双酶法制备豌豆肽及其抗氧化活性

研究豌豆蛋白双酶水解的最佳工艺条件及产物的抗氧化活性。以豌豆蛋白粉为原料,通过单因素试验和正交试验优化出双酶分段水解豌豆蛋白的工艺条件,并初步研究豌豆肽的抗氧化活性。结果表明,双酶法制备豌豆肽的最佳工艺条件为:底物浓度10%,复合蛋白酶加酶量3.0%,pH 9.0,温度55℃,酶解3.5 h;用碱性蛋白酶酶解,加酶量3.0%,pH 9.5,温度50℃,酶解4.0 h。由此酶解得到水解物的水解度为39.61%。水解液蛋白浓度0.125 mg/mL时,其对Fe2+螯合能力为83.22%。试验表明和单酶水解相比,双酶水解工艺可提高豌豆蛋白的水解度和抗氧化活性。     

双酶法制备牡蛎抗氧化酶解液的工艺优化

以牡蛎肉为原料,用无花果蛋白酶和风味蛋白酶水解牡蛎肉制备抗氧化酶解液,以DPPH·清除率、氨基酸态氮含量和蛋白质回收率为指标进行单因素和正交试验,探究总酶量、pH、酶解时间和酶比对酶解效果的影响。得到双酶制备牡蛎抗氧化酶解液的最佳工艺条件为:总酶量12%,p H6.0,酶解时间3.0 h,无花果蛋白酶与风味蛋白酶的比例为5∶1(质量比);该酶解液具有较高抗氧化活性和蛋白质回收率,其氨基酸态氮含量为0.223 g/100 m L,DPPH·清除率可达89.42%、蛋白质回收率达到了79.81%。     

双酶法制备米糠蛋白抗氧化肽

以提取的米糠蛋白为原料,研究其酶解工艺及其水解物的抗氧化活性。选取木瓜蛋白酶和风味蛋白酶双酶水解制备米糠蛋白抗氧化肽。结果表明,木瓜蛋白酶与风味蛋白酶酶活力之比为1∶1时,清除自由基的效果较佳。选取五个不同的影响因素,进行了酶解工艺的单因素及正交实验。实验结果得出较佳酶解参数为:底物浓度([S])1.5%,加酶量4500U/g,pH6.5,温度45℃,时间3h,在此条件下米糠蛋白水解物对DPPH自由基清除率为58.82%,对羟自由基的清除率为34.78%。      

贻贝的可控酶解及其酶解液的抗氧化活性

用Alcalase对贻贝进行酶解能够得到具有抗氧化活性的酶解物。通过控制酶解时间分别得到水解度(hydrolysis degree,DH)为12%、18%、24%和30%的4种酶解物,研究其抗氧化活性。结果表明,酶解物的还原力和羟基自由基清除率均随DH升高而升高,但在DH 24%~30%范围升高极缓;其DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除率和脂质过氧化抑制率均随DH升高而呈现先增后降的趋势,最高清除率均出现在DH 24%处。DH为24%的贻贝Alcalase酶解物具有最佳的抗氧化活性。     

酶法制备硫酸软骨素寡糖及其抗氧化活性

采用硫酸软骨素酶对硫酸软骨素进行酶法降解,制备硫酸软骨素寡糖。通过红外分析降解前后的硫酸软骨素以及利用质谱技术对该酶解产物进行分析,并检测酶解前后硫酸软骨素的DPPH自由基的清除能力、羟自由基清除能力和还原能力。结果显示,酶法降解硫酸软骨素对其基本结构影响不大,质谱分析结果表明,该酶解产物是二糖和四糖。抗氧化活性实验表明,硫酸软骨素寡糖对DPPH自由基、羟自由基的清除能力及其还原能力均高于硫酸软骨素。推测其可能是由于硫酸软骨素降解成硫酸软骨素寡糖后,分子量的减小、不饱和双键的形成以及还原糖的含量增加使得其活性增加。      

酶法水解麦胚蛋白及其产物的抗氧化活性研究

选择碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胰酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶5种蛋白酶对麦胚蛋白进行水解,并考察其水解产物的抗氧化活性。结果表明,中性蛋白酶为制备麦胚抗氧化肽的最适蛋白酶,其最佳水解条件为:底物质量分数4%,酶添加量6 000U/g,酶解温度50℃,pH值7.5,水解至270min时抗氧化活性最大。     

7种海参提取物酶法制备及其抗氧化活性研究

以7种常见的低值可食用海参为研究对象,采用3种蛋白酶:复合蛋白酶、风味蛋白酶、木瓜蛋白酶,分别水解4,8,12 h,制备得到海参提取物。采用还原力、羟自由基清除能力、氧自由基吸收能力评价法对比研究其抗氧化活性。以海参提取物得率、蛋白回收率和抗氧化活性为分类指标,将不同海参提取物进行聚类分析,结果表明:土耳其参、大连大乌参、澳洲海参、叶瓜参和大北极海参提取物得率、蛋白回收率较高,花刺参和小北极海参提取物得率、蛋白回收率较低;叶瓜参提取物的抗氧化能力最强;采用复合蛋白酶酶解7种海参时,海参提取物得率、蛋白回收率和抗氧化活性最强;在最适酶和酶解时间作用条件下,7种海参的提取物得率41.24%～55.57%,蛋白回收率65.06%～98.4%,还原力值3.41～8.34μmol trolox当量/g干海参,OH值28.83～96.65μmol trolox当量/g干海参之间,ORAC值38.99～133.08μmol trolox当量/g干海参之间。本研究可为低值可食用海参的精深加工提供理论和方法的指导。     

牡蛎蛋白酶解物的制备及其抗氧化活性研究

选用中性蛋白酶,研究了前处理方法、E/S、pH、温度和时间对酶解牡蛎蛋白效果的影响,制备牡蛎蛋白酶解物,分析其游离氨基酸含量及分子量分布,体外实验测定其抗氧化活性。结果表明,酶解前100℃热处理10min能够提高酶解物中蛋白肽的含量,E/S为2.0%、pH7.0、温度50℃、时间3.0h为酶解的适宜条件,其DH达到14.95%;所制备的EHOP的主要成分为小分子肽类物质,分子量主要集中在500～3091u,EHOP的还原性较强,且对羟基自由基和超氧阴离子均有较好的清除能力,EHOP浓度为25mg/mL时,其还原力A700为0.44,超氧自由基清除率和·OH清除率分别为68.86%和21.20%。      

海参酶解液的体外抗氧化活性研究

分别选用木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和菠萝蛋白酶水解海参体壁,以DPPH·清除能力、O2-·清除能力、Fe2+螯合力和还原力为抗氧化指标,研究不同海参酶解液体外抗氧化活性的差异。结果表明,随着水解时间的增加,5种酶解液基本上均表现出酶解液的抗氧化能力先增加后下降的趋势。菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶酶解液的DPPH·清除能力和O2-·清除能力较强;胰蛋白酶酶解液的Fe2+螯合能力最强;而木瓜蛋白酶酶解液的还原力最大。从清除自由基角度上,菠萝蛋白酶和碱性蛋白酶可作为开发海参抗氧化肽的优选工具酶。      

响应面法优化珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及酶解产物的抗氧化活性

以珍珠龙胆石斑鱼肉为原料,利用蛋白酶酶解制备生物活性肽。以水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验的基础上采用响应面分析法优化制备工艺。并采用超滤法对酶解产物进行分离纯化,同时进行抗氧化活性探究。结果表明:珍珠龙胆石斑鱼肉酶解工艺条件为:采用风味蛋白酶,酶添加量1050 U/g,在pH7.0、53℃、料水比1:3.5条件下酶解5.5 h,水解度为9.99%±0.39%。酶解产物与超滤组分均具有较强DPPH自由基清除能力,其IC₅₀值在0.63~0.88 mg/mL之间;EH-2(5~8 kDa)和EH-3(3~5 kDa)有较强的羟基自由基清除能力,其IC₅₀值分别为16.94和16.38 mg/mL;酶解产物与超滤组分均具有还原能力,且酶解产物还原能力最佳。优化的珍珠龙胆石斑鱼肉肽的酶法制备工艺合理且可行,其酶解产物与超滤组分具有较强的抗氧化性,可作为功能食品的基料应用。     

超滤法浓缩富集牡蛎蛋白抗氧化活性肽

为研究牡蛎蛋白酶解产物中发挥抗氧化活性的肽片段,采用超滤的方法对其进行初步分离富集,测定了各级组分的体外抗氧化能力和氨基酸组成。结果表明:<4000u超滤液对羟自由基、DPPH自由基和超氧自由基清除活性的IC50值分别为17.29、2.82、7.02mg/mL,对肝脂质过氧化抑制作用的IC50值为14.40mg/mL,均低于原液和其他超滤组分;<4000u超滤液的还原力均高于同浓度的原液和其他超滤组分。经氨基酸分析,超滤后组氨酸、脯氨酸、甲硫氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、色氨酸及苯丙氨酸的含量得到了富集。<4000u的超滤液经凝胶层析后,活性部分主要集中在550～3890u。      

模拟胃肠消化对牡蛎低聚肽抗氧化活性的影响

以去壳牡蛎肉为原料通过酶解法制备牡蛎低聚肽,并通过体外模拟消化试验,对比消化前后牡蛎低聚肽分子量分布、DPPH自由基清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、ABTS自由基清除能力、氧自由基吸收能力(ORAC)变化,探究牡蛎低聚肽经模拟胃、肠道消化后抗氧化活性的变化。试验结果显示,牡蛎低聚肽的相对分子量主要在1 000 Da以下,胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后重均分子量下降不超过8.2%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,DPPH自由基清除率降低分别不超过7.9%,8.7%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,·OH清除率降低分别不超过9.3%,3.8%;胃蛋白酶消化后,ABTS自由基清除率降低9.2%,胰蛋白酶消化后,ABTS自由基清除率提高3.6%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,ORAC值分别提高11.5%,1.3%。胃肠消化对牡蛎低聚肽的抗氧化活性评价各指标均无显著性影响(P＞0.05)。说明牡蛎低聚肽具有较好的综合抗氧化活性和稳定性。     

Effects of cationic property on the in vitro antioxidant activities of pea protein hydrolysate fractions

Yellow pea seed protein-derived peptides were produced through enzymatic hydrolysis of pea protein isolate, which was followed by ultrafiltration to isolate peptides with < 3 kDa sizes (PPH). The PPH was separated by cation-exchange chromatography into five peptide fractions (F1-F5) based on their affinity for the stationary phase. F1 contained peptides with the least amount (7.5%) of cationic amino acids while F5 contained peptides with more than 50% content of cationic amino acids. F1-F5 peptide fractions were evaluated for in vitro antioxidant activities in comparison to glutathione (GSH), an endogenous antioxidant peptide. Results showed that the peptide fraction with the least cationic property (F1) had significantly strongest (p < 0.05) scavenging activity against 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical and hydrogen peroxide (H₂O₂) when compared to F2-F5. Generally, the scavenging of O₂?B⁻ and H₂O₂ was negatively related with the cationic property of the peptide fractions. Fractionation according to cationic property resulted in significantly increased (p < 0.05) O₂?B⁻ scavenging power of the peptide fractions (F1-F5) when compared to the unfractionated PPH. The peptide fractions showed weak or nil ferric reducing power and, regardless of cationic property, were significantly (p < 0.05) more effective at inhibiting lipid oxidation than GSH over a 7-day period. In contrast, with the exception of H₂O₂ scavenging, GSH was a more effective antioxidant than PPH and the peptide fractions. We concluded that the PPH and some of its fractions have the potential to be used as therapeutic agents against chronic diseases that develop from oxidative damage, and that the cationic property of amino acids contributed negatively to the antioxidant activity of the peptide fractions.     

In-vitro and in-vivo antioxidant effects of the oyster mushroom Pleurotus ostreatus

Although almost all organisms are equipped with antioxidant defense and repair systems that have evolved to protect them against oxidative damage, these systems are often inadequate to completely prevent oxidative stress-induced damage. Therefore, antioxidant supplements, or natural products containing antioxidants, may be used to help reduce oxidative damage to the human body. Mushrooms have been part of the normal human diet for thousands of years and, in recent times, the amounts consumed have risen greatly, involving a large number of species. The genus Pleurotus comprises 40 different species that are commonly referred to as “oyster mushrooms”. It has been shown to possess cholesterol-lowering, anti-tumor, antiviral, anti-thrombotic and immunomodulating effects. Pleurotus ostreatus contains higher concentrations of cystine, methionine and aspartic acid than other edible mushrooms, such as Agaricus bisporus (brown), A. bisporus (white) and Lentinus edodes. Until now, research has tended to focus on the dietary value of edible mushrooms; however, there is relatively little information pertaining to the antioxidant activity and the possible use of such mushrooms to neutralize oxidative stress. Hence, the aim of the present review was to summarize the in-vitro and in-vivo antioxidant effects of the mushroom P. ostreatus.     

菊苣多糖体外抗氧化能力及抗疲劳作用

目的:研究菊苣多糖(chicory polysaccharide,CP)体外抗氧化能力及抗疲劳作用。方法:通过测定CP对羟自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基的清除作用、还原力及其体外抗氧化能力,以小鼠耐力实验(负重游泳)和生化改变的检测评价CP的抗疲劳功效。结果:当浓度为2.4 mg/mL时,CP对羟自由基、超氧阴离子自由基及DPPH自由基清除率分别为40.93%、67.11%和58.17%,还原能力稍低于同浓度V_C;与空白组相比,口服CP组小鼠负重游泳时间明显延长,且血尿素氮、血清乳酸和丙二醛水平显著降低(p<0.05),超氧化物歧化酶、肝糖原和肌糖原水平显著升高(p<0.05)。结论:CP具有较强的抗氧化能力和抗疲劳作用。     

藜麦糠抗氧化肽的超滤分离及其体外抗氧化活性

为了大批量生产抗氧化活性最好的藜麦糠抗氧化肽,采用风味酶与碱性蛋白酶组合对藜麦糠蛋白进行酶解,制备酶解液。利用超滤技术分离纯化藜麦糠抗氧化肽,并评价分离得到的不同分子质量段抗氧化肽的体外抗氧化活性,优选出抗氧化活性最好的抗氧化肽。以膜通量为指标,压力、时间和滤液质量分数为3个工艺参数,通过单因素和正交实验,探究超滤分离截留分子量为10 ku的藜麦糠抗氧化肽的最佳工艺条件。结果表明,不同分子量段的超滤组分具有不同的抗氧化活性,其中分子量为5~10 ku的抗氧化肽较其他分子量范围的超滤组分的抗氧化活性最好。藜麦糠抗氧化肽的最佳超滤条件为压力0.16 MPa,时间20 min,滤液质量分数2%,在此条件下得到膜通量为(41.22±0.50) L/m²·h。由此可实现5~10 ku的抗氧化肽的大量生产。     

白茶乙醇提取物体外抗氧化活性研究

研究福鼎白茶乙醇提取物的体外抗氧化能力及其对人结肠腺癌Caco-2细胞氧化损伤保护效果。采用化学比色法测定白茶提取物中茶多酚和总黄酮物质含量。利用二苯代苦味酰基自由基(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)和超氧阴离子(O₂^-)自由基清除率及总还原力来评价白茶乙醇提取物的体外抗氧化能力。此外,建立过氧化氢(H₂O₂,150 μmol/L)诱导的人Caco-2细胞氧化损伤模型来评估白茶乙醇提取物对氧化损伤细胞的保护效果。MTT法测定白茶提物对细胞生存率的影响。细胞内超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)水平按说明书使用试剂盒测定。丙二醛(malondiadehycle,MDA)的含量以硫代巴比妥酸法(thiobarbituric acid reactive substance,TBARS)测定。结果表明,白茶乙醇提取物含较丰富的茶多酚(343.00±27.90 mg没食子酸/g)与黄酮类(24.95±0.56 mg芦丁/g)物质,并具有良好的DPPH自由基(半清除浓度为330.63 μg/mL)、超氧阴离子清除力(半清除浓度为342.90 μg/mL)及较强的总还原力。同时,白茶乙醇提取物可抑制H₂O₂对Caco-2细胞所造成氧化损伤并提高其生存率至85.6%。白茶乙醇提取物还能提高受损细胞内SOD和GSH-Px的活性,并能降低由于氧化应激损伤所导致的细胞损伤标记物MDA水平的升高。综合而言,白茶乙醇提取物具有较强的体外抗氧化能力并对氧化损伤细胞有较好的保护作用。白茶提取物对氧化应激损伤细胞的保护作用可能与其所含有的茶多酚和黄酮类物质有关。     

石榴籽多酚的体外抗氧化活性

目的:为拓展石榴籽开发用途,了解其多酚粗提物和纯化物的体外抗氧化活性作用强弱。方法:本实验采用有机溶剂浸提法提取石榴籽中的多酚物质并以有机溶剂萃取法进行纯化,采用ABTS法、邻苯三酚自氧化法、Fenton法和DPPH法测定了石榴籽粗提液及纯化液对ABTS自由基、羟基自由基、超氧阴离子和DPPH自由基的清除能力。结果表明,石榴籽中的多酚粗提液和纯化液对ABTS、DPPH自由基均有较强的清除能力,而对超氧阴离子自由基和羟基自由基的清除能力较弱;多酚粗提液清除ABTS、DPPH自由基的IC₅₀值分别为37.13 191.82 μg/mL,多酚纯化液清除ABTS、DPPH自由基的IC₅₀值分别为29.11、143.26 μg/mL;纯化液对ABTS自由基、羟基自由基及DPPH自由基的清除能力强于粗提液。     

柘树植物酵素中氨基酸分析及抗氧化性能研究

分别以柘树的小青果、花、叶为原料,按植物酵素传统发酵工艺制得柘树小青果酵素、柘树花酵素和柘树叶酵素,研究其氨基酸种类、含量以及抗氧化性能。结果表明:三种酵素的氨基酸含量丰富,总氨基酸含量分别为12.667、2.870、1.198 mg/mL,人体必需氨基酸占总氨基酸比例分别为32.8%、32.9%、40.0%,比值系数分别为54.31、31.65、46.49,柘树小青果酵素具有更高的营养价值,三种酵素主要的氨基酸为天冬氨酸、丝氨酸、谷氨酸、甘氨酸、丙氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸和赖氨酸,半胱氨酸和蛋氨酸含量极少。三种酵素的抗氧化能力都很强,其中柘树小青果酵素抗氧化性能均优于柘树花酵素和柘树叶酵素,且ABTS自由基清除能力、DPPH自由基清除能力、羟基自由基清除能力和还原力均表现出了浓度依赖性。氨基酸含量与抗氧化性能具有正相关性,尤其是天冬氨酸(Asp)、谷氨酸(Glu)、丙氨酸(Ala)、组氨酸(His)、精氨酸(Arg)和脯氨酸(Pro)这六种主要氨基酸含量与还原力具有显著的正相关性(r>0.99),可以利用还原力来评价柘树植物酵素的抗氧化性能。     

姬松茸抗氧化酶解液的制备

目的:研究制备姬松茸抗氧化酶解液的工艺条件,并分析酶解液的营养成分。方法:将木瓜蛋白酶、纤维素酶、果胶酶按m_{木瓜蛋白酶}∶m_纤维素酶∶m_果胶酶为3∶4∶4制备复合酶,酶解姬松茸子实体;采用响应面试验优化姬松茸酶解工艺。结果:复合酶水解姬松茸的最佳工艺为复合酶添加量0.5%,酶解pH 6.2,酶解温度49℃,酶解时间147 min,该条件下,当姬松茸酶解液质量浓度为2.0 mg/mL时,其对DPPH自由基的清除率为69.15%,表现出很强的抗氧化活性。酶解液中蛋白质含量为(1 013.83±25.11) mg/100 mL,粗脂肪含量为(150.17±1.21) mg/100 mL,总糖含量为(721.41±8.74) mg/100 mL,多糖含量为(138.83±1.66) mg/100 mL,游离氨基酸含量为(800.94±12.36)mg/100 mL,其中必需氨基酸占40.22%。结论:采用复合酶法制备的姬松茸酶解液具有较强的抗氧化活性和较高的营养价值,可开发为功能性食品。