超声波对密花石斛多糖理化性质及免疫调节活性的影响

本文从超声波处理前后密花石斛多糖的分子量分布、特性黏度、荧光辅助糖电泳、溶液构象及免疫调节活性的变化角度,探讨超声波对多糖理化性质及与生物活性的改变。结果表明:超声波处理不仅降低密花石斛多糖高分子量组分的分子量和特性黏度,使多糖的溶液空间构象由大的纺锤体状聚集体解聚分散成小的结构紧密的聚集体,而且可显著提高多糖促进脾细胞增殖的活性,提示超声处理可改变多糖的理化性质并影响其生物活性。     

提取温度对霍山石斛多糖理化性质及肠道黏膜免疫活性的影响

目的:研究提取温度对霍山石斛多糖提取量、理化性质以及肠道黏膜免疫活性的影响。方法:在不同提取温度(40、60、80、100℃)条件下水提醇沉法提取霍山石斛多糖(Dendrobium huoshanense polysaccharides,DHP),并测定多糖提取量和特性黏度;采用高效液相色谱(high performance liquid chromatography,HPLC)、气相色谱(gas chromatography,GC)、傅里叶变换红外光谱(Fourier transform infrared spectrometry,FTIR)技术分析霍山石斛多糖及其阴离子交换色谱水洗组分和盐洗组分的分子质量分布、单糖组成和特征基团;以体外培养的小鼠小肠Peyer结细胞的培养液对小鼠骨髓细胞增殖作用为指标,测定多糖及其分级组分的肠道黏膜免疫调节活性。结果:DHP的提取量随提取温度的升高而增加,但其特性黏度呈现下降趋势。HPLC分析表明不同温度条件下提取的多糖均由高分子质量(higher molecular weight,HMW)和低分子质量(lower molecular weight,LMW)两种组分所构成,LMW热稳定性好、主要存在于阴离子交换色谱的水洗脱组分(water-eluted fraction,DHPW),HMW热稳定性弱、主要存在于阴离子交换色谱的盐洗脱组分(salt-eluted fraction,DHPS);GC和FTIR分析显示,DHPW主要由呈α-构型的葡萄糖所组成、不含糖醛酸,DHPS主要由呈β-构型的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖和甘露糖所组成,且含糖醛酸;不同温度提取的DHP及其阴离子交换色谱DHPW和DHPS均表现出肠道黏膜免疫调节活性,且DHPS比DHPW具有更强的肠道黏膜免疫调节活性,但它们的活性均随提取温度的升高而下降。结论:不同提取温度不仅影响DHP的提取量,而且可明显改变DHP的特性黏度、分子质量分布、单糖组成和肠道黏膜免疫调节活性,较高的提取温度在提高DHP提取量的同时显著降低DHP中HMW比例,进而导致多糖肠道黏膜免疫调节活性的下降。     

铁皮石斛多糖不同级分的制备、性质分析及免疫调节活性比较

目的:制备铁皮石斛多糖(DOP)的不同分级组分,比较其理化性质及体外免疫调节活性的差异,并对多糖结构特征与活性的关系进行初探。方法:采用分级醇沉的方法获得铁皮石斛多糖不同分级组分,并对各组分的糖、糖醛酸、蛋白质含量、单糖组成、分子量进行分析。以巨噬细胞RAW264.7为研究模型,比较DOP不同分级组分的体外免疫调节活性。结果:DOP和四个组分(F30、F40、F50和F50S)均为中性糖,各组分糖醛酸含量较DOP均有所降低,F50S蛋白质含量最高。DOP、F30、F40、F50和F50S的平均分子量分别为262.4、314.5、248.3、202.9和136.2 kDa。DOP、F30、F40、F50和F50S均主要由甘露糖和葡萄糖组成,其摩尔比分别为5.16:1、3.67:1、4.16:1、5.62:1和5.86:1。DOP和各分级组分均可显著(p<0.05)增强RAW264.7巨噬细胞的增殖能力、NO的释放以及TNF-α和IL-1β的分泌。结论:铁皮石斛多糖及其分级组分均有免疫调节活性,且分子量较小的免疫调节活性较强。     

霍山石斛多糖的制备、功能和产品开发的研究进展

霍山石斛是我国传统医药中的一种名贵中药材,具有悠久的药用历史和良好的药用价值,现已成为现代医疗、保健食品等领域的研究热点。石斛多糖为石斛功效发挥的主要物质基础,生物学活性丰富,产业化开发利用前景广阔。本文综述了霍山石斛多糖的提取纯化、理化性质、结构特征及功能作用等研究进展,并对霍山石斛类保健食品的开发现状和深度开发的前景进行分析和展望,以期为霍山石斛的综合开发利用提供科学依据。     

霍山石斛多糖的肠黏膜免疫调节活性及在小肠中的吸收分布

目的：研究霍山石斛多糖（Dendrobium huoshanense polysaccharide,DHP）的小鼠肠黏膜免疫调节活性以及在小肠内的吸收分布。方法：通过溴化氰活化法对DHP进行荧光标记,检测荧光标记前后的肠黏膜免疫调节活性;通过口服和离体小肠培养以及Peyer’s结细胞培养,用激光共聚焦显微镜检测DHP在小肠内的吸收分布以及与Peyer’s结细胞的结合。结果：DHP在质量浓度为25、50、100 μg/mL和200 μg/mL时,其肠黏膜免疫调节活性分别提高到对照组的112.8%、131.1%、137.6%和160.5%,荧光标记不改变DHP肠黏膜免疫活性;DHP在体内和体外均可被小肠吸收,分布于肠黏膜固有层内,并可与Peyer’s结内细胞结合。结论：DHP具有肠黏膜免疫调节活性,可以通过Peyer’s结细胞被小肠吸收,并分布于固有层内。     

HPLC-UV-CL联用研究霍山石斛生物碱清除自由基活性

目的:霍山石斛生物碱抗氧化活性成分在线测定,为霍山石斛药效物质基础研究及抗氧化活性物质快速发现提供依据;方法:在预实验基础上建立霍山石斛生物碱部位HPLC-UV分析方法,采用鲁米诺-双氧水发光体系作为羟自由基供体、以校正清除率为抗氧化活性评价标准,HPLC-UV-CL联用在线测定霍山石斛生物碱部位各组分清除羟自由基活性。以磷钼酸、碘-碘化钾为沉淀试剂敲出总生物碱提取物中生物碱组份,对比敲出前后HPLC图谱变化,确定霍山石斛的生物碱组分。结果:在本实验条件下,霍山石斛中检出4种生物碱峰6、峰10、峰11、峰14,其中峰14、峰11具有一定的清除羟自由基活性,校正清除率达4.95%和10.94%。峰6、峰10对鲁米诺-双氧水系统发光值无明显影响。结论:HPLC-UV-CL可用于霍山石斛生物碱清除自由基活性快速测定。     

不同石斛品种的品质差异

比较紫皮石斛、流苏石斛、鼓槌石斛、金钗石斛、铁皮石斛和霍山石斛在活性成分含量及多糖结构上的差异,为不同品种石斛的质量评价及开发利用提供参考依据。依据2015版《中华人民共和国药典》及文献中的方法进行石斛活性成分含量和多糖结构测定。结果显示, 6种石斛样品中, S4-流苏石斛的浸出物含量最高; S2-金钗石斛的黄酮含量最高; S6-霍山石斛多糖含量最高; S2-金钗石斛和S4-流苏石斛的多糖均一性最好; 6种石斛多糖的单糖均由葡萄糖、甘露糖、核糖、鼠李糖、阿拉伯糖、木糖等组成,比例相似,但6种石斛样品的甘露糖和葡萄糖的峰面积值均不在药典规定范围内。因此,不同石斛品种的活性成分含量差异显著。以浸出物含量、黄酮含量和多糖为主要评价指标综合分析, 6种石斛样品中S2-金钗石斛和S6-霍山石斛品质较优。     

多糖的硫酸化修饰及其结构与生物活性关系研究进展

多糖是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物活性大分子。其具有抗肿瘤、抗凝血和免疫调节活性等多种功能活性,已引起生物医学领域研究者的关注。近10年来的研究发现:硫酸化修饰可以改善多糖的诸多理化性质,显著地增强其原有生物活性,甚至使其产生新的活性。本文概述了多糖硫酸化修饰、结构分析的方法,综述了硫酸化多糖的主要生物活性以及硫酸化修饰对多糖抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、免疫调节等生物活性的影响等相关研究进展,可为今后开展硫酸化多糖结构、活性的深入研究及应用开发提供参考。     

大苞鞘石斛和铁皮石斛多糖提取及其免疫调节作用比较

为比较大苞鞘石斛与铁皮石斛多糖对机体免疫调节作用的差异,经提取纯化,分别得到2种石斛不同纯度的粗多糖、精多糖和多糖水洗组分。对昆明小鼠灌胃上述6种纯度的多糖,观察其对小鼠免疫器官指数、迟发性变态反应、抗体积数和小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力等免疫学指标的影响。结果表明,纯度最高的大苞鞘石斛多糖水洗组分与铁皮石斛多糖水洗组分含有7种单糖,其中甘露糖和葡萄糖的含量均最高。两种石斛同等纯度多糖的各指标值相近,且随多糖纯度的提高,各指标值逐渐增大,免疫活性逐渐增强。经两种石斛的多糖水洗组分灌胃后,两组小鼠的胸腺指数和脾脏指数相近,耳肿胀率、抗体积数和腹腔巨噬细胞对鸡红细胞吞噬指数差异虽不显著,但均显著高于对照。上述结果表明,与铁皮石斛多糖相比,大苞鞘石斛多糖具有与其相近的免疫调节作用,因而具有良好的药用开发价值。     

淮山多糖结构、生物活性及理化性质研究进展

淮山多糖是淮山块茎中重要的营养和活性成分,具有抗氧化、维持肠道稳态、免疫调节、降血糖、保护肝脏等生理功能,易被机体消化、代谢,无毒副作用。在一定条件下,淮山多糖还可表现出良好的乳化性和流变学特性,展现出广阔的应用前景。本文从结构、功能、理化性质方面对国内外关于淮山多糖的研究进展进行综述,列举了多种淮山多糖的分子量、单糖组成、糖苷键类型等,介绍了淮山多糖生物活性的作用机制以及理化性质的影响因素,并对淮山多糖可开发的产品类型和未来的研究方向进行展望,以期为淮山多糖的近一步研究与应用提供参考。     

霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用

研究霍山石斛多糖对人胃癌细胞SGC-7901生长的抑制作用,探讨多糖抗肿瘤作用与肿瘤相关基因表达之间的相关性。胃癌细胞SGC-7901生长的MTT检测表明,霍山石斛总多糖(DHP)、阴离子交换色谱水洗组分(DHP-1)及0.05 mol/L盐洗组分(DHP-2)能显著抑制胃癌细胞SGC-7901的生长,并呈时间和剂量依赖性,其中以DHP-2效果最好。光学及激光共聚焦显微镜观察发现,DHP-2处理过的胃癌细胞形态固缩,凋亡显著。荧光定量RT-PCR技术检测表明,DHP-2不仅能明显下调原癌基因c-myc的表达,其表达仅为对照的42.34%,而且能显著提高抑癌基因野生型p53的表达,其表达比对照高1.04倍。结果表明:霍山石斛多糖对人胃癌细胞生长的抑制作用与其组分、浓度及作用时间相关,其可能的作用机制是多糖通过下调c-myc基因和上调p53基因的表达来发挥抑制效果。     

霍山石斛多糖的闪式提取工艺优化及降血糖作用研究

目的 优化霍山石斛多糖的闪式提取工艺,并对其降血糖作用进行研究。方法 采用单因素试验和响应面试验优化霍山石斛多糖的提取工艺,并通过测定空腹血糖、血清胰岛素和糖化血清蛋白水平研究其降血糖功能。结果 霍山石斛多糖的最优提取工艺为料液比1:28 (g:mL),提取电压132 V,提取时间95 s,提取次数4次,在此条件下霍山石斛多糖提取率为(24.14±0.52)%。通过动物试验发现,霍山石斛多糖能极显著降低小鼠血糖值和糖化血清蛋白水平(P<0.01),提高小鼠血清胰岛素含量(P<0.01)。结论 霍山石斛多糖具有较好的降血糖功效。     

石斛多糖体外抗氧化活性的研究

本实验利用对邻苯三酚自氧化体系产生的超氧阴离子自由基(O2·)的清除作用、Fenton反应检测对羟基自由基(·OH)的清除作用以及对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系的抑制作用,对霍山石斛和铁皮石斛多糖抗氧化活性能进行了研究。结果表明,两种多糖对超氧阴离子自由基和羟基自由基具有不同程度的清除作用,同时对烷基自由基引发的亚油酸氧化体系也有显著的抑制作用。研究还发现霍山石斛多糖的抗氧化能力显著强于铁皮石斛多糖。     

霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤活性的比较研究

目的：比较霍山石斛不同提取物抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的活性。方法：制备霍山石斛冷冻干燥物、水提物、水提醇溶物、水提醇沉物、水提粗多糖5 种提取物;以连续灌胃30%乙醇的小鼠为亚急性酒精性肝损伤模型,以霍山石斛不同提取物连续灌胃30 d后,称量小鼠体质量及肝质量,测定血清中谷丙转氨酶（alanineaminotransferase,ALT）、谷草转氨酶（aspartate aminotransferase,AST）、碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性,以及总胆固醇（total cholesterol,TC）、甘油三酯（triglyceride,TG）、高密度脂蛋白胆固醇（highdensity lipoprotein cholesterol,HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol,LDL-C）含量,同时测定肝脏中乙醇脱氢酶（alcohol dehydrogenase,ADH）、乙醛脱氢酶（acetaldehyde dehydrogenase,ALDH）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase,GSH-Px）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性,丙二醛（malondialdehyde,MDA）、谷胱甘肽（glutathione,GSH）水平,并检查肝组织损伤病理变化。结果：霍山石斛水提醇溶物抗亚急性酒精性肝损伤的活性最差,醇沉物、水提物、冷冻干燥物具有一定的肝损伤保护活性,水提粗多糖各个剂量组均可显著改善肝脏组织损伤和脂肪变性（P＜0.05）,降低血清ALT、AST、ALP活性和LDL-C、TC、TG水平,提高血清HDL-C含量,增强肝组织ADH、ALDH、SOD、GSH-Px活性,减少肝组织GSH损耗并抑制肝组织MDA含量增加。结论：多糖是霍山石斛抗小鼠亚急性酒精性肝损伤的功能因子。     

霍山石斛花的热风干燥特性、品质及其护色应用研究

为研究热风干燥温度和护色剂的应用对霍山石斛花干制品品质特性的影响,通过改变热风干燥温度(50、60、70、80℃),对比不同温度下霍山石斛花的干燥速率、失水特性、主要生物活性成分(多糖、总酚、黄酮)含量,并探讨不同护色剂的应用效果,最终确定干燥工艺。结果显示:50℃的样品干燥时间最长,70℃的样品总酚含量、80℃的样品黄酮类化合物含量最低。综合考虑干燥效率和生物活性成分含量,最终选择60℃作为霍山石斛花的干燥温度。此条件下,干燥时间为4. 5 h,干制品的黄酮、多糖和总酚含量分别为(10. 94±0. 10)、(16. 80±2. 69)和(28. 06±0. 14) mg/g。进一步采用0. 5 g/L异抗坏血酸钠在干燥前作护色处理可提升霍山石斛花干制品色泽品质。利用0. 5 g/L异抗坏血酸钠对霍山石斛花护色预处理,在60℃条件下热风干燥4. 5 h,所得干制品的外观色泽良好,生物活性成分最佳。     

稀土元素铈对霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长和多糖合成的影响

研究外源稀土元素铈对霍山石斛类原球茎悬浮培养细胞生长、多糖合成、培养基中碳氮磷源消耗的动力学特性,以及对胞内糖、胞内氮、胞内磷转化的影响。结果表明：适量的铈能够改善霍山石斛类原球茎对碳氮源的利用,提高胞内糖、胞内氮、胞内磷的含量,从而促进细胞生长和多糖合成。以添加10μmol/L 的铈效果最好,细胞的生长速率从0.501g/(L·d)提高到0.649g/(L·d);培养至24d 时,每升培养液中类原球茎干质量为25.45g,比对照提高了20.2%,培养至18d 多糖总质量浓度达到峰值3.35g/L,是对照的1.53 倍。     

Molecular Modification of Polysaccharides and Resulting Bioactivities

Polysaccharides are ideal natural resources for supplements and pharmaceuticals that have received more and more attention over the years. Natural polysaccharides have been shown to have fewer side effects, but because of their inherently physicochemical properties, their bioactivities were difficult to compare with those of synthetic drugs. Thus, researchers have modified the structures and properties of natural polysaccharides based on structure–activity relationships and have obtained better functionally improved polysaccharides. This review focuses on the major modification methods of polysaccharides, and discusses the effect of molecular modification on their physicochemical properties and bioactivities. Molecular modification methods mainly include chemical, physical, and biological changes. Chemical modification is the most widely used method; it can significantly increase the water solubility and bioactivities of polysaccharides by grafting onto other groups. Physical and biological modifications only change the molecular weight of a polysaccharide, and thereby change its physicochemical properties and bioactivities. Most of the molecular modifications bring about an increase in the antioxidant activity of polysaccharides, and among these, sulfated and acetylated modifications are very common. Furthermore, phosphorylation modification is the most common application to increase antitumor activity, and modified polysaccharides have been shown to have anti‐HIV activity as the result of sulfated modification.     

霍山石斛口服液安全性研究

目的 评价霍山石斛口服液食用的安全性。方法 依据GB 15193.1-2014《食品安全国家标准 食品安全性毒理学评价程序》, 对霍山石斛口服液进行急性毒性实验、Ames实验、小鼠骨髓细胞微核实验、小鼠精子畸形实验、30 d喂养实验。结果 小鼠对霍山石斛口服液最大耐受剂量(maximal tolerable dose, MTD)大于40 mL/kg BW, 属无毒级; Ames实验显示小鼠骨髓细胞微核试验和小鼠精子畸形实验均检测为阴性; 当霍山石斛口服液剂量达到10.0 mL/kg BW时, 仍未见实验动物出现中毒体征。结论 霍山石斛口服液无毒副作用, 无遗传毒性, 安全性高, 可长期食用。