具抗氧化功能益生菌菌株筛选及其对丙烯酰胺诱导肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

为提高发酵蓝莓汁中的胞外多糖（exocytopolysaccharide,EPS）含量,以蓝莓为原料,选择三株高产胞外多糖的乳酸菌,采用单因素法、响应面法（RSM）对发酵条件进行优化,筛选出影响最大的四个因素：初始pH、接种量、发酵温度、发酵时间。在此基础上,采用人工神经网络（ANN）和遗传算法（GA）求解得到最佳发酵工艺条件为植物乳杆菌9sh、发酵乳杆菌SR2-6、柠檬明串珠菌GM11的菌种比例2:1:1,乳糖6%,大豆肽0.6%,蓝莓汁初始pH4.5,接种量8%,发酵温度30 ℃,发酵时间60 h,此时EPS含量为3.537 g/L。研究表明RSM和ANN可用于优化发酵蓝莓汁产EPS工艺。     

抗氧化乳酸菌的筛选及其对小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

从36株分离自长寿老人粪便的乳酸菌中筛选高抗氧化活性菌株,利用过氧化氢（H₂O₂）建立大鼠小肠上皮细胞（IEC-6）氧化损伤模型,探究所筛选菌株对IEC-6细胞氧化应激的影响。结果表明,菌株HN-04、HN-05、HN-15有较强的体外抗氧化能力,其DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基清除能力分别为52.18%~57.16%、47.44%~52.38%、37.11%~43.31%,菌株对IEC-6细胞的黏附率分别为6.77%、6.92%和5.82%。在3株乳酸菌的干预作用下,氧化损伤细胞的存活率提高了5.31%~11.19%,细胞中的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活性和总抗氧化能力（T-AOC）分别提升12.03%~32.39%、21.20%~47.42%、36.10%~87.14%和23.55%~48.69%,丙二醛含量（MDA）降低20.98%~48.80%。所筛选的3株乳酸菌具有缓解细胞氧化应激损伤的作用,可作为天然抗氧化剂应用于功能性食品开发。     

黑灵芝多糖对丙烯酰胺诱导小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究黑灵芝多糖对丙烯酰胺（acrylamide,AA）所致的小肠上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：构建AA诱导小肠上皮细胞（intestinal epithelial cells,IEC）-6氧化损伤型,采用噻唑蓝比色法检测黑灵芝多糖对IEC-6氧化损伤的保护作用;同时测定细胞培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的漏出量,以及测定细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平。结果：与正常对照组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖对细胞增殖影响无显著性差异。与模型（AA）组相比,不同质量浓度的黑灵芝多糖溶液能够明显减轻AA对细胞的毒害作用,提高细胞生存率,降低细胞培养液中LDH的释放;降低MDA含量,提高细胞SOD和GSH-Px活性。结论：黑灵芝多糖可以通过提高细胞内抗氧化酶系的活性和抗氧化物质GSH-Px活性从而有效地减弱AA诱导的小肠上皮细胞氧化损伤。     

小麦低聚肽对体外肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

文中研究了小麦低聚肽对氧化应激损伤的体外肠上皮细胞的保护作用。将实验分为5组,对照Ⅰ(空白组0μmol/L H2O2)、对照Ⅱ(氧化应激组100μmol/L H2O2),处理Ⅰ、处理Ⅱ、处理Ⅲ(分别在对照组Ⅱ的条件下添加1、5、10 mg/m L小麦低聚肽),通过MTT法比较不同培养时间(12、24、48 h)小麦低聚肽对氧化应激损伤Caco-2细胞增殖率的影响,通过取培养至不同时间(12、24、48 h)的Caco-2细胞上清液、细胞裂解液,测定LDH、SOD、MDA含量变化。结果显示:1 mg/m L小麦低聚肽对损伤肠上皮细胞表现出显著的保护作用,细胞毒性降低、增殖率提高,细胞内SOD、MDA含量与氧化应激组相比均有显著性差异;小麦低聚肽对细胞的保护作用随着培养时间的延长而增强,24、48 h培养组与12 h培养组相比有显著性差异。小麦低聚肽对氧化应激损伤的体外肠上皮细胞有一定的保护作用,并且在一定范围内与浓度时间正相关。     

槟榔多糖对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

采用CCK-8法测定细胞的存活率、Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡率,利用蛋白质免疫印迹检测人结直肠腺癌细胞(Caco-2细胞)中抗凋亡蛋白Bcl-2、促凋亡蛋白Bax及细胞间紧密连接蛋白的表达情况,研究槟榔多糖对DMNQ诱发Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果表明：槟榔多糖能显著抑制促凋亡蛋白Bax的表达并同时促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,抑制DMNQ引起的细胞凋亡并减轻内质网应激,显著上调Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1、Occludin和Claudin 1的表达,维持细胞紧密连接的完整性,即槟榔多糖能显著改善DMNQ诱导的Caco-2细胞氧化损伤。     

鲈鱼抗氧化肽的稳定性分析及其对细胞氧化损伤的保护作用

目的:探究鲈鱼蛋白酶解物（Lateolabrax maculatus protein hydrolysates,LPH）的体外抗氧化活性及稳定性。方法:采用化学实验测定LPH的抗氧化活性以及分析pH、温度、金属离子（K+、Ca2+、Cu2+、Zn2+）和模拟胃肠道消化对其稳定性的影响,并利用过氧化氢诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型探究LPH对细胞氧化损伤的保护作用。结果:LPH具有较强的自由基清除活性,其DPPH和ABTS+自由基清除能力的IC₅₀值分别为2.13 mg/mL和31.53 μg/mL。LPH对pH（2.0~12.0）、温度（25~100 ℃）和K+（0.25~2 mmol/L）稳定,0.25~2 mmol/L的Ca2+和Cu2+能够提升其DPPH自由基清除率,而1 mmol/L以上的Zn2+会降低DPPH自由基清除率。此外,LPH具有良好的胃肠道稳定性。在过氧化氢诱导的Caco-2细胞模型中,LPH能够将氧化损伤的细胞存活率由58.02%显著增加至83.40%（P<0.05）,显著抑制细胞内活性氧的释放（P<0.05）并恢复细胞线粒体膜电位至正常水平。此外,LPH能够显著抑制细胞上清中乳酸脱氢酶水平至模型组的19.34%（P<0.05）并显著增加细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力（P<0.05）。结论:LPH具有较好的抗氧化活性及稳定性,在食品保健领域具有良好的应用前景。     

水飞蓟素对丙烯酰胺诱导人肝癌细胞氧化损伤的保护作用

研究水飞蓟素对人肝癌细胞系（human hepatocellular liver carcinoma cell line,HepG2）增殖的影响以及 对食品加工过程中产生的丙烯酰胺所致肝细胞毒性的预防效果,同时对其保护机制进行探讨。通过噻唑蓝法检测 水飞蓟素对HepG2细胞增殖的影响和对丙烯酰胺诱发HepG2细胞毒性的保护效果;利用荧光探针法对HepG2细胞 内活性氧的变化进行检测,并运用比色法分别检测细胞内脂质、蛋白质及DNA的氧化损伤标志物（丙二醛、蛋 白羰基和8-羟基脱氧鸟苷）含量;利用酶活力试剂盒检测细胞内过氧化氢酶（catalase,CAT）、超氧化物歧化酶 （superoxide dismutase,SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）活力的变化。结果显示, 12～96 μg/mL的水飞蓟素对HepG2细胞无毒性;水飞蓟素可以抑制丙烯酰胺引起的细胞存活率降低和氧自由基水平 升高,减少丙烯酰胺对脂质、蛋白质和DNA的氧化损伤,并提高细胞内抗氧化物酶CAT、SOD和GSH-Px活力。研 究证明,水飞蓟素能够缓解丙烯酰胺对肝细胞造成的氧化损伤。     

乳酸菌发酵乳蛋白水解物对RAW264.7细胞氧化损伤的保护作用

利用乳酸菌发酵乳蛋白水解物(milk protein hydrolysates, MPH)有助于提高乳酸菌水解蛋白的能力,促进功能成分的产生与挖掘。基于不同乳酸菌发酵MPH上清液的体外自由基清除能力和铁离子还原力综合评价,筛选获得一株抗氧化活性较强的鼠李糖乳酪杆菌(Lacticaseibacillus rhamnosus)ST(LST)。LST发酵MPH所得上清液产物(FPS)中,游离氨基酸总量比MPH提高了66.98%,分子质量低于180 Da组分增加8.66%。在H₂O₂诱导的RAW 264.7细胞氧化损伤模型中,FPS能显著提高细胞存活率,上调核因子E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、超氧化物歧化酶1(superoxide dismutase 1,SOD1)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)和谷胱甘肽过氧化酶1(glutathione peroxidase 1,GPX1)等抗氧化基因的转录水平。由此表明,鼠李糖乳酪杆菌LST发酵MPH可以有效缓解...     

蓝莓花色苷对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用

为探究蓝莓花色苷（BA）对H2O2诱导A549细胞氧化损伤的保护作用及其机制,通过MTT法测定A549细胞存活率,采用ELISA法检测细胞内丙二醛（MDA）水平、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）活性,采用DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）水平,采用流式细胞分析仪测定细胞凋亡率,通过RT-PCR技术测定细胞内抗氧化酶和凋亡相关蛋白的mRNA表达量,用免疫印迹法（Western blot）测定凋亡相关蛋白表达量。结果表明：选择H2O2浓度400 μmol/L、处理时间24 h来构建细胞氧化损伤模型。BA质量浓度为30,60,90 mg/mL对A549细胞无毒性作用;BA能显著抑制H2O2造成的A549细胞存活率降低（P<0.05）,同时显著降低细胞凋亡率、MDA和胞内ROS水平（P<0.05）,显著增加GSH-Px、SOD和CAT活性及其相对mRNA表达量（P<0.05）,并显著上调Bcl-2/Bax的比值和下调Cytochrome c、Caspase-9和Caspase-3相对mRNA和蛋白表达量（P<0.05）。BA对H2O2诱导A549细胞氧化损伤具有保护作用,其作用机制可能与抑制细胞凋亡通路相关蛋白的表达,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS,降低细胞凋亡率有关。     

海参肽的抗氧化稳定性及对细胞氧化损伤的保护作用

目的：探究不同水解度海参肽(低水解度为SCP-L和高水解度为SCP-H)的抗氧化稳定性及对H₂O₂诱导的L929细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：首先以羟自由基清除率(·OH)为评价指标,考察温度、pH、食品配料、金属离子和模拟胃肠环境对海参肽抗氧化稳定性的影响。然后,利用H₂O₂诱导L929细胞建立氧化应激损伤模型,测定细胞的存活率及细胞水平的抗氧化指标。结果：在20～100℃范围,SCP-L和SCP-H均具有良好的热稳定性;在氯化钠、Cu²⁺、Zn²⁺、碱性和模拟胃液环境下降低了其抗氧化稳定性;模拟胃肠消化,提高了SCP-L和SCP-H的抗氧化活性。SCP-L和SCP-H质量浓度在0.2～0.8 mg/mL时,显著提高了氧化损伤L929细胞的存活率;与模型组相比,SCP-L和SCP-H质量浓度为0.6 mg/mL时,乳酸脱氢酶(LDH)活力分别显著下降了20.67%和25.91%,丙二醛(MDA)含量分别显著下降了26.39%和44.36%,超氧化物歧...     

笛鲷鱼鳞源功能多肽对Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用

本实验利用650μmol/L H₂O₂构建Caco-2细胞氧化应激损伤模型,探究笛鲷鱼鳞源功能多肽(crimson snapper scale peptides,CSSPs)对Caco-2细胞氧化应激损伤的保护作用。通过测定细胞上清液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)活力和白细胞介素-8(interleukin-8,IL-8)质量浓度、胞内抗氧化酶活力和丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量、胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)相对含量、相关凋亡基因(Caspase-3、Caspase-9、Bax和Bcl-2)的相对表达量,从细胞氧化还原状态和细胞凋亡两方面阐明CSSPs对损伤Caco-2细胞的抗氧化作用。结果显示,CSSPs能够通过抗氧化防御系统来减轻H₂O₂对Caco-2细胞的损伤,主要包括增加胞内抗氧化酶活性以抑制LDH释放、胞内ROS积累、MDA及IL-8的生成。此外,CSSPs抑制氧化应激损伤诱导的细胞凋亡与线粒体...     

红毛藻多糖对H2O2诱导的Caco-2细胞氧化损伤的保护作用

目的：研究红毛藻多糖（Bangia fusco-purpurea polysaccharide,BFP）对H2O2诱导的人结肠腺癌（Caco-2）细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：构建过氧化氢（H2O2）诱导的Caco-2细胞氧化损伤模型,通过形态学观察和测定细胞裂解液中的抗氧化物水平及相关酶活力,评价BFP对Caco-2细胞氧化损伤的保护作用。结果：BFP可明显提高H2O2诱导氧化损伤的Caco-2细胞活力,降低细胞内活性氧生成水平,提高细胞内超氧化物歧化酶和过氧化氢酶活力以及还原型谷胱甘肽水平,减少丙二醛生成,并通过抑制Caspase-3和Caspase-9活性来改善氧化应激损伤引起的细胞凋亡。结论：BFP对H2O2诱导氧化应激损伤的Caco-2细胞具有保护作用,可通过增强细胞内源性抗氧化酶活力、提高非酶类抗氧化物水平和抑制细胞凋亡明显缓解H2O2诱导的Caco-2细胞氧化应激损伤。     

巫山神茶对H2O2诱导293T细胞氧化损伤的改善作用

以巫山神茶为研究对象,通过DPPH、ABTS、OH及O₂^-自由基清除实验考察其体外抗氧化活性。采用MTT法测定巫山神茶对293T细胞氧化损伤的细胞存活率,并使用试剂盒比色法和实时荧光定量PCR法测定MDA、SOD、CAT、GSH、GSH-Px含量及相关基因的表达。另外,以HPLC法分析了巫山神茶的主要活性成分。结果表明,巫山神茶对DPPH、ABTS、羟基及超氧阴离子自由基有显著的清除效果,且呈现浓度-效应依赖性。不同浓度巫山神茶(40、100、160 μg/mL)处理后的293T细胞存活率均超过93%,说明无明显的毒性作用。对比正常组,过氧化氢(0.3 mmol/L)可显著(P<0.05)导致293T细胞氧化应激损伤,经巫山神茶处理后受损细胞的存活率提高,其中高浓度(160 μg/mL)处理下的细胞的存活率达75.6%。同时,巫山神茶处理还能显著(P<0.05)降低MDA含量,提高CAT、SOD、GSH及GSH-Px含量。实时荧光定量PCR检测相关抗氧化基因也提示巫山神茶能上调CAT、SOD、GSH及GSH-Px的mRNA表达量。此外,通过HPLC分析,从巫山神茶中检测到以下9种生物活性成分:绿原酸、表儿茶素没食子酸酯、对香豆酸、异槲皮苷、二氢槲皮素、槲皮苷、黄芩苷、槲皮素、根皮素。总之,巫山神茶具有较好的体外抗氧化能力,能够改善由H₂O₂诱导的293T细胞氧化损伤且效果显著,其药理价值可考虑进一步深入研究。     

长茎葡萄蕨藻水提物体外抗氧化活性和对人肝细胞L02氧化损伤的保护作用

该文研究了长茎葡萄蕨藻水提物（CLE）体外抗氧化作用,并考察其减轻H2O2诱导的人肝细胞L02氧化损伤的能力。测其成分与含量,通过超氧阴离子和羟自由基来评价CLE的体外抗氧化能力;采用H2O2诱导建立L02细胞氧化损伤模型,以CLE进行干预,CCK8法检测细胞存活率,试剂盒检测胞外乳酸脱氢酶（LDH）、谷草转氨酶（AST）和谷丙转氨酶（ALT）活力以及胞内还原型谷胱甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）含量,荧光探针检测细胞内活性氧（ROS）的变化。CLE中总多糖、总三萜、总多酚和总黄酮含量分别为205.01、28.32、27.02和15.72 mg/g,CLE对超氧阴离子和羟自由基均具有较好的清除作用,其半抑制率浓度（IC50）分别为0.94 mg/mL和2.20 mg/mL。与模型组相比,CLE（22.5 μg/mL和45.0 μg/mL）干预提高了L02细胞的存活率,并降低了细胞上清中LDH、AST和ALT活力以及细胞内ROS水平和MDA含量,提高了GSH含量;其中当添加45.0 μg/mL的CLE后,细胞存活率显著提高了20.09%,ROS和MDA含量分别降低至模型组的63.23%和63.20%,GSH含量提高了164.02%。由结果可知,CLE具有较强的体外抗氧化活性,可改善L02细胞氧化损伤,发挥细胞保护作用。     

坛紫菜多酚抗氧化及抑制UVB致HSF细胞氧化损伤作用

从坛紫菜中提取分离制备多酚组分,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除能力、抑制β-胡萝卜素褪色能力和铁还原能力分析法评价坛紫菜多酚的体外抗氧化作用;以紫外线B(ultraviolet radiation B,UVB)致人表皮成纤维细胞(human skin fibroblast cells,HSFs)损伤模型评价坛紫菜多酚抑制紫外损伤表皮作用,考察其用于防护紫外损伤领域的可行性。体外实验结果显示,坛紫菜多酚具有较强的抗氧化作用,其DPPH自由基清除能力与同等质量浓度的二丁基羟基甲苯(butylated hydroxytoluene,BHT)相当;但抑制β-胡萝卜素亚油酸体系褪色能力和铁还原能力弱于同等质量浓度的BHT。细胞实验结果显示,坛紫菜多酚能有效降低UVB辐照所致HSFs的乳酸脱氢酶活力,维护细胞膜的完整性;降低受损细胞的活性氧类水平,增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活性,从而降低细胞的氧化应激状态,提升内皮细胞的抵抗氧化应激的能力,显著抑制HSFs凋亡水平。坛紫菜多酚能在细胞水平有效保护HSFs免受UVB的氧化损伤,表明紫菜多酚具有用于紫外损伤防护领域的潜力。     

草苁蓉提取物对HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用

目的：研究草苁蓉乙醇提取物（Boschniakia rossica ethanol extract,BREE）对H2O2诱导的HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用。方法：用H2O2诱导HepG2细胞氧化应激损伤,采用噻唑蓝（methylthiazolyldiphenyltetrazoliumbromide,MTT）比色法检测BREE对HepG2细胞氧化损伤的保护作用;比色法测定培养液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）、谷丙转氨酶（alanine aminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartateaminotransferase,AST）的释放率,以及细胞中超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）、还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）及丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平;蛋白印迹法测定细胞外信号调节蛋白激酶（extracellular signal-regulated kinase,ERK）、c-Jun氨基末端激酶（c-Jun N-terminal kinase,JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）总蛋白及其磷酸化形式的表达水平以及核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）的核内转移。结果：BREE单独处理时,在所测质量浓度范围内对HepG2细胞增殖无显著影响。与模型组相比,BREE能显著提高氧化损伤细胞的存活率;降低氧化损伤细胞培养液中LDH、ALT和AST的释放;降低细胞MDA水平,增高细胞SOD活性和GSH含量。氧化损伤发生的不同时期,ERK、JNK、p38 MAPK和NF-κB蛋白均有激活,而BREE在氧化损伤发生1 h时减少ERK激活和NF-κB核转移,氧化损伤发生12 h时减少JNK蛋白激活。结论：BREE对H2O2所致HepG2细胞氧化应激损伤具有保护作用,此作用可能与其抑制ERK、JNK的活化和NF-κB的核内转移有关。