不同谷物培养基质对蛹虫草有效成分的影响

以蛹虫草菌种为材料,高粱、糜子、油莎豆3 种谷物为培养基质,测定谷物蛹虫草菌丝共生体和蛹虫草子实体的主要活性成分,研究不同培养基质对蛹虫草有效成分含量的影响。结果表明,油莎豆培养的蛹虫草菌丝共生体产纤溶酶酶活最高,为312.26 U/g;油莎豆培养的蛹虫草子实体产虫草素含量最高,为7.34 mg/g。高粱培养的蛹虫草子实体麦角甾醇含量最高,为6.10 mg/g;糜子蛹虫草菌丝共生体粗多糖含量最高,为72.5 mg/g。高粱适合作为培养高产麦角甾醇的蛹虫草子实体的培养基质,糜子适合作为培养高产粗多糖的菌丝共生体的培养基质,油莎豆适合作为培养高产虫草素的蛹虫草子实体和高产纤溶酶的菌丝共生体的培养基质。     

不同产地蛹虫草鲜干品核苷类含量测定

运用液相色谱法分别对山东、安徽、云南、湖北四种产地和烘干、冻干、新鲜三种加工后的蛹虫草中腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷进行比较,考察不同地区、不同加工方法的蛹虫草核苷物质含量及种类差别,以期找到蛹虫草的较好来源及其加工方法。结果表明:热水提取法的效果明显比超声提取法好。云南产地蛹虫草中腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷含量最高,分别为0.19,0.21和0.24 mg/g。新鲜蛹虫草超声水提后腺苷、虫草素、N-6-2羟乙基腺苷含量明显要比冻干、烘干含量高。     

培养基质对蛹虫草中虫草酸及核苷类物质的影响

采用燕麦、小米、大麦、大米4种培养基质固体培养获得蛹虫草子座,比较子座中虫草酸、虫草素、腺苷、尿苷、鸟苷及胸苷含量的差异。采用比色法测定虫草酸含量,采用高效液相法测定核苷类物质含量。结果表明:培养基质对蛹虫草代谢产物合成的影响各有不同,小米培养的子座虫草酸(9 000μg/g)及虫草素(9 531.0μg/g)含量最高,大米培养的子座腺苷(818.9μg/g)和尿苷(2 028.4μg/g)含量最高,大麦培养的子座鸟苷(1 105.3μg/g)含量最高。     

高效液相色谱法测定3 种蛹虫草中虫草素及比较分析

对3 种蛹虫草中虫草素含量进行高效液相色谱法测定并比较,以查看不同地区来源的蛹虫草中虫草素含量
的区别,为选育高含量虫草素蛹虫草菌种及改变其培养条件指明方向。首先采用正交试验研究虫草素的提取条件,
获得最适提取工艺,即料液比1∶80、提取时间5 h、提取温度70 ℃,在此条件下虫草素的得率达0.604%（以湖北地区
的蛹虫草作为原料）。然后在此条件下分别对湖北地区（A）、云南地区（B）和本实验室培养（C）的蛹虫草中提
取虫草素并进行测定,结果表明：样品C的虫草素含量远高于A（6.041 mg/g）和B（7.606 mg/g）,为26.071 mg/g。
结果显示,不同产地的蛹虫草中虫草素含量有一定区别,这可能与培养蛹虫草所用的菌种和培养条件差异有关。本
研究筛选出来的菌种以及获得的培养方法,对后续研究补硒栽培对蛹虫草中的活性成分虫草素含量的影响提供了技
术基础。     

蛹虫草液态深层发酵的研究

采用二次饱和D 最优试验设计方法 ,在 3 0L生物反应器中进行了蛹虫草液态深层发酵。当初始温度为 2 2℃ ,pH 6 3～ 6 5 ,搅拌速度 1 80r/min ,通风量 1 2 1m3/h ,发酵 72h和 96h ,蛹虫草菌丝体 (干 )产率分别为 3 8 6g/L和 42 3g/L。用HPLC法检测腺苷和蛹虫草菌素的含量 ,72h时分别为湿菌丝体中 0 3 5 2 μg/g和 0 1 3 4μg/g ,发酵液中 0 1 79μg/mL和 0 1 0 2 μg/mL ;用比色法在41 2nm处检测虫草酸的含量 ,湿菌丝体中为 2 3 40 6mg/g,发酵液中为 6 61mg/mL。     

蛹虫草发酵产虫草素的培养条件研究

研究外源添加物,麸皮、玉米芯、腺苷等对蛹虫草液体发酵合成虫草素的影响,结果表明,发酵5d后加入3g/L腺苷,虫草素的产量最高。当腺苷添加量大于4g/L时,虫草素对腺苷的得率维持在25%,虫草素产量最大能达到1.62g/L。通过分析菌丝体生长与虫草素合成的动力学关系,发现虫草素的合成属于部分生长偶联型发酵。当振荡发酵4d后,静置发酵7d,虫草素的产量达到1.60g/L,产率达到145.5mg/L/d。这一蛹虫草合成虫草素的发酵工艺具有潜在的工业应用价值。     

栽培基质及碳源对蛹虫草子实体中主要有效成分的影响

主要通过改变蛹虫草固体栽培基质(大米、小米、高粱米、玉米、小麦)和添加不同的碳源(葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蔗糖、乳糖、甘露醇),探索这2个因素对蛹虫草子实体中腺苷、虫草素、SOD酶、多糖等的影响。综合分析如上有效成分含量值,据此选取葡萄糖为最佳碳源(腺苷含量为169.5 mg/100 g,虫草素含量为149.0 mg/100 g,SOD活力值为5568.0 U/g,粗多糖含量为2.791 g/100 g),玉米为最佳培养基质(腺苷含量为248.5 mg/100 g,虫草素含量为221.1 mg/100 g,SOD活力值为2325.0 U/g,粗多糖含量为2.774 g/100 g)组合,为蛹虫草保健品中多种有效成分含量的提高提供了理论依据。     

蛹虫草液体发酵产虫草素研究

以蛹虫草液体发酵菌丝体为原料,通过超声、微波方法提取蛹虫草中的虫草素,超声提取时间为20min;微波功率为200W,微波提取时间为110s,提取得到虫草素结晶体,含量是0.006mg/g.以虫草素为指标,通过正交试验确定蛹虫草液体发酵条件,虫草素含量最高的方案为:接种量15％,温度25℃,转数140r/min,培养时间96h.     

冬虫夏草与蛹虫草中虫草素和总糖含量测定

建立高效液相色谱法测定冬虫夏草与蛹虫草中虫草素含量的方法,比较不同产地冬虫夏草和蛹虫草中虫草素和总糖的含量。以水为溶剂超声波提取、高效液相色谱法测定虫草素含量;苯酚-硫酸法测定总糖含量。结果显示冬虫夏草中没有检出虫草素,而不同产地的蛹虫草中虫草素含量有一定区别,含量分别为1.39%、0.48%、0.11%;总糖含量是蛹虫草高于冬虫夏草,其中不同产地的冬草夏草总糖含量没有差别,而不同产地的蛹虫草总糖含量相差较大,分别为14.69%、20.61%、34.33%。     

蛹虫草液态发酵过程中有效成分的动态积累变化

通过对蛹虫草4号菌株进行摇瓶液态发酵培养,考察了蛹虫草发酵过程中发酵液及菌丝体生物量、虫草多糖、虫草酸及虫草素含量的动态积累变化情况。结果表明:70%以上的虫草多糖、虫草酸、虫草素分布在发酵液中。蛹虫草菌在第10天生物转化量达到最大值20.44 mg/mL,虫草酸、虫草多糖、虫草素含量分别在第11、13、14天达到最大值,综合考虑3种产物的最佳发酵周期,将蛹虫草发酵时间定为12 d。10 L发酵罐深层培养试验的结果表明,生物量达24.5 mg/mL,比摇瓶培养提高19.86%,而虫草酸、虫草多糖、虫草素含量分别为7.43、2.82、90.73μg/mL,比摇瓶培养分别提高8.3%、13.7%和15.6%。     

粒径对蛹虫草活性物质溶出量的影响

为研究粒径对蛹虫草活性物质溶出量,使用通过不同药典筛的蛹虫草粉末,采用高效液相色谱仪和紫外分光光度计测定蛹虫草的活性物质含量。结果表明:喷司他丁溶出量在0.074 mm药典筛下筛分出的药材粉末中达到最高,为491.534μg/g;麦角甾醇溶出量在0.27 mm药典筛下筛分出的药材粉末中达到最高值,为1 785.551μg/g;类胡萝卜素溶出量在0.12 mm药典筛下筛分出的药材粉末中达到最高,为2 982.283μg/g;虫草酸溶出量在0.12 mm药典筛下筛分出的药材粉末中达到最高,为62.255 mg/g;蛋白质溶出量在0.23 mm药典筛下筛分出的药材粉末中达到最高,为12 678.201μg/g;黄酮溶出量在0.15 mm药典筛下筛分出的药材粉末中达到最高,为19.845 mg/g。不同粒径样品影响不同活性物质的溶出量,选择合适的粒径能提高蛹虫草活性物质溶出量。     

反相高效液相色谱法测定蛹虫草中腺苷和虫草素的含量

建立一种新的反相高效液相色谱方法,用于蛹虫草中腺苷和虫草素的定性定量分析。样品经水超声提取,以终浓度20mmol/L柠檬酸、40mmol/L醋酸、20mmol/L三乙胺的混合溶液- 乙腈(体积比98:2)为流动相,流速1.0mL/min,色谱柱Capcellpak C18(150mm × 4.6mm,5μm)分离,柱温40℃,进样量10μL,紫外检测波长260nm。在此条件下,腺苷在1～1000μg/mL 范围内有良好的线性关系(Y=33574X+54.526,R2=0.9999),检测限0.2μg/mL,回收率93.75%～96.90%,RSD 为0.116%;虫草素在2～1000μg/mL 范围内有良好的线性关系(Y=34385X+23.103,R2=1.0000),检测限0.2μg/mL,回收率92.03%～97.35%,RSD 为0.104%。该方法样品处理简便、分离度高、杂质干扰小、回收率高、重复性好,能够对蛹虫草中腺苷和虫草素进行准确的定性定量分析。     

虫草素的微波- 超声波协同提取

研究蛹虫草菌丝体中虫草素的提取工艺及检测方法。确定微波- 超声波协同提取法为虫草素提取的最佳方法,依据单因素和正交试验获得最佳的提取工艺：乙醇体积分数70%、提取功率200W、提取时间110s、料液比1:240(g/mL)。此时虫草素含量达9.228mg/g。采用紫外分光光度法测定样品中虫草素含量,回收率为97.41%～99.60%,RSD 为1.469%,准确度和精密度都较高,是一种方便、成本较低的检测方法。     

干制方法对蛹虫草超微粉营养特征物质及物理特性的影响

以新鲜蛹虫草子实体为原料,分别采用40、60、80℃热风烘干和真空冷冻干燥,研究不同干制方法对蛹虫草营养特征物质及物化特性的影响。结果表明:低温有助于SOD酶活的保存,冻干虫草的SOD酶活为36.73U/mg;80℃高温或24 h以上的长时间的干制均不利于虫草素的保存,60℃烘干和冻干处理24 h虫草的虫草素含量分别为148.84μg/g和143.14μg/g;高温短时的干制方法有利于腺苷的保存,80℃烘干6 h虫草的腺苷含量为592.01μg/g;冻干虫草超微粉的流动性最小,4种干制方法对虫草超微粉的膨润特性均无明显影响。     

液体发酵蛹虫草中虫草素含量分布的研究

研究蛹虫草在5种不同培养基中经液体发酵后菌丝体和发酵液中虫草素占总虫草素含量的分布情况,建立一种高效液相色谱法测定虫草素的含量的方法。色谱柱为Welch Ultimate XB-C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相：水-甲醇（85∶15,V/V）;流速：1 mL/min;检测波长：260 nm;虫草素在0.312 5～20 μg/mL线性关系良好（R=0.999 7）,加标回收试验中发酵液和菌丝体中虫草素的平均回收率分别是99.5%、99.2%,相对标准偏差（RSD）分别为1.081%、1.086%,稳定性和精密度试验检测结果的RSD分别为2.68%和1.9%。表明该方法的准确性、精密度及稳定性良好。结果表明,液体发酵培养蛹虫草时,发酵液与菌丝体中虫草素的质量比约为97:3,改变培养基的种类不会影响总虫草素在发酵液与菌丝体中的分配比。     

虫草枸杞复合发酵工艺研究

在蛹虫草液体培养过程中加入枸杞汁,进行虫草枸杞复合发酵,对发酵过程中虫草菌生长曲线及发酵产物有效成分含量进行了测定。确定了虫草枸杞复合发酵最佳工艺条件为:蛹虫草发酵72 h时向培养基中添加5 g/L的枸杞匀浆液,发酵周期144 h。在此工艺条件下,复合发酵产物产量较虫草菌丝体升高了112.12%,达11.73 g/L。其中虫草素含量11.23 mg/g,虫草酸含量178.21 mg/g,多糖含量30.73 mg/g,较虫草菌丝体分别提高了29.98%,64.46%和97.20%。复合发酵产物抗氧化能力较虫草菌丝体升高了44.62%。     

不同固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响

通过测定不同固态培养基培养蛹虫草子实体的生长情况,虫草素、虫草酸、虫草多糖含量,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）自由基清除率及2,2'-联氮-双-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸（ABTS）自由基清除能力,研究不固态培养基对蛹虫草子实体品质的影响。结果表明,不同固体培养基培养蛹虫草子实体的活性物质与抗氧化活性差异显著（P＜0.05）,其中小米+麦麸培养基培养蛹虫草子实体的生长情况较佳,出芽时间最快,为12 d,子实体最长,为（6.50±0.15） cm,鲜质量最重,为（8.58±0.07） g,其虫草素和虫草酸含量最高,分别为（6.53±0.06） mg/g和（7.66±0.21） mg/g;薏仁米培养基培养蛹虫草子实体虫草多糖含量最高,为（59.07±1.89） mg/g,薏仁米＋麦麸培养基抗氧化活性最强,DPPH自由基清除率和ABTS自由基清除率分别为（66.84±0.77）%、（68.28±0.26）%。     

蛹虫草甜米酒的酿造工艺研究

以蛹虫草大米为原料,酿造蛹虫草甜米酒。通过单因素和正交试验,对蛹虫草甜米酒的酿造工艺进行优化。结果表明,蛹虫草甜米酒的最佳酿造工艺条件为：甜酒曲接种量为1.5%,料液比为1∶3.0（g∶mL）,发酵温度28 ℃,发酵时间为3 d。在此工艺条件下,蛹虫草甜酒中虫草总糖含量为10.03 g/100 mL,虫草素含量1.24 mg/100 mL,酒精度1.2%vol,感官评分95分。此最佳工艺酿造的蛹虫草甜米酒呈现淡黄色,酒液澄清透明,复合香气协调浓郁,口感甜爽,余味绵长,同时具有较高的营养价值。     

蛹虫草类胡萝卜素提取工艺的研究

目的:研究蛹虫草中类胡萝卜素的提取工艺。方法:采用正交试验法进行优选,分光光度法测定类胡萝卜素含量。结果:酸热法对蛹虫草中类胡萝卜素的提取有显著性影响。结论:最优提取组合为盐酸浓度1mol/L、盐酸用量15mL/g、酸浸时间20min、热处理时间4min,丙酮是从蛹虫草中浸提类胡萝卜素较优越的有机溶剂;在此浸提条件下,蛹虫草中类胡萝卜素含量可达2158μg/g干样品。     

焙烤工艺优化对蛹虫草焙烤食品的非功能性研究

为了开发蛹虫草焙烤食品并提高其中营养价值和保健功能,以虫草素和腺苷含量为评价指标,研究面粉类型、焙烤温度、焙烤时间、初始水分含量、蛹虫草粉添加量、蛹虫草粉固体大小和面团静置时间对焙烤后虫草素和腺苷含量的影响。根据单因素试验结果,对蛹虫草焙烤食品的焙烤工艺进行正交试验的优化,得到最佳的焙烤工艺为使用高筋粉、焙烤温度上火140℃、下火120℃、焙烤时间20 min、初始水分含量15%、蛹虫草粉添加量10%、蛹虫草粉过80目筛和面团静置时间5 min,该条件下焙烤后虫草素含量为1521.0413μg/g,腺苷含量为1281.8962μg/g。