体外模拟胃肠消化对缢蛏抗氧化活性的影响

目的 基于体外模拟消化系统探究胃肠模拟消化对缢蛏的抗氧化活性的影响以及氨基酸含量的变化。方法 以新鲜缢蛏为原料,向体外模拟消化系统加入胃蛋白酶和胰蛋白酶,模拟在胃液和肠液下的胃消化、十二指肠消化和小肠消化过程,研究缢蛏在消化过程中的羟基自由基(·OH)清除率、二苯代苦味酰基自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl radical, DPPH·)清除率、还原力、水解度、游离氨基态氮及游离氨基酸含量的变化。结果 整个胃肠消化阶段,加酶组的·OH清除率、DPPH·清除率、还原力均高于对照组。肠消化产物的·OH清除率、DPPH·清除率、还原能力及水解度均高于胃消化产物,并且肠消化产物中的总游离氨基酸含量及具有抗氧化特征的氨基酸含量均显著高于胃消化产物(P<0.05)。在十二指肠消化阶段,·OH清除率、DPPH·清除率、还原力值达到最高。结论 体外模拟消化处理能够提高缢蛏的抗氧化活性,其中十二指肠消化阶段产物抗氧化活性最高。     

牡蛎抗氧化及降糖肽的结构特征及其体外模拟消化特性

表征了牡蛎抗氧化及降糖肽的结构特征,并探究了体外模拟胃肠消化对其抗氧化和降糖活性的影响,评估牡蛎肽在消化系统中的稳定性。以酶解法制备的牡蛎肽为原料,采用HPLC法分析其分子质量分布;利用氨基酸组成分析仪及高效液相串联质谱技术分析牡蛎抗氧化及降糖肽的结构特征;通过体外模拟消化模型研究胃肠消化前后牡蛎肽的短肽含量、氨基酸组成、抗氧化活性(DPPH自由基清除率)、降糖活性(α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率)。结果表明,牡蛎肽分子质量主要分布在2 kDa以下,富含必需氨基酸(46.94%)和疏水性氨基酸(47.68%);其富含支链氨基酸和脯氨酸,且靠近肽链N端位置,是抗氧化及降糖肽的典型结构模式,且其疏水性氨基酸高达43.22%,与氨基酸组成分析结果一致。牡蛎肽的短肽和游离氨基酸含量经胃肠消化后显著增加,而DPPH自由基清除率、α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制率显著降低,说明胃肠消化可能会通过降解牡蛎肽影响其消化稳定性,进而显著降低其抗氧化和降糖活性。该研究结果为进一步开展牡蛎肽消化吸收及稳态化保护研究提供了科学依据。     

膜分离蚕豆蛋白酶解产物的理化性质及生物活性北大核心CSCD

以新鲜蚕豆为原料,采用碱溶酸沉法提取蚕豆蛋白,采用4种不同蛋白酶对蚕豆蛋白进行单酶或双酶酶解,通过比较蚕豆蛋白水解度和多肽得率筛选出最优的两种酶复合酶解蚕豆蛋白,将复合酶解液通过膜分离技术分离得到BBPHs-Ⅰ(<1 kDa)、BBPHs-Ⅱ(1~3 kDa)、BBPHs-Ⅲ(3~5 kDa)、BBPHs-Ⅳ(5~10 kDa)、BBPHs-Ⅴ(>10 kDa)5个不同分子质量的组分,对5个组分的氨基酸组成、紫外光谱、红外光谱进行分析,同时通过测定体外抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶抑制率表征其活性。结果表明:选用菠萝蛋白酶和木瓜蛋白酶对蚕豆蛋白进行复合酶解;与膜分离前比较,膜分离后10 kDa以下的蚕豆蛋白酶解产物总氨基酸含量增加,BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ的疏水氨基酸含量较高,此外BBPHs-Ⅲ的总氨基酸、必需氨基酸、疏水氨基酸、芳香氨基酸含量均为最高,分别为65.304%、19.222%、20.762%、8.769%。不同分子质量的蚕豆蛋白酶解产物表现出一定体外抗氧化能力,当质量浓度为10 mg/mL时,BBPHs-Ⅳ的ABTS自由基清除率可达(27.89±0.01)%,BBPHs-Ⅱ的DPPH自由基清除率可高达(57.70±0.00)%;当质量浓度在2~32 mg/mL范围内,不同分子质量蚕豆蛋白酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制活性呈剂量依赖关系,BBPHs-Ⅱ、BBPHs-Ⅲ、BBPHs-Ⅳ表现出良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,质量浓度为32 mg/mL时BBPHs-Ⅲ的α-葡萄糖苷酶活性抑制率最佳,达到(86.56±1.23)%。因此,通过膜分离技术得到的小分子质量的蚕豆蛋白酶解产物具有更好的抗氧化活性和α-葡萄糖苷酶抑制活性,具有良好的开发及应用前景。     

酶法制备元蘑蛋白肽及其分级组分抗氧化活性研究

研究风味蛋白酶制备元蘑蛋白肽的工艺条件,并分析蛋白肽分级组分氨基酸组成、红外结构及体外抗氧化活性。以水解度和DPPH·清除率为指标,在单因素试验基础上通过响应面法优化元蘑蛋白肽酶解条件;将元蘑蛋白肽按分子量大小分级为P₁（＜3.5 kDa）、P₂（3.5～10.0 kDa）及P₃（＞10.0 kDa）;分析3个组分氨基酸组成、红外光谱特征;分析DPPH·、ATBS⁺·、·OH等清除作用以及体外模拟胃肠消化作用。结果表明：风味蛋白酶制备元蘑蛋白肽的最佳条件为pH 7.6、酶解时间3.0 h、酶解温度42 ℃;3个组分中总氨基酸含量最高以及综合抗氧化效果最好的为大分子量的P₃ 组分（P＜0.05）;3个组分红外光谱峰形基本一致;通过体外模拟胃肠后3个组分活性基本没有变化。通过风味蛋白酶酶解并分级可以制得氨基酸含量丰富、性能稳定并具有较好抗氧化作用的元蘑蛋白肽;元蘑蛋白肽分子量越大,抗氧化效果越好。     

波纹巴非蛤蛋白酶解产物的抗氧活性及分子量分布研究

以波纹巴非蛤为原料,分离得到肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白3种蛋白组分,分别研究其氨基酸组成及其胰蛋白酶酶解产物的体外抗氧化活性及分子量分布。结果表明该三种蛋白质中必需氨基酸、碱性氨基酸、疏水性氨基酸和支链氨基酸含量较高。抗氧化实验结果显示,三种蛋白对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除效果,且清除率与酶解液浓度存在一定的量效关系。与其它两种蛋白酶解产物相比,肌浆蛋白酶解液中小分子肽含量最高,分子量小于1500 u占42.55±0.27%,其对自由基清除效果也明显高于其它两种蛋白酶解液,对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由清除活性的IC50值分别为4.82、4.70和3.75 mg/mL。肌浆蛋白和肌原纤维蛋白酶解产物的还原能力相当,浓度为10 mg/mL时,其OD700分别为0.58和0.57,基质蛋白酶解产物的还原能力较弱。     

模拟胃肠消化对牡蛎低聚肽抗氧化活性的影响

以去壳牡蛎肉为原料通过酶解法制备牡蛎低聚肽,并通过体外模拟消化试验,对比消化前后牡蛎低聚肽分子量分布、DPPH自由基清除能力、羟自由基(·OH)清除能力、ABTS自由基清除能力、氧自由基吸收能力(ORAC)变化,探究牡蛎低聚肽经模拟胃、肠道消化后抗氧化活性的变化。试验结果显示,牡蛎低聚肽的相对分子量主要在1 000 Da以下,胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后重均分子量下降不超过8.2%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,DPPH自由基清除率降低分别不超过7.9%,8.7%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,·OH清除率降低分别不超过9.3%,3.8%;胃蛋白酶消化后,ABTS自由基清除率降低9.2%,胰蛋白酶消化后,ABTS自由基清除率提高3.6%;胃蛋白酶和胰蛋白酶消化后,ORAC值分别提高11.5%,1.3%。胃肠消化对牡蛎低聚肽的抗氧化活性评价各指标均无显著性影响(P＞0.05)。说明牡蛎低聚肽具有较好的综合抗氧化活性和稳定性。     

波纹巴非蛤蛋白酶解产物的抗氧活性及分子量分布研究

以波纹巴非蛤为原料,分离得到肌浆蛋白、肌原纤维蛋白、基质蛋白3种蛋白组分,分别研究其氨基酸组成及其胰蛋白酶酶解产物的体外抗氧化活性及分子量分布。结果表明该三种蛋白质中必需氨基酸、碱性氨基酸、疏水性氨基酸和支链氨基酸含量较高。抗氧化实验结果显示,三种蛋白对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由基均有一定的清除效果,且清除率与酶解液浓度存在一定的量效关系。与其它两种蛋白酶解产物相比,肌浆蛋白酶解液中小分子肽含量最高,分子量小于1500 u占42.55±0.27%,其对自由基清除效果也明显高于其它两种蛋白酶解液,对DPPH自由基、羟基自由基和超氧阴离子自由清除活性的IC50值分别为4.82、4.70和3.75 mg/mL。肌浆蛋白和肌原纤维蛋白酶解产物的还原能力相当,浓度为10 mg/mL时,其OD700分别为0.58和0.57,基质蛋白酶解产物的还原能力较弱。     

源于地龙蛋白的抗氧化肽鉴定与构效关系

为探究外源蛋白酶预酶解处理对地龙蛋白胃肠消化程度和胃肠消化后抗氧化活性的影响。该研究利用五种蛋白酶制备了不同的地龙蛋白酶解物,然后通过体外胃肠模拟消化探究这些酶解物的水解度、分子量分布和体外抗氧化活性的变化。五种蛋白酶酶解物中,碱性蛋白酶酶解物的水解度最高,为40.8%,其对DPPH、ABTS自由基的清除能力分别为27.36、175.46 μmol TE/g,ORAC值为0.70 μmol TE/mg。碱性蛋白酶酶解物经胃肠消化后的水解度、DPPH自由基清除率、ORAC值相比于地龙蛋白直接胃肠消化所得产物（EWP）分别提高了94.06%、72.21%及120.00%。GHEWP中鉴定出10 823条分子量<3 ku的肽,通过bioware.ucd.ie进行活性阈值评分筛选出活性评分最高的11个肽进行合成,验证活性,其中ATSGFFVY、HCFVLY、HLASGWY、HRYSDF、HYANMY的综合抗氧化能力较好,量子化学计算结果表明：ATSGFFVY、HCFVLY、HRYSDF、HYANMY的活性位点可能分别位于Tyr-8、Tyr-6、Tyr-3、Tyr-2上;HLASGWY的活性位点可能位于Trp-6上。该研究表明碱性蛋白酶预酶解可提高地龙蛋白的消化程度,增强其胃肠消化产物的抗氧化活性。     

体外消化对金瓜籽抗氧化肽抗氧化活性的影响

本实验以金瓜籽为原料,以还原力、羟自由基清除率、DPPH自由基清除率为考察指标,采用响应面试验探讨了制备金瓜籽抗氧化肽的工艺参数,并研究了其经体外模拟人体胃肠道消化后的游离氨基酸组成、分子质量分布及抗氧化活性变化。结果表明：制备金瓜籽抗氧化肽的最优工艺条件为底物（金瓜籽粕）质量分数为6%、添加碱性蛋白酶3%、在pH?8.5的体系中55?℃酶解90?min,此条件下所得羟自由基清除率、DPPH自由基清除率、还原力分别为（58.19±0.80）%、（60.27±1.73）%和0.49±0.01;分子质量小于3?kDa、3～5?kDa及大于5?kDa的抗氧化肽经体外模拟胃肠道消化后分别含游离氨基酸41.72%、36.94%和33.93%,其主要为分子质量小于500?Da的肽段,占比分别为73.50%、60.15%和53.30%;与消化前相比,消化产物对羟自由基的清除能力分别提高了26.04%、29.06%和34.43%,还原力分别提高了50.98%、64.53%、67.35%。该研究可为金瓜籽抗氧化肽作为功能性抗氧化剂的生产和应用提供参考。     

酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的研究

为优化Alcalase蛋白酶酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的工艺条件,以DPPH自由基清除率作为指标,通过单因素试验考察酶解温度、底物浓度、酶与底物浓度比([E]/[S])、酶解pH和时间对DPPH自由基清除率的影响,在单因素试验的基础上,采用Box-Behnken设计,建立并分析各因素与清除率之间关系的数学模型;并对酸枣仁蛋白酶解产物的氨基酸组成及含量进行分析。结果表明:酶解酸枣仁蛋白制备抗氧化肽的最佳工艺条件为酶解温度51.2℃、酶解pH8.1、底物浓度4.7%,在此条件下DPPH自由基清除率的最大理论值为91.59%,该回归模型具有较好的预测性能,可用于指导生产实践。酸枣仁蛋白酶解产物共含有17种氨基酸,富含脯氨酸、甘氨酸和谷氨酸。     

3种黑色粮油作物种皮提取物体外抗氧化活性研究

从总抗氧化力、还原能力、清除DPPH自由基能力和抗油脂氧化能力四个方面研究了黑米提取物、黑大豆提取物和黑玉米提取物的抗氧化活性。结果表明,在实验浓度范围内,3种黑色粮油作物种皮提取物均有一定程度的抗氧化活性,四个方面的抗氧化活性实验均显示抗氧化强弱顺序为黑大豆提取物>黑米提取物>黑玉米提取物,其中黑大豆提取物清除DPPH自由基能力及在花生油体系中的抗油脂氧化能力均高于Vc。     

芦笋老茎多糖体外抗氧化及降血糖作用研究

以芦笋老茎为原料,经提取、分离纯化获得芦笋老茎多糖,对不同浓度芦笋老茎多糖的DPPH·清除能力、·OH清除能力、还原能力、α-葡萄糖苷酶抑制率、α-淀粉酶抑制率等抗氧化及降血糖活性指标进行了研究。结果表明:在一定浓度范围内,随着芦笋老茎多糖浓度的增大,其对DPPH·的清除率呈逐渐上升趋势,存在一定的浓度依赖性;当浓度为3 mg/mL时,芦笋老茎多糖对DPPH自由基的清除率可达73.37%,与相同浓度的Vc清除率的差值约为20%。随着浓度的增加,芦笋老茎多糖对·OH清除率呈先上升后逐渐趋于平稳趋势,当浓度为1.5 mg/mL时,清除率可达90.56%,随后增速放缓;且当浓度低于1.5 mg/mL时,清除能力明显弱于Vc,高于1.5 mg/mL时,清除能力逐渐接近Vc。随着浓度的增加,芦笋老茎多糖的还原能力呈逐渐上升趋势,存在一定的浓度依赖性,且在相同浓度下,芦笋老茎多糖的还原能力要明显弱于Vc。在一定浓度范围内,芦笋老茎多糖对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制率整体上存在一定的浓度依赖性,随着多糖浓度的增加,抑制率呈逐渐增强随后略有降低趋势,当多糖浓度为7 mg/mL时抑制率最大,抑制率分别可达87.46%和90.91%。说明芦笋老茎多糖具有较好的体外抗氧化及降血糖作用效果,为芦笋老茎的综合利用提供一定的应用指导。     

In vitro skin permeation of sunscreen agents from O/W emulsions

The effects of different emulsifiers on the in vitro permeation through human skin of two sunscreen agents [octylmethoxycinnamate (OMC) and butylmethoxydibenzoylmethane (BMBM)] were investigated from O/W emulsions. The test formulations were prepared using the same oil and aqueous phase ingredients and the following emulsifier and coemulsifier systems: Emulgade SE((R)) (ceteareth-12 and ceteareth-20 and cetearyl alcohol and cetyl palmitate) and glycerylmonostearate (emulsion 1); Brij 72((R)) (steareth-2), Brij 721((R)) (steareth-21) and cetearyl alcohol (emulsion 2); Phytocream((R)) (potassium palmitoyl-hydrolysed wheat protein and glyceryl stearate and cetearyl alcohol) and glycerylmonostearate (emulsion 3); Montanov 68((R)) (cetearyl glucoside and cetearyl alcohol) (emulsion 4); Xalifin-15((R)) (C(15-20) acid PEG-8 ester) and cetearyl alcohol (emulsion 5). The cumulative amount of OMC that permeated in vitro through human skin after 22 h from the formulations being tested decreased in the order 3 > 1 congruent with 4 > 5 > 2 and was about nine-fold higher from emulsion 3 compared with that from emulsion 2. As regards BMBM, no significant difference was observed as regards its skin permeation from emulsions 1, 3, 4 and 5, whereas formulation 2 allowed significantly lower amounts of BMBM to permeate the skin. In vitro release experiments of OMC and BMBM from emulsions 1-6 through cellulose acetate membranes showed that only emulsions 4 and 5 provided pseudo-first-order release rates only for OMC. The results of this study suggest that the type of emulsifying systems used to prepare an O/W emulsion may strongly affect sunscreen skin permeation from these formulations. Therefore, the vehicle effects should be carefully considered in the formulation of sunscreen products.     

铁皮石斛复配花茶制作工艺及其功能性研究

以铁皮石斛花为主要原料,将其与菊花、茉莉花进行复配,采用混料设计,以多糖、黄酮、多酚含量为考察指标,结合感官评价进行权重分析,确定铁皮石斛花复配茶的最佳复配比例并研究其体外抗氧化、降血糖活性。试验结果表明,m(铁皮石斛花)∶m(茉莉花)∶m(菊花)=5∶1∶4为最佳复配比例,多糖、多酚、黄酮含量分别为18.89、30.85、51.27 mg/100mL。铁皮石斛花茶与铁皮石斛复配花茶水提物对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基、ABTS自由基清除率IC 50分别为:石斛花茶0.89、3.51、8.76、1.34 mg/mL,石斛花复配茶0.49、4.20、5.70、0.78 mg/mL;铁还原能力测定最大吸光值分别为0.88、1.28。对α-葡萄糖苷酶及α-淀粉酶的抑制活性IC 50值分别为:铁皮石斛花茶4.47、3.26 mg/mL;铁皮石斛花复配茶5.86、5.50 mg/mL,制备得到的铁皮石斛花复配茶具有良好的抗氧化能力及一定的降血糖效果。研究结果为铁皮石斛花资源的有效利用及多元化产品开发提供了理论依据,最终得到兼具口感与功能性的铁皮石斛复配花茶,为铁皮石斛复配花茶的规模标准化加工提供理论支撑。     

Comparison of in vitro degradation of temperate forages using the gas production and filter bag techniques

BACKGROUND: Two of the most promising in vitro techniques for dynamic forage evaluation are the gas production (GP) and filter bag (FB) techniques. To improve our understanding of how these techniques describe the dynamic degradation of forages, 20 temperate forage samples were analysed by each method at different time points during a 96 h incubation period. The results of the recordings were fitted to a biphasic Michaelis–Menten model describing the degradation of rapidly and slowly degrading forage fractions. RESULTS: GP and disappearance from the FB measurements were correlated at all time points from 6 to 96 h (R² = 0.27–0.74), except at the 24 h incubation point. When GP was transformed into organic matter degradation (OMD), there was an even stronger correlation (R² = 0.54–0.75) between the techniques at all intervals. Comparison of the parameters from the Michaelis–Menten model resulted in correlations (R² = 0.83) between the sizes of the estimated forage fractions, but not between parameter determining the rates of their degradation. CONCLUSIONS: Both the GP and FB techniques have the potential to estimate the degradation of individual feed fractions in forages. Further studies in which the in vitro parameters are evaluated against livestock data, are needed to confirm the findings of this study, however. Copyright © 2007 Society of Chemical Industry     

Production of steviosides in ex vitro and in vitro grown Stevia rebaudiana Bertoni

Stevia rebaudiana Bertoni plants grown in vitro and ex vitro were investigated for variations in the profile of steviosides in their leaves, shoots, roots and flowers. Steviosides were extracted by hydrolysis and esterification, evaporated to dryness and dissolved in methanol for quantitative analysis by high‐performance liquid chromatography (HPLC). The HPLC analysis and separation profiles indicated the presence of several different steviosides, predominantly eight known sweet diterpene glycosides. The most abundant compounds identified were steviolbioside, stevioside, rebaudiosides C and A and dulcoside A. The highest stevioside contents were recorded in 1‐month‐old greenhouse leaves (64.80 g steviolbioside kg^?1 dried plant material) and in vitro leaves (0.99 g rebaudioside A kg^?1 dried plant material). The recovery of steviosides from the leaves by methanol extraction was 90%. This is the first time that the eight predominant sweet diterpene glycosides in the various plant parts of S. rebaudiana have been investigated. Copyright © 2006 Society of Chemical Industry     

海藻糖基麦芽五糖及其微球的体外消化和酵解

为研究包埋前后的海藻糖基麦芽五糖(N-G7)在模拟消化液及体外酵解过程中的变化,采用口腔、胃部及小肠的体外消化模型分析消化前后溶液中N-G7的质量和N-G7微球(ALGCa)中的糖组成变化,应用体外发酵技术评价N-G7微球的发酵行为,检测不同时间点的pH值、菌体浓度(OD₆₀₀)、产气量、短链脂肪酸(SCFA)浓度等指标的变化,并探究其对人体肠道微生物构成的影响。结果表明：N-G7在口腔消化2 min后在强酸性的胃部环境中几乎不被水解,在小肠中N-G7的水解率达到了82.70%。采用不同质量分数(1%、2%、3%)的海藻酸钙对其进行包埋,形成的微球保留80%以上的N-G7到达结肠。在体外酵解中,各实验组的pH随时间延长逐渐降低,OD600随时间延长逐渐增加。质量分数2%的ALG-Ca组产气量和碳源消耗率在0～6 h内达到最低,而后逐渐增加,证明包埋后的N-G7发酵体系属于缓慢发酵。与对照相比,质量分数2%的ALG-Ca组产生大量SCFA,肠道菌群组成发生变化,更有利于益生菌的生长。