L-苏氨酸发酵法工业生产的研究

采用乳糖发酵短杆菌(Brevibacterium lactofermentum) ZT-1株进行5001和6000罐L-苏氨酸发酵扩大试验,在以工业葡萄糖、硫酸铵为主原料的培养基中发酵,可产20g/1以上的L-苏氨酸,最高达到24.8g/1。发酵液经离子交换法提取和结晶法精制,获得符合国内外药典标准的医药级产品,收率可达40%以上。现已实现工业化批量生产。     

γ-氨基丁酸测定方法的研究

在用乳酸菌发酵生产γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)时,为了对发酵液中的GABA进行定性与定量分析,本文对纸层析法、高效液相色普法(HPLC)进行了研究,结果发现用本文中实验所确定的改良纸层析法进行初步的定性与定量分析是可行的,再配合PITC柱前衍生-紫外检测的HPLC法进行精确定量分析,结果准确,重复性好。     

示波极谱法测定食品中人工合成色素的探讨

目前对人工合成色素的检验方法很多，有比色法、纸层析法、薄层层析法、高效液相色谱法等。这些方法各有优缺点，应用起来有一定困难，而山东电讯七厂生产的MP-1型溶出分析仪用于检测各类食品中的人工合成色素，比化学法更省时省力，检测快速结果准确，仪器价格比高效液相色谱仪低许多，比较适合基层单位使用。     

γ-氨基丁酸测定方法的研究

在用乳酸菌发酵生产γ-氨基丁酸（γ-aminobutyric acid,GABA）时,为了对发酵液中的GABA进行定性与定量分析,本文对纸层析法、高效液相色普法（HPLC）进行了研究,结果发现用本文中实验所确定的改良纸层析法进行初步的定性与定量分析是可行的,再配合PITC柱前衍生-紫外检测的HPLC法进行精确定量分析,结果准确,重复性好。      

碳源对L-苏氨酸发酵的影响

以L-苏氨酸生产菌TRFC为供试菌株,研究了碳源对L-苏氨酸发酵的产量和糖酸转化率的影响。采用补料分批发酵工艺生产L-苏氨酸,利用氨基酸分析仪测定发酵液中L-苏氨酸的产量。确定了发酵的最佳碳源及其补料方式,通过10L罐补料分批发酵36h,产酸可达118.9 g/L,糖酸转化率为47.6%。     

利用响应面法优化L-苏氨酸发酵条件

采用响应面设计方法对E.coli TRFC苏氨酸发酵培养基及培养条件进行了优化。用部分因子分析法研究了原始发酵培养基及培养条件对响应值的影响程度,发现蔗糖的质量浓度及接种量对苏氧酸产量的影响显著。利用最陡爬坡实验、中心旋转组合设计结合响应面分析确定了蔗糖的质量浓度及接种量(58.739 g/L,3.46%)。在优化条件下进行5L发酵罐实验,L-苏氨酸的产量达到121.20 g/L,比未优化条件下提高了12.43%。     

发酵液中香兰素测定方法的研究

对发酵液中香兰素的定性(薄层层析法)及定量方法(硫代巴比妥酸光度法和高效液相色谱法)进行了初步研究，结果表明，薄层层析法是一种很好的定性、半定量方法；硫代巴比妥酸光度法和高效液相色谱法具有良好的相关性和较高的准确度和精密度，说明除了高效液相色谱法外，硫代巴比妥酸光度法是一种既简单又准确的定量方法。     

柱前衍生反相高效液相色谱法同时测定氨基酸保健饮品中16种氨基酸的含量

建立反相高效液相色谱法(RP-HPLC)同时测定氨基酸保健饮品中16种氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸、丝氨酸、甘氨酸、组氨酸、牛磺酸、苏氨酸、丙氨酸、脯氨酸、缬氨酸、蛋氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、赖氨酸)的分析方法.采用异硫氰酸苯酯(PITC)柱前衍生,RP-HPLC经梯度洗脱后检测饮料中16种氨基酸的含量.使用DiamonsilTMCl8色谱柱(250 min×4.6 mm,5μm),流动相A为0.1 moL/L乙酸钠,B为乙腈;流速为1.0 mL/min;检测波长为254 nm;柱温40 ℃;进样量20"L.在各氨基酸的线性范围内,16种氨基酸的线性相关系数r在0.9996～0.9999,平均回收率为96.0%～104.0%.日内精密度RSD为0.51%～1.87%,日间精密度RSD为0.52%～1.89%.结果表明本方法专属性强.操作方便,灵敏度高,可用于饮料中氨基酸的含量检测.     

L-苏氨酸产生菌的原生质体融合育种研究

采用原生质体融合等技术,以谷氨酸棒杆菌GY360 (Mer+ AECr+ AHVr)为亲株(A)与乳糖发酵短杆菌HS58 (Ala-+ AHVr )为亲株(B)进行原生质体融合,选育出一株产L-苏氨酸菌NRH66,该菌株遗传标记为Met-+ Ala-+ AEC+ AHVr,在摇瓶上发酵可产L-苏氨酸46.2g/L,比亲株A产酸提高了17.7%,比亲株B产酸提高64%.     

高效液相色谱法测定奶粉及其他乳制品中的L-羟脯氨酸

建立了柱前衍生反相高效液相色谱法测定奶粉及其他乳制品中L-羟脯氨酸的方法.采用酸水解样品,经6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚氨基甲酸酯(AQC试剂)衍生水解样品中的L-羟脯氨酸,以磷酸盐缓冲溶液、乙腈、水梯度洗脱,流速1.0ml/min,通过symmetry C18柱将L-羟脯氨酸与其他18种氨基酸分离.紫外检测器在248nm波长下检测.测定结果显示,在0～2.05mmol/L范围内,标准曲线呈良好的线性关系(r=0.9991),加样回收率为95.1%～101%,方法精密度RsD(n=7)为1.3%.该方法具有简单、稳定、灵敏度高、准确等优点.     

柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱荧光法 测定蔬菜中草甘膦

目的建立快速、准确的蔬菜中草甘膦的柱前衍生-固相萃取-高效液相色谱荧光测定方法。方法蔬菜提取液样经衍生后经固相萃取,过C_(18)色谱柱,以甲醇-水(70:30,V:V)为流动相,流速1.0 mL/min,柱温为35℃,荧光检测激发波长为265 nm,发射波长为3 15 nm。结果草甘膦的加标回收率在89.2%~99.2%范围,其相对标准偏差均5.0%,在0.5~20.0 ng/mL范围呈现良好的线性,其回归系数0.999,最低定量检出限(LOQ)为0.02 mg/kg。结论本方法回收率高,净化效果好,杂质干扰少,可满足蔬菜中痕量草甘膦的残留检测要求。     

高效液相色谱法同时测定魔芋粉中葡甘聚糖和淀粉含量

为了精确测定魔芋粉中葡甘露聚糖（KGM）和淀粉含量,建立了高效液相色谱法。采用酸水解法将魔芋粉水解为葡萄糖和甘露糖,通过1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（PMP）对魔芋粉的水解产物进行衍生化处理,利用高效液相色谱紫外检测器同时测定魔芋粉中葡甘露聚糖（KGM）和淀粉含量。该方法测定4种魔芋粉中葡甘聚糖和淀粉含量相对标准偏差（relative standard deviations,RSD）≤4.40%,葡甘聚糖回收率在87.98%~103.31%之间,RSD≤5.25%;淀粉回收率在91.50%~108.05%之间,RSD≤7.67%。该方法可用于魔芋粉中葡甘露聚糖和淀粉含量的同时测定,并对魔芋粉的分级控制具有重要意义。     

高效液相色谱法测定紫菜中牛磺酸含量

采用高效液相色谱(HPLC)法测定紫菜中牛磺酸含量。用邻苯二甲醛进行柱前衍生,以XDB C18 (150mm×4.6mm,5μm)色谱柱为分析柱,甲醇- pH5.3醋酸盐缓冲液(30:70)为流动相,流速1.0mL/min,检测波长315nm,温度30℃。牛磺酸质量浓度在5.0～300.0μg/mL范围内线性关系良好(R2＝0.9991),平均回收率(n＝6)为98.8%,相对标准偏差为1.8%,衍生物在15min内的稳定性良好,最低检出限0.25μg/mL。用本研究建立的HPLC法测定紫菜中牛磺酸含量为(1.04±0.07)%(干质量)。用此方法测定牛磺酸含量不受紫菜中其他成分干扰,简单、快速、专属性强,灵敏度高,结果准确、可靠。     

基于超声萃取-超声辅助柱前衍生高效液相色谱法毛织物中甲醛含量的测定

建立了一种快速、灵敏的超声萃取-超声辅助柱前衍生高效液相色谱法测定毛料中甲醛含量的方法。采用0.1%十二烷基磺酸钠溶液作为萃取溶剂,在30℃超声萃取15min之后,以乙腈-磷酸盐缓冲液 (PH=2)配制的0.03%的DNPH溶液作为衍生化试剂,超声辅助衍生化15min。采用的衍生溶液色谱分离柱为SunFireTMC18柱（4.6 nm×150 nm, 5μm）,流动相为乙睛和水,体积比60:40,流 速1.0 mL/min, 在350 nm 波长下检测。分别添加10、50、150 mg /kg 等3个浓度水平的甲醛,甲醛的回收率为81.36～109.80%,相对标准偏差(RSD)＜10.0%。以3倍信噪比对定量限进行了估计,确定了毛料中甲醛的定量限≤5.0mg/kg。结果表明,该方法与传统的毛料中甲醛含量测定方法相比,具有前处理时间少、操作简便、重复性好、结果准确等优点。     

柱前衍生反相高效液相色谱法测定新疆特色食品馕中氨基酸含量

目的建立柱前衍生反相高效液相色谱法(reversed-phase high performance liquid chromatography,RP-HCLP)测定新疆特色食品馕中17种氨基酸含量的检测方法。方法通过优化酸水解参数,并以6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚胺基甲酸酯为衍生试剂,用乙腈为流动相A,水为流动相B,磷酸盐缓冲液溶液为流动相C进行梯度洗脱,柱温37℃条件下用AccQ-Tag色谱柱(3.9 mm×150 mm, 4μm)进行分离,采用反相-高效液色谱法荧光检测器(激发波长250 nm、发射波长395 nm)进行测定。结果当取样量为100 mg、水解液加入体积为10 mL、水解温度为115℃、水解时间为24 h时,水解效果最好。17种氨基酸线性回归方程的相关系数在0.9985以上(n=3),检出限为0.011~0.058mg/L,回收率为81.6%~116.2%,相对标准偏差为0.41%~6.94%(n=3)。结论该方法操作简单、灵敏度高、线性关系和回收率好,适用于新疆特色食品馕中氨基酸含量的测定。     

2,4-二硝基苯肼柱前衍生-高效液相色谱法测定水中的微量乙醛

目的探讨2,4-二硝基苯肼(2,4-dinitrophenylhydrazine,DNPH)柱前衍生高效液相色谱法测定水中微量乙醛的方法。方法将样品在60℃水浴中用DNPH衍生化20min,由正己烷萃取,以乙腈:水(52:48,V:V)为流动相,于365 nm波长下迚行测定。结果乙醛在0.015～1.00 mg/L浓度范围内线性关系良好,相关系数r为0.9999,加标回收率为80.2%～99.8%,相对标准偏差为4.6%～7.4%,方法最低检出浓度为0.003 mg/L。结论该方法样品前处理简单快捷、检出限低、灵敏度高,能够满足生活饮用水卫生规范的要求,幵且能够同时测定大批量样品,为解决国家标准中检测方法最低检出限与其乙醛的限值相矛盾的问题提供参考。     

柱前衍生液相色谱荧光检测法测定婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖

目的建立一种柱前衍生高效液相色谱荧光检测法测定婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖含量的分析方法。方法样品用2-氨基苯甲酰胺衍生后,经色谱柱分离,用高效液相色谱-荧光检测器检测,外标峰加和分段法定量。结果建立的方法可以测定婴幼儿配方乳粉中的低聚半乳糖含量。采用麦芽糖、麦芽三糖、麦芽四糖、麦芽五糖、麦芽六糖和麦芽七糖建立标准曲线,在1～250μg/mL线性范围内相关系数(r~2)大于0.999。回收率为85.9%～103.5%,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)小于5%,检出限为1.0 g/kg,定量限为3.0 g/kg。结论本方法方法重现性好,精密度高,解决了婴幼儿配方乳粉中高含量乳糖对低聚半乳糖测定的干扰问题,可以为食品中低聚半乳糖的定量提供良好的解决方案。     

两种柱前衍生RP-HPLC法测定酱腌菜中生物胺的比较

本研究分别采用4-氟-3-硝基三氟甲苯(FNBT)柱前衍生RP-HPLC紫外检测分析方法(简称FNBT衍生法)和丹磺酰氯柱前衍生RP-HPLC紫外检测分析方法(简称DNS-Cl衍生法)测定酱腌菜中生物胺含量,并比较这两种方法对酱腌菜中8种生物胺(组胺、色胺、β-苯乙胺、腐胺、酪胺、尸胺、亚精胺及精胺)检测的差异。结果表明,在浓度范围1~100mg/L内,两种方法对8种生物胺的检测呈现良好的线性相关性,相关系数R~2均大于0.999,FNBT衍生法的检出限(0.016~0.071mg/L)优于DNS-Cl衍生法(0.066~0.191 mg/L)。方法的精确度试验表明:FNBT衍生法的加标平均回收率(92.87%~100.18%)略优于DNS-Cl衍生法的加标平均回收率(83.52%~102.33%),两种方法的测量精密度RSD%均小于5%。DNS-Cl衍生法衍生试剂消耗大、操作繁琐,对生物胺检测的灵敏度低,而FNBT衍生法衍生试剂消耗少、操作简便、快速、灵敏度及准确性更高,适用于大批量食品中微量生物胺的快速、准确分析。用两种方法检测酱腌菜中8种生物胺的含量存在显著差异(p0.05)。     

柱前衍生-高效液相色谱法测定婴幼儿谷类辅食中的甲醛

目的建立柱前衍生-高效液相色谱法测定婴幼儿谷类辅食中甲醛含量的分析方法。方法样品中的甲醛经柠檬酸钠缓冲溶液和含有2,4-二硝基苯肼的乙腈混合体系衍生提取,生成的甲醛-2,4-二硝基苯腙经色谱柱Agilent Poroshell 120 EC-C18(4.6 mm×150 mm, 2.7μm)以乙腈-水(70:30, V:V)等度洗脱分离,柱温30℃,流速为0.5 mL/min,检测波长为355 nm,外标法定量分析。结果甲醛在0.025～2.00 mg/L质量浓度范围内线性关系良好且相关系数(r2)大于0.995,方法检出限和定量限分别为0.03 mg/kg和0.10 mg/kg,在3个加标水平(1.00、5.00和10.0 mg/kg)的平均加标回收率为86.8%～89.0%,相对标准偏差为0.7%～2.1%。结论该方法操作简便,灵敏度高,重现性好,适用于婴幼儿谷类辅食中甲醛含量的测定。     

在线柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留量

目的建立一种在线柱前衍生-高效液相色谱-荧光检测法测定牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留量。方法试样经饱和氯化钠水溶液盐析后,利用乙腈-二氯甲烷溶液提取,氮气吹干、10%(体积分数)N-甲基咪唑-乙腈溶液复溶、乙腈饱和正己烷多次净化。利用进样程序对净化后的溶液进行在线柱前衍生,高效液相色谱仪分离,荧光检测器检测,以保留时间定性,峰面积定量。结果结果表明,在25～400 ng/mL浓度范围内,标准曲线线性关系良好,相关系数r2大于0.999;该方法的回收率在94.8%～103.8%之间,相对标准偏差(relative standard deviation, RSD)均小于1.5。结论该方法非常简便,且具有较高的准确度、灵敏度和稳定性,适用于牛奶中乙酰氨基阿维菌素残留的检测。