顶空固相微萃取分析金黄色葡萄球菌挥发性代谢产物的条件优化

采用65 μm聚二甲基硅氧烷/二乙基苯（polydimethylsiloxane/divinylbenzene,PDMS/DVB）、75 μm碳分子筛/聚二甲基硅氧烷（carboxen/polydimethylsiloxane,CAR/PDMS）萃取头和50/30 μm二乙基苯/碳分子筛/聚二甲基硅氧烷（divinylbenzene/carboxen/polydimethylsiloxane,DVB/CAR/PDMS）萃取头,20、30 min和40 min 3 种萃取时间,50、65 ℃和80 ℃ 3 种萃取温度,分别对金黄色葡萄球菌胰蛋白胨大豆肉汤（tryptone soy broth,TSB）培养物的挥发性代谢产物进行萃取,经气相色谱-质谱检测,以建立适宜于金黄色葡萄球菌挥发性代谢物的萃取分析方法。结果表明,50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取头能更好地满足各类化合物的萃取需要,获得更加全面的化合物信息,并且在萃取温度80 ℃条件下萃取30 min,得到的金黄色葡萄球菌挥发性代谢物的数量和响应强度较高。因此,萃取金黄色葡萄球菌挥发性代谢产物的最适条件为：50/30 μm DVB/CAR/PDMS萃取头、萃取温度80 ℃、萃取时间30 min。在该萃取条件下,检测出金黄色葡萄球菌在TSB中产生的主要挥发性物质为乙醇、1-癸醇、3-羟基-2-丁酮、丙酮、乙酸、苯甲醇、3-甲基-1-丁醇、吲哚、1-辛醇和正辛酸等。该萃取方法的建立可为细菌挥发性代谢产物的分析提供参考。     

羊肉特征风味指纹图谱的构建

采用SPME-GC-MS结合GC-O技术对不同产区的15个羊肉样品中挥发性成分进行分析鉴定,以系统聚类分析法优选了14个羊肉样品,共筛选出34种检测频率大于50%的共有成分作为羊肉特征风味化合物构建羊肉特征风味指纹图谱。为了考察测定方法的准确性,通过精密度实验、重复性实验和样品的稳定性实验对所建立的指纹分析方法进行了验证,同时进行了相似度分析,14个羊肉样品的相似度均大于0.80,结果表明不同批次的羊肉样品较为一致,该方法符合指纹图谱建立的要求,可以应用于羊肉指纹图谱的构建。依据所建立的指纹图谱信息,采用PCA分析法对其它不同肉类样品和掺假样品进行对照研究,显示羊肉样品和其它肉类样品和掺假样品均存在明显差异,表明该风味指纹图谱可用于羊肉样品质量的鉴定和监控。     

HS-SPME结合GC-MS法建立金沙窖酒指纹图谱

采用顶空-固相微萃取（HS-SPME）对金沙窖酒中的风味物质进行提取,气相色谱-质谱联用（GC-MS）技术对其进行分析,以26个共有峰作为金沙窖酒特征指纹峰,建立了金沙窖酒指纹图谱的研究方法,并采用夹角余弦法评价了包括金沙窖酒在内的20种白酒与对照指纹图谱间的相似度。结果表明,金沙窖酒与对照指纹图谱间的相似度均＞99%,其他品牌白酒与对照指纹图谱间的相似度均＜92%,表明所建立的指纹图谱能够用于鉴别金沙窖酒,指纹图谱相似度＞99%可以鉴定为金沙窖酒。     

基于赣南脐橙指纹图谱的主成分及UPLC-Q-TOF-MS分析

建立不同产地赣南脐橙的指纹图谱,对其进行主成分分析,并采用超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)分析共有峰成分。采用色谱柱为Agilent-C18 column (2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为0.1%甲酸水溶液(A)-甲醇(B)进行梯度洗脱,柱温35℃,流速0.3 m L/min,检测波长254 nm,质谱以正离子模式进行全扫描。以色谱图构建赣南脐橙指纹图谱,对其相似度研究,并对指纹图谱上的共有峰进行主成分分析。结果表明,14批赣南脐橙样品的指纹图谱中有21个共有峰,样品与对照指纹图谱相似度均在0.90以上。通过相似度分析,可以有效区分非赣南脐橙。样品经主成分分析,得到4个主成分,其累计方差贡献率为85.75%,并可将样品分为4类。通过分析正离子质谱信息,结合相关文献报道,推断并鉴定出3个共有峰的化合物。该方法准确、可靠,重现性好,所建立的指纹图谱结合主成分分析可用于赣南脐橙的专属性鉴定和其产地的区分。     

乳源凝固酶阴性金黄色葡萄球菌挥发性代谢特征分析

为探究乳源金黄色葡萄球菌的挥发性代谢特征,从牛乳中分离得到5株凝固酶阴性金黄色葡萄球菌(31B、0250H、777H、S12-1和S2-2),采用顶空固相微萃取/气相色谱-质谱联用技术,分别对接种这5株菌的胰蛋白胨大豆肉汤(tryptic soy broth,TSB)和牛乳的挥发性代谢产物进行动态测定。结果表明,TSB中5株菌总计检出33个挥发性代谢产物,1-丁醇、乙酸、3-甲基-丁酸和2-丁酮是5株菌共同检出的典型挥发性代谢产物。牛乳中5株菌总计检出28个挥发性代谢产物,2-呋喃甲醇、辛酸和3-甲基-丁酸是5株菌共同检出的典型挥发性代谢产物。无论是在TSB还是牛乳中,3-甲基-丁酸始终是凝固酶阴性金黄色葡萄球菌稳定的挥发性代谢产物。不同菌株产生3-甲基-丁酸的强度不相同,同一菌株在TSB和牛乳两种不同基质中3-甲基-丁酸的产生强度也不相同。     

天然染料质谱数据库的建立与应用

为提高纺织品文物中天然染料鉴定的准确性和便捷性，利用高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术对68种天然染料化合物标准品进行分析，收集化合物分子质量、碎片离子及丰度、检测离子模式、保留时间等信息，建立了基于美国国家标准技术研究院质谱数据库的天然染料质谱数据库。通过设置合理的检索条件，确定质谱库检索最佳参数，对代表性蒽醌类(茜素)、黄酮类(槲皮素、木犀草素)、生物碱类(小檗碱)化合物进行了分子碎裂机制解析。应用自建的质谱数据库成功实现了2件古代纺织品文物中天然染料的快速鉴定，质谱数据库检索结果显示其含有茜素、茜紫素、木犀草素、小檗碱、巴马汀等染料化合物，且在文物样品的检索过程中，质谱数据库正向检索匹配度与反向检索匹配度均大于800,匹配率均在95%以上。利用质谱数据库检索技术鉴定天然染料具有可行性，为纺织品文物中天然染料的研究工作提供了新思路。     

枸杞蜜中多酚类成分鉴定及指纹图谱建立

采用高效液相色谱-串联质谱（high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS/MS）法对枸杞蜜中多酚类成分进行定性和定量分析,运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统,建立枸杞蜜的标准指纹图谱。通过质谱数据解析,枸杞蜜中共鉴定出9种多酚类化合物。在枸杞蜜中首次鉴定出花旗松素,将其作为枸杞蜜的特征性成分。通过建立的枸杞蜜标准指纹图谱,对市售的4个枸杞蜜进行真实性评价,表明有3个样品是真正的枸杞蜜。     

基于GC-MS指纹图谱和化学计量分析鉴别预包装纯葡萄汁及葡萄汁制品

采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用技术研究预包装纯葡萄汁的香气成分,建立其香气成分的气相色谱-质谱指纹图谱,结合化学计量分析对3 个产地的混合果汁、纯葡萄汁、葡萄汁饮料共3 类预包装葡萄汁制品进行鉴别。结果表明：预包装纯葡萄汁中主要香气成分共38 种,所建立香气成分的气相色谱-质谱指纹图谱中共分析出15 个特征峰,其峰面积之和占总峰面积的95%以上。利用夹角余弦法和相关系数法对指纹图谱进行分析,发现气相色谱-质谱指纹图谱相似度与其品质呈正相关。所建立的香气成分指纹图谱结合化学计量分析能准确将预包装混合果汁、葡萄汁饮料和纯葡萄汁鉴别区分。     

单丛茶HS-SPME/GC-MS指纹图谱的构建

对单丛茶顶空固相微萃取的萃取时间、温度和茶叶比等条件进行优化研究,并对各个样品进行气相色谱-质谱（GC-MS）检测和分析,建立单丛茶的挥发性物质指纹图谱。研究表明,最佳萃取条件为0.75:5 g/mL的茶水比,在90 ℃温度下萃取50 min。建立的单丛茶挥发性物质指纹图谱具有20个共有峰,图谱相似度达0.9以上。不同地区单丛茶的判别模型具有较好的准确性,其自身验证法和交叉验证法的正确率均为100%,外部验证法正确率为80%。该研究结果可为单丛茶顶空固相微萃取研究提供试验依据,为单丛茶鉴别提供理论参考。     

花生油挥发性风味物质SPME-GC/MS指纹图谱的研究

建立一种快速、高效检测花生油中挥发性风味物质的方法对花生油的质量控制具有重要意义。采用顶空固相微萃取-气相色谱-质谱联用(SPME-GC/MS)技术对花生油中风味物质进行快速分析鉴定,并对采集大量SPME-GC/MS数据进行对比分析,比较30批不同花生油样品所得GC/MS色谱图生成标准指纹图谱(R)。该法可同时检测花生油中醛类、杂环类、烃类、酯类等56种挥发性成分。与标准指纹图谱比较,各批次相似度范围为0.918～0.990。该方法重复性和稳定性的RSD值均小于0.51%,说明该方法稳定可靠。将所建立的标准指纹图谱应用于10批次不同原料的食用油进行识别,相似度为0.114～0.775,均小于0.9。该方法建立的花生油指纹图谱质控模式能有效识别原料来源,可用于花生油的评价与甄别,可为花生油的质量控制提供相关检测依据。     

熟畜肉中金黄色葡萄球菌污染标记物动态变化及与菌体生长关联分析

为考察不同类型的熟猪肉、牛肉、羊肉对金黄色葡萄球菌污染标记物的影响,采用顶空固相微萃取/气相色谱质谱联用技术对三种熟肉进行本底值检测,并对人工染菌的三种熟肉进行标记物动态分析和细菌生长数量变化测定。结果表明,在采集的大量样本中,三种熟肉基质都检出一定强度的3-甲基丁醛和3-甲基丁酸信号,作为熟畜肉的本底值。对于受金黄色葡萄球菌污染的三种熟肉,3-甲基丁醛信号均在第12 h时(1~3×107 CFU/g)出现显著增长(p<0.05),强度增长到最大值后迅速下降;3-甲基丁酸信号均在第14 h时(0.7~2×108CFU/g)出现显著增长(p<0.05),在整个培养过程中强度不断上升。对于三种熟肉,3-甲基丁醛(0~18 h)和3-甲基丁酸(0~24 h)的信号强度分别与金黄色葡萄球菌生长量之间均具有极显著(p<0.01)的相关性。结论:金黄色葡萄球菌生长量分别达到107、108 CFU/g时开始检测到3-甲基丁醛和3-甲基丁酸的增长,之后在一定的培养周期内这两个物质稳定存在并与菌体生长显著相关。研究结果为建立畜肉中金黄色葡萄球菌污染标记物检测技术奠定了前期基础。     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱法溯源分析云南省肉制品中金黄色葡萄球菌

目的 利用基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry, MALDI-TOF MS)技术对云南省肉制品中金黄色葡萄球菌进行溯源。方法 通过MALDI-TOF MS, 主成分分析及聚类分析等方法, 对来源于云南省肉制品的88株金黄色葡萄球菌, 包括耐苯唑西林或敏感金黄色葡萄球菌株(MRSA/MSSA)的进行溯源研究。结果 86株金黄色葡萄球菌可鉴定到种的水平, 2株可鉴定到属的水平。用MALDI-TOF MS鉴定金黄色葡萄球菌与生化和血清学方法的分型高度相关, 聚类分析表明, 88株菌株在距离水平为500的情况下被划分为4个类型, 其中5型同数据库中来自欧美的9株标准菌株亲缘关系最近。88株金黄色葡萄球菌中来源相同地区的菌株MALDI-TOF MS肽指纹图谱相似性较好, 相同类别来源或地区来源的金黄色葡萄球菌菌体蛋白表达更为相似, MRSA和MSSA菌株MALDI-TOF MS肽指纹图谱未观察到显著差异。结论 MALDI-TOF MS是一种快速、高敏感、高通量、高精度的金黄色葡萄球菌鉴定技术, 具有良好的可追溯性。     

金黄色葡萄球菌基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱的鉴定与聚类分型

目的 建立基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱法(matrix assisted laser desorption lonization-time of flight mass spectrometer, MALDI-TOF MS)快速鉴定金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, S. aureus)并自建数据库, 进行聚类分型。方法 基于MALDI-TOF MS技术, 对经全自动微生物分析仪(VITEK2 COMPACT)鉴定为S. aureus的25株分离株和1株标准菌株(ATCC 25923)进行鉴定。并进一步采集26株S. aureus特征性蛋白质指纹图谱, 使用flex Analysis软件进行分析, 汇总成标准图谱并构建本地分离株S. aureus的鉴定数据库, 命名为Staphylococcus aureus。结果 经标准菌株ATCC 25923验证, 自建数据库对S. aureus鉴定结果的可信度较设备自带数据库明显提高, 鉴定分值由2.251提高到了2.845。自建数据库进一步对26株S. aureus进行聚类分型, 在差异水平100时, 24株不同来源S. aureus被聚类成24个分支, 将食品中不同来源分离的S. aureus分为24个型。结论 MALDI-TOF MS作为一种快速、准确、高通量的全新微生物鉴定技术, 实现了对S. aureus的特异性快速鉴定与分型, 能够满足公共安全卫生、突发食品安全事件和口岸快速通关方面的需求。     

基于顶空-气相色谱-离子迁移谱法比较7种市售烟熏鱼挥发性成分

目的 比较7种市售烟熏鱼挥发性成分组成差异, 探究潜在的特征性风味物质。方法 采用顶空-气相色谱-离子迁移谱法(headspace-gas chromatography-ion mobility spectrometry, HS-GC-IMS)构建7种市售烟熏鱼挥发性物质指纹图谱, 并结合主成分分析(principal component analysis, PCA)和聚类分析方法比较不同样品挥发性化合物之间的差异。结果 从7种市售烟熏鱼中共鉴定出39种挥发性化合物, 其中醛类、酯类和氮/硫类化合物含量较高。指纹图谱、PCA和聚类分析直观地显示了不同样品间的挥发性化合物均存在一定的差异和联系, 其中壬醛在不同种类烟熏鱼中均有检出, 2,5-二甲基吡嗪是烟熏鲈鱼、烟熏草鱼、烟熏鲢鱼和烟熏武昌鱼中潜在的特征性风味物质。结论 本研究建立了不同种类烟熏鱼挥发性物质指纹图谱, 发现样品间挥发性成分存在较大差异, 为将来定向调控烟熏鱼风味品质提供了数据支撑。     

基于顶空-固相微萃取-气质联用的短短芽胞杆菌 挥发性抑菌代谢物的鉴定

摘 要：目的分析鉴定短短芽胞杆菌Brevibacillus brevis的挥发性抑菌代谢物。方法采用二分隔平板测试短短芽胞杆菌FJAT-8672挥发性抑菌代谢物对尖孢镰刀菌的抑菌效果。运用顶空-固相微萃取-气质联用法对短短芽胞杆菌FJAT-8672的挥发性成分进行测定。结果短短芽胞杆菌FJAT-8672挥发性抑菌代谢物对尖孢镰刀菌的抑制率为36.10%。FJAT-8672菌落表面的中挥发性抑菌代谢物,共检测出高匹配度的挥发性抑菌代谢物21种。按照其化学结构不同分为醇类、醛类、酮类、酯类等。其中醛类化合物含量最高。结论发现短短芽胞杆菌挥发性抑菌代谢物的抑菌能力,其中主要生物活性代谢物包括两类,第一类可能具有抑菌抗癌等活性的代谢物,包括雪松醇、壬醛、癸醛;第二类可能与微生物代谢有关的代谢物,包括苯甲醛。     

胀果甘草悬浮细胞中黄酮类化合物HPLC分析

用HPLC法建立野生胀果甘草与悬浮培养的胀果甘草细胞中黄酮类化合物的HPLC指纹图谱,并采用LC-MS技术推测HPLC共有峰中主要指纹峰的化学结构。采用Agilent EclipseXDB-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为乙腈:0.1%冰醋酸,梯度洗脱,流速1.0 mL/min,检测波长310 nm。Agilent1100LC/MSD液质联用系统,ESI源。在设定的色谱条件下,分别得到的野生甘草与甘草细胞中黄酮类化合物指纹图谱,用中国药典相似度评价系统软件进行评价相似度为75.2%,根据LC-MS结果推断了HPLC共有峰中2个主要指纹峰分别为甘草苷和甘草素。结果表明野生甘草中绝大部分黄酮类化合物在甘草细胞中均有合成,使利用细胞悬浮培养生产的甘草黄酮类化合物成为可行的途径。     

基于HS-SPME和GC/MS定量分析杨梅特征香气成分

杨梅为中国南方特色树种,香气独特,研究其特征香气成分具有重要意义.该研究利用液液萃取和顶空固相微萃取(HS-SPME)技术,结合GC/MS对杨梅香气进行了定性和定量研究.研究表明,利用HS-SPME-GC/MS技术可检出挥发性物质成分60种,其中萜类物质是其主要挥发性成分,含量约占40%;醇类含量22%;醛酮类19%;酸类和酯类物质少,分别为l%和3%.在萜类物质中,发现石竹烯含量最高,达1069.8μg/L.研究了杨梅特征香气,这为促进香气质量评价体系建立、果品深加工对香气的影响研究提供了理论依据.     

蜂胶样品乙醇提取物的UPLC-Q-TOF-MS指纹特征

探索蜂胶质谱指纹在建立蜂胶品质和真实性判别模型的可行性,对9 个国内外蜂胶样品用体积分数75%热乙醇溶液提取,提取液用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用仪进行一级阳离子化总离子流色谱和总质谱（色谱和质谱指纹）的采集分析。从总离子流图指纹发现2 个广东成品蜂胶色谱指纹与其余7 个极为不同,判断为异常蜂胶;9 个蜂胶样品均未检出芦丁和槲皮素。总离子流图指纹结合峰内分子的质荷比可直观对比蜂胶样品的相同和差异,能克服色谱峰的漂移,比单用液相色谱指纹特征判别更可靠。总质谱指纹主成分分析对2 个异常蜂胶的判别与色谱指纹结果一致,表明色谱和质谱指纹结合有望建立更稳健的蜂胶鉴别方法。