶与底物质量比([E]/[S])对制备ACE抑制肽工艺的影响,建立以上3因素与ACE抑制率关系的数学模型。结果确定胰蛋白酶酶解蛋清蛋白制备ACE抑制肽的适宜酶解条件为酶解时间4.87h、[S]3.06%、[E]/[S]2.91%、酶解温度45℃、pH7.4,此条件下制备的蛋清蛋白酶解产物ACE抑制率达到50.73%。     

鲍鱼脏器酶解工艺条件的优化

以鲍鱼内脏为原料,采用碱性蛋白酶水解鲍鱼内脏制备血管紧张素转换酶（ACE）抑制肽。在单因素试验的基础上,采用响应面法和Box-Behnken试验优化酶解鲍鱼内脏的工艺条件。以ACE抑制率为考察指标,探讨了酶解温度、加酶量和酶解时间对ACE抑制率的影响。试验结果表明,最优工艺条件为酶解温度52 ℃,pH 9.0,料液比1∶3（g∶mL）,加酶量4.5%,酶解时间5.5 h,此条件下获得的鲍鱼内脏酶解产物的ACE抑制率为79.72%。     

酶解虾壳蛋白制备ACE 抑制剂的工艺优化

以虾壳粉为原料,以水解度和ACE抑制率为指标,利用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶进行酶解,其中中性蛋白酶和碱性蛋白酶有较高的ACE抑制活性,因此对碱性蛋白酶和中性蛋白酶的工艺条件进一步优化。结果表明：碱性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度60℃、pH9.5、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量4000U/g、酶解时间2.5h,在此条件下ACE抑制率最高,为67.70%,水解度为69.79%;中性蛋白酶酶解工艺优化条件为：温度50℃、pH7.0、底物质量浓度2.5g/100mL、加酶量2000U/g、酶解时间2h,在此条件下ACE抑制率最高,为84.04%,水解度为26.76%。提示中性蛋白酶酶解能够产生更多的ACE抑制肽,是酶解虾壳蛋白制备ACE抑制肽的较优酶。     

混合酶法制备紫菜蛋白降压肽

采用混料设计,研究混合酶配比,优化水解条件;HPCE法测定血管紧张素转换酶(ACE)抑制率。研究混合酶法制备紫菜蛋白降压肽的优化工艺。建立混合酶比例与降压活性的数学模型,确定最佳酶配比:Alcalase碱性蛋白酶38.1%,Neutrase中性蛋白酶31.9%,胰蛋白酶30.0%。最佳水解条件:底物质量分数5%、加酶量3%、pH 8.5、温度50℃、时间90 min。混合酶较单一酶制备降压肽的ACE抑制率提高了44.33%～86.45%。     

龙须菜蛋白酶解制备ACE抑制肽的工艺优化

通过酶解法酶解龙须菜蛋白制备ACE抑制肽,考察风味蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶的龙须菜蛋白酶解液对ACE抑制活性,并对酶解工艺进行优化。最后选出胰蛋白酶为ACE抑制肽的适宜蛋白酶,在单因素的基础上,采用响应面分析法对胰蛋白酶的酶解工艺进行优化。结果表明：最佳酶解工艺为：pH为8.0,酶底比为6%,温度为35℃,在此条件下,制备的多肽（2.0 mg/mL）对ACE的抑制率为72.37%。     

碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉制备ACE抑制肽研究

以水解度为指标,对碱性蛋白酶酶解魔芋飞粉蛋白条件进行优化;测定不同酶解阶段及不同分子质量魔芋多肽的ACE抑制活性,筛选具有高ACE抑制活性的降血压多肽。结果表明:在底物质量分数2.25%,加酶量3 500 U/(g底物),温度55℃,pH 7.82的条件下酶解270 min,酶解产物的ACE抑制率达到最大值94.6%,此时水解度9.97%,多肽得率12.26%;酶解液经浓缩、干燥得到的魔芋多肽粉呈淡黄色,多肽含量52.62%,粗蛋白含量62.30%;用葡聚糖凝胶G-25和葡聚糖凝胶G-15串联柱分离得到2个具有高ACE抑制活性的多肽组分,其分子质量分别为1 500和1 000 Da,半抑制质量浓度分别为0.12 mg/mL和0.088 mg/mL。     

汽爆辅助酶解制备鱼皮ACE抑制肽工艺优化

为有效利用鱼皮制备降血压肽,以罗非鱼皮为原料,采用响应面分析法优化汽爆辅助酶解法制备血管紧张素转换酶(angiotension converting enzyme,ACE)抑制肽工艺条件。结果表明,汽爆辅助酶解制备鱼皮ACE抑制肽的最优工艺参数为:汽爆压力0.6 MPa、保压时间0.5 min、底物浓度2%、酶底比0.92%、酶解时间2 h、pH值8.4、酶解温度56℃。在此条件下鱼皮酶解产物ACE抑制率理论值为94.97%,实际值为93.16%,其相对分子质量主要分布于307 Da^3323 Da之间。本研究结果为鱼皮降血压肽的高效制备、生物活性等方面的研究提供了理论依据。     

酸枣仁ACE抑制肽酶解工艺优化

本试验以脱脂后的酸枣仁渣通过碱溶酸沉法提取得到的酸枣仁蛋白为研究对象,以血管紧张素转化酶(ACE)抑制率和水解度为指标,筛选复合酶种类,采用响应面分析法,以中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、pH、底物浓度、酶解温度、酶解时间为试验因素,优化酸枣仁ACE抑制肽最佳酶解工艺参数。结果表明:筛选出中性蛋白酶和碱性蛋白酶作为复合酶,最适酶添加量确定为6000 U/g,5个因素对ACE抑制率和水解度的影响由大到小的顺序为:酶解温度、酶解时间、pH、中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例、底物浓度。通过拟合方程分析,得到酸枣仁ACE抑制肽酶解的最佳工艺条件为:中性蛋白酶/碱性蛋白酶比例为2.1:1、酶解温度为54 ℃,底物浓度为3.1%,pH为7.5,酶解时间为62 min。在此条件下,复合酶解酸枣仁蛋白酶解液的实际ACE抑制率和水解度分别为（79.46%±0.49%）和（31.45%±0.85%）,与理论值接近。制备得到酸枣仁ACE抑制肽与阳性对照组卡托普利对比,酸枣仁ACE抑制肽的ACE抑制率大小为（79.46%±0.49%）,与卡托普利的ACE抑制率偏差为（19.28%±0.12%）,证明酸枣仁ACE抑制肽具有显著降压效果。本研究证明了酸枣仁蛋白通过酶解有效得到ACE抑制肽并优化其酶解工艺,旨在为酸枣仁渣废物再利用提供参考方向和理论依据。     

益生菌发酵制备金针菇血管紧张素转化酶抑制肽

为了获得高活性的金针菇血管紧张素转化酶（ACE）抑制肽,该研究对益生菌发酵制备金针菇ACE抑制肽的工艺条件进行了优化,并采用超滤法对ACE抑制肽进行了分级分离和活性鉴定。试验以ACE抑制率为评价指标,对枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）和黑曲霉（Aspergillus niger）三种益生菌进行了筛选,优选出沉淀分离活性肽的最适pH,然后采用单因素和响应面设计对发酵条件进行了考察。结果表明,确定枯草芽孢杆菌为最适菌种;沉淀ACE抑制肽的最适pH为6;最佳发酵条件为蒸馏水与金针菇粉液料比5∶1(mL∶g)、发酵时间16 h、发酵温度37℃、金针菇粉用量35 g/500 mL三角瓶,于此条件下ACE抑制率实测值为（51.25±1.02）%;截留分子质量<3 kDa的ACE抑制肽活性最强。     

酶法制备鱼降血压肽的工艺优化及其组分分析

为了开发鲬鱼蛋白,以体外血管紧张素转换酶(ACE)抑制率为指标,通过适宜酶酶解鲬鱼蛋白质制备降血压活性肽。根据供试酶的水解进程筛选适宜水解酶,在单因素试验的基础上,采用响应面分析法优化水解条件,凝胶过滤层析法测定活性肽相对分子质量分布。结果表明,Alcalase是供试酶中最适的水解酶,最优水解条件为:温度48.9℃,pH7.93,加酶量为32396.6 U/g·pro,固液比1:5 g/mL,水解时间2.5 h。在此条件下,酶解液的ACE抑制率IC₅₀=0.269 mg/mL;酶解物经Sephadex G-15凝胶过滤层析得到三个组分,相对分子质量分别为635、258、67,其中的2号组分(C=0.74 mg/mL) ACE抑制活性相对较高,达到89.09%。     

大蒜降压肽的制备及超滤分离

为了研究大蒜降压肽的酶解制备与超滤分离工艺,采用响应面法优化制备工艺,酶解后利用超滤技术获得不同分子量范围的组分并进行ACE抑制活性评价。最佳制备工艺为碱性蛋白酶处理、温度50℃、pH11、底物浓度45 g/L、酶底比3%、酶解时间1 h,该条件下ACE抑制率为83.91%±0.13%,半抑制浓度为(157.87±0.44)μg/mL。分子量3 kDa以下部位活性最为显著(P<0.05),优化后的超滤工艺为操作压力0.25 MPa,温度25℃,溶液浓度4%,此时3 kDa超滤膜的膜通量为7.32 L/(m2·h),ACE的半抑制浓度为(63.27±0.25)μg/mL。氨基酸分析结果表明酸性氨基酸、疏水性氨基酸及天冬氨酸、谷氨酸含量较高,分别为35.78、32.86、21.66、14.12 mg/100 mL,分子量分布显示2000~2500 Da部分最为丰富,占比为49.50%。本研究为大蒜蛋白的开发利用提供了新的思路,具有一定的理论水平和实际应用价值。     

螺旋藻蛋白水解产物对ACE抑制活性的研究

采用胃蛋白酶和胰蛋白酶水解螺旋藻藻胆蛋白制备ACE 抑制肽,通过体外实验测定其ACE 抑制率,以ACE 抑制率为指标确定两种蛋白酶的水解条件。结果表明：胃蛋白酶水解条件为：水解温度37℃,酶与底物比1:50,pH3.0,底物质量分数5%,水解产物的ACE 抑制率为82.16%,其IC50 值为0.104mg/ml;胰蛋白酶水解条件为：水解温度42℃,酶与底物1:50,pH8.0,底物质量分数6%,水解产物的ACE 抑制率为93.54%,其IC50值为0.017mg/ml。此外,胃蛋白酶水解产物再用胰蛋白酶水解,其产物的IC50 值为0.087mg/ml。