灵芝多糖提取工艺优化及抗氧化活性的研究

目的研究灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)的最优提取工艺,并研究其抗氧化活性。方法通过单因素和响应面法优化提取工艺参数,获得GLP;将GLP进行乙醇分级得到GLP30、GLP60和GLP80 3个组分;采用还原力、DPPH自由基清除试验和羟自由基清除试验评估GLP及3个组分的抗氧化活性。结果灵芝多糖最优提取条件为:温度86°C,液料比50:1(mL/g),时间142min,实际提取得率为1.71%;抗氧化活性试验结果表明:GLP及GLP30、GLP60和GLP80均具有一定的抗氧化活性,均呈现浓度-活性依赖性,其中GLP80还原力最强,GLP清除DPPH自由基和羟自由基的能力最强。结论响应面法有效优化了GLP的提取,灵芝多糖具有较好的抗氧化活性,值得进一步研究及开发利用。     

食品中亲电物质的最新研究进展

食品中的亲电物质是高效低毒的核转录因子NF-E2相关因子2(Nrf2)诱导剂,通过Keap1/Nrf2/ARE通路激活Ⅱ相酶和抗氧化酶的转录。Ⅱ相酶和抗氧化蛋白可发挥慢速、长效的抗氧化和解毒作用。目前已经发现食品中有9类亲电物质,它们具有相似的结构特征。研究和开发食品中的亲电物质,将成为功能性食品新的研究领域。     

灵芝多糖及其菌群代谢产物对HepG2细胞胰岛素抵抗的改善作用及机制

目的：探讨灵芝多糖及其菌群代谢产物对HepG2细胞胰岛素抵抗状态的影响及其作用机制。方法：以胰岛素(10^-3μmol/L)和地塞米松(10μmol/L)联合建立HepG2细胞胰岛素抵抗模型(insulin resistant HepG2,IRHepG2);使用CCK-8法评价灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharides,GLP)和灵芝多糖肠道菌群代谢物(Ganoderma lucidum polysaccharide flora metabolite,GLP-F)的细胞毒性;使用葡萄糖试剂盒、糖原试剂盒法评价GLP和GLP-F对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗及糖原合成的影响;使用Western blot法检测了GLP与GLP-F对IR-HepG2细胞胰岛素信号级联中的关键蛋白IRS-1、AKT、GSK-3β、GLUT2、以及PEPCK的磷酸化或表达量的影响。结果：GLP和GLP-F均能显著增加IR-HepG2细胞的葡萄糖摄取量及糖原合成量(P<0.05),且GLP-F对IR-HepG2细胞葡萄糖消耗促进作用显著高于GLP(P&...     

低共熔溶剂提取灵芝多糖的工艺优化及抗氧化活性研究

采用5种低共熔溶剂(deep eutectic solvents,DESs)提取灵芝多糖(Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP),以灵芝多糖得率为指标筛选出最适合的低共熔溶剂是DESs-5即氯化胆碱-尿素(choline chloride-Urea,ChCl-Urea),然后利用响应...     

染料木黄酮对星形胶质细胞氧化损伤中Nrf2/ARE通路相关因子表达的调节作用

目的 研究染料木黄酮(Gen)对β淀粉样肽25-35(Aβ25-35)介导的星形胶质细胞氧化损伤中Nrf2/ARE通路相关因子的调节作用.方法 以星形胶质细胞(C6细胞系)作为研究对象,用Aβ25-35染毒制备氧化损伤模型.实验共分4组:对照组、Aβ组(Aβ模型组)、Gen干预组(Gen+ AB组)及Gen组(Gen单独处理组);采用RT-PCR方法和Western Blot方法检测星形胶质细胞核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶(HO-1)、γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶催化亚单位(GCLC)及锰超氧化物歧化酶(MnSOD)基因和蛋白的表达.结果 与Aβ组比较,Gen干预组和Gen组星形胶质细胞Nrf2、HO-1、GCLC及MnSOD基因和蛋白表达水平显著上调(P＜0.05).结论 染料木黄酮可能通过调控Nrf2/ARE通路来拮抗Aβ325-35介导的星形胶质细胞氧化损伤作用.     

灵芝孢子粉提取物延缓皮肤衰老作用研究

寻找天然有效成分以延缓皮肤衰老是近年来人们关注与研究的热点。为研究灵芝孢子粉提取物(Ganoderma lucidum spore extract, GLSE)对新生儿人真皮成纤维细胞(human dermal fibroblasts neonatal, HDFn)氧化损伤保护作用及其抗衰老作用，构建叔丁基过氧化氢(tert-butyl hydroperoxide, TBHP)诱导HDFn氧化损伤衰老模型，测定GLSE对衰老模型的保护作用以及细胞中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活性、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)活性以及丙二醛(malondialdehyde, MDA)水平、线粒体膜电位变化；同时测定衰老相关β-半乳糖苷酶活性以及抗氧化应激相关Nrf2/HO-1通路表达情况。结果显示，GLSE预处理后对TBHP诱导的衰老模型具有保护作用；GLSE作用HDFn后，能够降低MDA含量，提高细胞SOD和GSH-Px活性，稳定细胞线粒体膜电位，并且可以抑制细胞β-半乳糖苷酶活性，激活通路Nrf2/HO-1...     

食用菌活性成分抗氧化机制的研究进展

细胞氧化会带来衰老与疾病,作为天然抗氧化剂来源的食用菌因富含多糖、三萜及酚类等活性成分,具有极大的开发潜力与药用价值。但食用菌中发挥抗氧化活性成分的构效关系尚不明确,其抗氧化成分是否围绕Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Kelch like epichlorohydrin associated protein 1, Keap1)-核因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2, Nrf2)-抗氧化反应元件(antioxidant response element, ARE)和磷脂酰肌醇-3激酶(phosphatidylinositol-3-kinase, PI3K)-蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)-Nrf2途径发挥活性尚不清晰,阻碍了食用菌的开发与利用。因此,本文围绕自由基清除、Fe²⁺氧化还原反应及酶活防御能力等抗氧化评价指标,综述近年来食用菌活性成分抗氧化机制,分类分析食用菌活性成分的组成与结构对抗氧化活性的影响,提出食用菌抗氧化成分挖掘领域亟待解决的科学问题,旨在为食用...     

川赤芝多糖对运动疲劳状态下小鼠心肌组织的保护作用

目的：研究川赤芝多糖（Ganoderma lucidum polysaccharide,GLP）对运动疲劳小鼠心肌组织的保护作用。方法：利用沸水煎煮提取GLP,分别建立小鼠力竭游泳模型和递增负荷游泳疲劳模型,测定小鼠的力竭游泳时间、抗疲劳和抗氧化相关指标,并通过Western blot检测小鼠心肌组织中核因子E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2-Associated X蛋白（Bcl-2-Associated X,Bax）、激活型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Cysteinyl aspartatespecific proteinase-3,Cleaved Caspase-3)表达。结果：与空白对照组（Con-A1）相比,GLP组小鼠游泳时间均极显著增加（P<0.01）,且随着多糖剂量提高游泳时间随之提高;与空白对照组（Con-A2）相比,GLP低（GLPL2）、中（GLP-M2）、高（GLP-H2）剂量组小鼠肝...     

矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对H_2O_2诱导细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究矢车菊素-3-O-葡萄糖苷(C3G)对人胚肾HEK-293细胞氧化损伤的保护作用。方法:通过检测细胞活力、活性氧(ROS)水平和丙二醛(MDA)水平考察C3G对氧化损伤细胞的影响,并采用Western blot法和q RTPCR检测Nrf2和Keap1的蛋白表达量和m RNA表达量变化。结果表明:C3G预处理氧化应激细胞后,细胞活力显著高于H_2O_2损伤组(p 0.05),并呈浓度依赖性提高; H_2O_2损伤组的DCF荧光强于对照组,ROS相对含量增加到近2倍,1.25、5、20μmol/L C3G预处理后细胞荧光强度逐渐减弱,ROS相对量呈浓度依赖性降低; C3G预处理后细胞MDA水平呈浓度依赖性降低; 1.25、5、20μmol/L C3G处理后,Nrf2的m RNA表达和蛋白表达量均呈浓度依赖性上调,Keap1蛋白表达量显著低于H_2O_2损伤组(p 0.05),5和20μmol/L C3G对Keap1的m RNA下调作用明显。结论:矢车菊素-3-O-葡萄糖苷对HEK-293细胞有保护作用,可降低细胞ROS和MDA水平,其作用机制可能是通过激活Nrf2/Keap1信号通路以抵抗H_2O_2导致的细胞氧化损伤。     

沙棘粕醇提取物对小鼠氧化应激损伤的保护作用及机制

研究沙棘粕醇提取物(SBSE)对小鼠氧化应激损伤的保护作用。首先建立D-半乳糖诱导的小鼠氧化应激损伤模型。用不同浓度SBSE灌胃小鼠模型,42 d后,比较各组小鼠肝脏、脑组织中总抗氧化能力(T-AOC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性以及丙二醛(MDA)和脂褐素(LP)水平,测定小鼠血清中白介素-2(IL-2)和白介素-6(IL-6)含量,并探究SBSE对肝脏组织抗氧化相关基因表达水平的影响,从基因水平探索SBSE对氧化应激损伤的保护机制。结果:与模型组相比,灌胃一定剂量SBSE可以提高小鼠肝脏和脑组织中GSH-Px、SOD和CAT活力;低剂量组(SBSE-L组)小鼠肝脏、脑组织中的TAOC水平显著高于模型组(P0.01,P0.05);3种灌胃剂量小鼠的肝脏和脑组织LP和MDA含量均显著低于模型组(P0.05);中剂量组(SBSE-M组)小鼠血清IL-2和IL-6水平显著高于模型组(P0.05);对抗氧化相关基因mRNA表达情况进行分析,SBSE可能与Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)-核因子相关因子(Nrf2)/抗氧化反应元件(ARE)信号通路密切相关,SBSE可以下调Keap1,上调Nrf2的表达,使下游抗氧化基因HO-1和HQO1的表达量上升。     

花生红衣中反式白藜芦醇对HEK293T细胞抗氧化的影响

目的:分析花生红衣中的白藜芦醇成分,探究其主要成分反式白藜芦醇(RES)对人胚胎肾细胞293(HEK293T)抗氧化的影响及其潜在的分子机制。方法:采用超声波辅助酶法提取花生红衣中的白藜芦醇,采用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术分析花生红衣中白藜芦醇粗提液的组成成分。通过测定细胞活力,检测RES对HEK293T细胞的最高毒性。通过荧光素酶报告基因试验及免疫印迹试验检测其对Keap1-Nrf2-ARE抗氧化信号通路的影响,以DPPH自由基清除率评价其体外抗氧化能力。结果:HPLC-MS结果表明,花生红衣中含有白藜芦醇苷、白皮杉醇和RES。由于白藜芦醇在自然界中主要以反式白藜芦醇形式存在,因此选择RES进行后续试验。细胞存活力检测结果表明,RES对HEK293T细胞的最高无毒浓度为50 μmol/L,体外抗氧化作用呈浓度依赖性。荧光素酶报告基因分析表明,RES显著诱导了ARE介导的转录激活。免疫印迹结果显示,RES能诱导Nrf2介导的3个抗氧化蛋白表达【血红素氧合酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)】表达。此外,DPPH自由基清除率测定结果表明,RES能有效清除DPPH自由基,具有体外抗氧化能力。结论:花生红衣中白藜芦醇的主要成分RES对HEK293T细胞有抗氧化作用,可通过Keap1-Nrf2-ARE信号通路激活潜在的抗氧化活性。     

松多酚激活Nrf2/ARE通路对H_2O_2致牛肺动脉内皮细胞氧化应激损伤的保护作用

本文研究了松多酚对H_2O_2致牛肺动脉内皮细胞(BPAECs)氧化应激损伤的保护作用及其相关机制。以H_2O_2100μM诱导牛肺动脉内皮细胞(BPAECs)建立氧化损伤模型,实验设对照组、模型组、松多酚高、中、低(0.5、0.1、0.05 mg/m L)剂量组,免疫荧光检测转录因子NF-E 2相关因子2(Nrf2)核转位变化;RT-PCR检测Nrf2 m RNA的表达;Western blot检测Nrf2蛋白的表达;以及应用抑制剂筛选其发挥抗氧化损伤保护作用的信号通路。松多酚可以促进H_2O_2所致氧化损伤的牛肺动脉内皮细胞中的Nrf2从细胞质向细胞核内的转移,相对于模型组,松多酚提取物可以增加Nrf2 m RNA和蛋白质水平的表达量(*p0.05,**p0.01),且呈剂量-效应关系(**p0.01)。松多酚对H_2O_2诱导氧化损伤的BPAECs具有保护作用,激活Nrf2/ARE机制可能与COX-2、p38、PI3K/AKT信号通路有关,而与PKC信号通路无关。     

余甘子多酚对体外酒精性肝损伤的保护作用

目的:研究余甘子多酚(PPE)对酒精性肝细胞的保护作用,以及核因子相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)信号通路在其中的调控作用。方法:建立BRL-3A细胞酒精性损伤模型,用试剂盒检测PPE干预前、后细胞培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、谷胱甘肽(GSH)含量;用Q-PCR法检测Nrf2和HO-1的mRNA表达水平,Western印迹法检测细胞蛋白表达。结果:余甘子多酚可降低MDA、ALT、AST含量,提高SOD和GSH水平;降低Nrf2的mRNA水平和蛋白质含量,阻止Nrf2的过度表达;上调HO-1的m RNA水平和蛋白质含量,促进细胞抗氧化酶基因HO-1的表达,增强细胞自身抗氧化能力,抑制酒精性肝细胞氧化损伤。结论:余甘子多酚通过调控Nrf2/HO-1信号通路抑制酒精性肝细胞损伤,其主要作用成分为没食子酸、柯里拉京和鞣花酸。     

不同破壁方法对灵芝孢子粗多糖抗氧化活性的影响

采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除法、羟自由基清除法、2,2’-联氮基双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐自由基（2,2’-azinobis(3-ehtylbenzothiazolin-6-sulfnicacid)diammonium salt,ABTS＋·）清除法和铁氰化钾法以及酵母细胞氧化损伤保护模型,分别对未破壁灵芝孢子（unbroken Ganoderma lucidum spore,UGS）、机械法破壁灵芝孢子（mechanically broken Ganoderma lucidum spore,MGS）、生物法与机械法复合破壁的灵芝孢子（biologically and mechanically broken Ganoderma lucidum spore,BGS）提取粗多糖进行体外抗氧化活性评价。结果表明,3 种处理方法的灵芝孢子粗多糖表现出不同的抗氧化活性,且抗氧化活性与多糖质量浓度呈一定效量关系,多糖质量浓度越高,抗氧化活性越强。BGS所得粗多糖对DPPH自由基、羟自由基、ABTS＋?的清除能力以及还原力在3 种处理方法中均为最强。多糖质量浓度为5.0 mg/mL时,对3 种自由基的清除率分别为84.6%、91.0%、99.9%,还原力为1.09;BGS所得粗多糖对紫外损伤酵母细胞保护能力也相对较强。表明BGS粗多糖具有较高的抗氧化活性。     

芦荟多糖对D-半乳糖致HepG2细胞氧化损伤的保护作用

目的:探讨芦荟多糖对HepG2细胞氧化损伤的保护作用,分析其体外抗氧化能力。方法:以HepG2细胞为研究对象,建立D-半乳糖诱导细胞氧化损伤模型,以不同浓度芦荟多糖进行预保护处理。采用细胞增殖与毒性检测试剂盒测定HepG2细胞存活率,生物化学法检测细胞超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,酶联免疫吸附法测定细胞总抗氧化能力及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量,实时荧光定量PCR检测细胞Keap1、Nrf2、NQO1和HO-1基因表达水平。结果:与D-半乳糖模型组比较,25、50、100 μg/mL的芦荟多糖预保护处理能不同程度地提高HepG2细胞存活率;芦荟多糖能显著增强细胞中抗氧化酶的活性,降低细胞MDA的生成量（P<0.05）,且作用效果与芦荟多糖浓度成正比;细胞中Keap1基因表达显著降低,Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA表达显著提高（P<0.05）。结论:芦荟多糖可以减轻HepG2细胞的氧化应激损伤,激活Nrf2表达并抑制其泛素化降解,提高下游NQO1、HO-1的转录水平,增强细胞抗氧化酶系活性并调控细胞氧化还原系统,以达到减轻细胞氧化损伤程度、提高细胞抗氧化应激损伤的效果。     

桑叶生物碱粗提物对D-半乳糖诱导的小鼠蛋白氧化损伤的改善作用

目的:探讨桑叶生物碱改善小鼠蛋白氧化损伤作用效果与机理,旨在为桑叶生物碱的开发利用提供理论依据。方法:采用D-半乳糖(D-galactose,D-Gal)诱导建立小鼠氧化损伤模型,灌胃不同剂量的桑叶生物碱,于第8周末测定小鼠血浆蛋白羰基(protein carbonyl,PCO)、晚期蛋白氧化产物(advanced oxidation protein products,AOPP)、3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine,3-NT)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H quinine oxidoreductase 1,NQO1)活力,实时荧光定量聚合酶链式反应测定肝脏组织SOD、GSH-Px、NQO1、核因子E2相关因子2(nuclear erythroid related factor 2,Nrf2)、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kelch like ECH-associated protein-1,Keap1)mRNA表达情况。结果:与模型对照组相比,桑叶生物碱高剂量组(200 mg/kg mb)小鼠血浆中PCO、AOPP、3-NT水平分别降低36.43%、61.81%、58.13%(P0.01);血浆中的SOD、GSH-Px、NQO1活力分别提高48.89%、167.17%、85.12%(P0.01)。同时,桑叶生物碱高剂量组肝脏中SOD1、SOD2、GSH-Px、NQO1、Nrf2 mRNA相对表达量分别增加96.96%、94.26%、116.71%、101.51%、63.01%(P0.01),Keap1 mRNA相对表达量下降33.54%(P0.01)。结论:桑叶生物碱可能通过调控Nrf2/Keap1氧化应激信号通路实现对D-Gal诱导的小鼠蛋白氧化损伤的保护作用。     

果蔬中多酚类化合物双向调控Nrf2/Keap1信号通路的研究进展

果蔬中含有丰富的多酚类化合物,其含有的酚羟基中邻位酚羟基极易被氧化,有较强捕捉活性氧等自由 基的能力,因此能够清除自由基和淬灭活性氧。Nrf2（NF-E2-related factor 2）信号通路是增强机体抗氧化功能最 重要的保护性信号途径,在细胞抵御氧化应激机制中有着重要的地位,是抗氧化研究领域的热点。本文通过阐述 Nrf2/Keap1（Kelch-like ECH-associated protein 1）信号通路及其调节方式,讨论Nrf2在肿瘤化学预防和促进癌症发 生中的双重作用,重点介绍和归纳了果蔬中几种典型的多酚类物质对Nrf2/Keap1信号通路双向调控作用的分子机 制,以期为利用果蔬多酚开发健康绿色食品和药品提供一定的理论依据。     

山桃稠李果实花色苷对Nrf2/Keap1通路的影响

目的:探讨山桃稠李果实花色苷对Nrf2/Keap1通路的影响。方法:质量浓度为0.05、0.2、0.8mg/mL的山桃稠李果实花色苷分别作用于HepG2细胞24、48、72h,MTT法检测对HepG2细胞生长抑制率,检测各组细胞内谷胱甘肽(GSH)含量及谷胱甘肽硫转移酶(GSH-ST)、磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)活性变化;实时荧光定量RT-PCR实验方法检测山桃稠李果实花色苷对HepG2细胞的Nrf2、Keap1、GSTP1的基因表达的影响。结果:随着花色苷质量浓度的增加,HepG2细胞的谷胱甘肽(GSH)含量下降,谷胱甘肽硫转移酶(GSH-ST)、磷酯酰肌醇-3-激酶(PI3K)活性显著降低;Nrf2、Keap1、GSTP1的基因表达下调。结论:山桃稠李果实花色苷能够通过对Nrf2/Keap1通路的调节来降低HepG2细胞的抗氧化能力。     

植物多酚通过Nrf2/ARE信号通路抗氧化作用研究进展

植物多酚是植物体内重要的次生代谢产物,是重要的天然抗氧化剂,能够清除自由基和淬灭活性氧。Nrf2（NF-E2-related factor 2）/抗氧化反应元件（antioxidant response element,ARE）信号通路是增强机体抗氧化功能最重要的保护性信号途径,在细胞抵御氧化应激机制中有着重要的地位,是抗氧化研究领域的热点。本文综述了Nrf2/ARE信号通路的组成及其调节机制,总结植物多酚通过该信号通路增强机体抗氧化应激能力,减少细胞凋亡、参与神经保护、延缓衰老和减少氧化损伤等的能力,以期为植物多酚应用于抗氧化保健食品和药品的开发提供一定依据。     

薰衣草总黄酮对皮肤光损伤小鼠氧化应激的影响

目的：探究薰衣草总黄酮抗小鼠皮肤光损伤的有效性及氧化应激的相关作用机制，为薰衣草的开发利用提供依据。方法：将84只雌性昆明小鼠随机分为7组，正常组、UVB组、溶剂组、维生素E组（0.013 g/kg）、薰衣草总黄酮低、中、高剂量组（0.25、1.25、2.50 g/kg）。建立小鼠皮肤光损伤模型，观察薰衣草总黄酮对光损伤模型小鼠行为特征、背部皮肤状态的影响；采用苏木素-伊红和维多利亚蓝染色观察其组织病理学改变及小鼠表皮厚度的变化；Western blot法检测小鼠Nrf2信号通路相关蛋白的表达。结果：薰衣草总黄酮能够明显减轻小鼠皮肤外观损伤程度、表皮厚度及皮肤组织的病理学变化，且能显著增强Nrf2、Keap1、HO-1、NQO1、GCLC蛋白的相对表达。结论：薰衣草总黄酮对小鼠皮肤光损伤具有一定的防护作用，其作用机制可能与激活Nrf2信号通路、调控氧化应激反应有关。