纳米银对烟草花叶病毒(TMV)的抗性及作用机理

为了开发安全、高效、低毒的新型生物源抗烟草花叶病毒(TMV)药剂,用壳寡糖和壳寡糖席夫碱分别合成了壳寡糖纳米银(cos-Ag)和壳寡糖席夫碱纳米银(简称席夫碱纳米银,S-cos-Ag),并在珊西烟草和普通烟草品种秦烟96上进行了枯斑试验和与抗病性相关指标的测定。结果表明:1S-cos-Ag稀释30倍处理对TMV具有较好的预防和治疗效果,能够显著地减少感染TMV叶片的枯斑数目,预防效果达78.33%;2S-cos-Ag稀释30倍处理能够不同程度地提高烟草叶片中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性,同时叶绿素和可溶性蛋白含量也有明显增加,而丙二醛(MDA)含量有所下降。说明S-cos-Ag稀释30倍处理能够较好地诱导烟草对TMV产生抗性,提高烟草免疫力,从而减轻TMV对烟草的侵害。     

壳寡糖希夫碱配合物对感染TMV的烟叶中叶绿素和相关防御酶活性的调控效应

研究了壳寡糖希夫碱配合物药剂对烟草TMV抑制作用。结果表明:在珊西烟上施用壳寡糖希夫碱配合物药剂后叶片感染TMV的枯斑数减少;（2）施用3,5-二氯水杨醛壳寡糖希夫碱合铜于普通烟后,其受TMV侵染后烟叶中的叶绿素含量下降幅度降低,烟叶中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性均提高。      

壳寡糖及其衍生物抗烟草花叶病毒机理的初步研究

为了开发一种低毒高效的新型抗烟草花叶病毒抑制剂,利用合成的新型寡糖希夫碱衍生物进行了抗烟草花叶病毒的药效研究。结果表明:(1)在珊西烟上,采用枯斑寄主半叶法进行抗烟草花叶病毒的药剂筛选,壳寡糖及其衍生物都能有效减少叶片感染烟草花叶病毒的枯斑数,以枯斑抑制率为66.39%的水杨醛席夫碱的预防效果最好;(2)在普通烟K326上,壳寡糖及其衍生物可降低侵染病毒烟草中的叶绿素下降幅度,还可以提高叶片中的防御酶超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,脯氨酸的含量也得到了积累。     

壳寡糖衍生物纳米银微粒诱导烟株产生TMV抗性

为开发高效、低毒且环境友好的新型抗烟草普通花叶病毒制剂,以合成的具有季铵盐结构的新型壳寡糖希夫碱衍生物为还原剂和稳定剂合成了壳寡糖衍生物纳米银微粒(C₄-AgNPs),并探讨了其对烟草花叶病毒的抑制效应及生理生化机制。结果表明17 μg/mL的C₄-AgNPs在珊西烟上对烟草普通花叶病毒具有良好的预防和治疗效果,防效可达到86.95%;C₄-AgNPs喷施在感染TMV的普通烟K326上可在一定的时间内提高叶片内防御酶过氧化氢酶(CAT)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,使脯氨酸含量得到提高,丙二醛含量降低。      

壳寡糖席夫碱纳米银溶液对烟草花叶病防治及烟叶色素的影响

为开发防治烟草花叶病的新型药剂,采用大田试验研究了壳寡糖纳米银溶液、壳寡糖席夫碱纳米银溶液及宁南霉素对烟草花叶病的田间防治效果。结果表明,壳寡糖和壳寡糖席夫碱的纳米银溶液对烟草花叶病的防治效果均优于宁南霉素,以预防和治疗效果分别达到53.32%、24.95%的壳寡糖席夫碱纳米银溶液为最好,能够减轻病株叶绿素和类胡萝卜素含量的下降幅度,增强烟株的光合作用强度,使烟株的抗病性得到提高。壳寡糖及其衍生物的纳米银溶液对烟草花叶病具有较好的防治效果,为今后开发绿色、高效的抗TMV药剂提供了新思路。     

枯草芽孢杆菌Tpb55抗烟草普通花叶病毒（TMV）活性研究

利用三生-NN烟测定Tpb55菌悬液对烟草普通花叶病毒(TMV)钝化、预防和治疗作用,结果表明,Tpb55菌悬液对TMV具有较好的钝化、预防和治疗效果,枯斑抑制率分别为96.15%、79.72%和65.71%.选用易感TMV烟草品种K326为试验材料,测定Tpb55对TMV控病作用,结果表明,先接种Tpb55菌液再接种TMV的烟株,发病程度明显低于接种TMV再接种Tpb55菌液的烟株;不论在烟株接种TMV前或后,用Tpb55菌液处理烟株的叶片与只接种病毒烟株相比,叶片内过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均显著提高,以接毒前Tpb55菌液处理的烟株活性水平最高.从本试验结果来看,Tpb55具较强的抗TMV活性,可通过直接接触钝化作用及诱导烟草抗病性米抑制TMV侵染.     

井冈霉素A处理珊西烟后对TMV枯斑数目和抗性相关酶的影响

1 μg/mL井冈霉素A处理珊西烟1 d、6 d、9 d后接种烟草花叶病毒TMV,在同株上的药剂处理叶片(叶位6)和药剂未处理叶片(叶位7、8、9)上的枯斑数目均比清水对照处理相同叶位叶片上的枯斑数目显著减少,之间的差异分别达到0.01和0.05的显著水平(t测验)。对1 μg/mL井冈霉素A处理后的珊西烟不同叶位叶片进行几丁质酶和β-1,3-葡聚糖酶的活性测定,结果表明这两种酶的活性在药剂涂抹后1 d、6 d和9 d的处理叶片与未处理叶片均比清水对照植株相同叶位叶片有明显的增加,并与井冈霉素A处理后相同叶位的TMV枯斑数目减少的结果似呈负相关关系。本研究结果初步表明井冈霉素A具有一定诱导植株产生系统抗病毒的作用,为今后扩大该抗生素的应用范围和深入探索其作用机理提供了依据和新的线索。      

壳寡糖对烟草TMV病毒的诱导抗性研究

以壳寡糖诱导烟草枯斑寄主后，调查了病班的抑制率，同时研究了壳寡糖单独处理和以病毒粒子侵染诱导的病程相关蛋白的差异，壳寡糖处理对TMV侵染有保护作用，施用壳寡糖后7d，以浓度为50ug/mL和75ug/mL对枯斑的抑制效果为好，壳寡糖在活体外对TMV粒子有钝化作用，单独施用壳寡糖可以诱导烟草产生6条耐碱性的PR，其中1条区别于TMV侵染诱导的PR。     

烟草花叶病药剂防治效果及其机理研究

本文研究了复方氨基酸等10种药剂对烟草花叶病的防治效果及其防治机理。结果表明:(1)复方氨基酸、抗毒增产剂、植物生理平衡剂、水杨酸和硫酸锌等5种药剂对烟草花叶病均具有一定的预防效果,其中以前两种药剂预防效果最好,防效达58.3%。此外,复方氨基酸还具有较好的治疗作用,治疗效果亦达52.1%;(2)药剂处理可在一定程度上延缓烟株矮化和减轻个体发病程度,抗毒增产剂、硫酸锌、5%菌毒清和复方氨基酸等4种药剂效果明显,尤以前两种药剂刺激烟株生长效果最为明显,株高反而超过无病的健株;(3)药剂处理可使烟草叶片内SOD和POD活性上升,而CAT活性下降,其中复方氨基酸等5种防病效果较好的药剂对酶的活性影响也最大。药剂防治效果与烟叶内SOD、POD活性呈正相关,而与CAT活性呈负相关。      

壳寡糖诱导柑橘果实抗病作用中的活性氧变化

以采后柑橘果实(Citrus Sinensic Osbeck cv. Jincheng 447#)为试材,研究1.5% (g/g)壳寡糖溶液浸泡1min后不同时间损伤接种炭疽病菌的柑橘果实的发病率情况,并对壳寡糖诱导柑橘果实贮藏前期抗病作用中的活性氧变化进行研究。结果表明,在贮藏9d 时,壳寡糖处理柑橘果实损伤接种的发病率显著低于对照果实,壳寡糖诱导1d 后损伤接种的柑橘果实的发病率最低。与对照果实相比,1.5% 壳寡糖诱导促进了柑橘果皮中信号物质过氧化氢(H2O2)的合成,延缓了还原型抗坏血酸(ASA)和还原型谷胱甘肽(GSH)含量的下降,并提高了柑橘果皮中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性。     

巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium，Bm）的抑菌活性及定殖规律分析

为进一步明确巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium,Bm）菌株对烟草主要病害的抑制效果,利用半叶法、对峙平板法和抑菌圈法研究了Bm对烟草花叶病毒（TMV）、黑胫病菌和青枯病菌的抑制作用;利用抗生素诱导筛选抗药性标记菌株,研究其在烟草根际土壤和叶面上的定殖规律;同时制备了生防菌发酵液制剂,测定其田间防治效果。结果表明:Bm发酵液和发酵上清液对烟草花叶病毒的抑制率分别为88.4%和74.3%;Bm无菌发酵上清液对黑胫病菌菌丝生长的抑制率为67.5%,对青枯病菌的抑菌圈直径为10.03 mm。抗药性菌株Bm-rif生长性状与野生型无差异。室内定殖试验结果显示,Bm-rif稳定定殖菌量在非灭菌土壤中为0.04×105 cfu/g,在灭菌土壤中为0.47×105 cfu/g,均显著高于叶面定殖菌量;接种TMV-GFP前24 h叶面喷施发酵液对TMV初侵染的抑制率为44.04%。菌株发酵液稀释后喷淋烟株茎基部,对烟草黑胫病和青枯病的田间防治效果分别为68.09%和51.02%。因此,Bm具有抑菌活性且能在烟草根际土壤中有效定殖,具有开发为生防菌剂的潜力。      

菌克毒克防治烟草普通花叶病毒(TMV)及对病程相关蛋白的诱导作用研究

１９９８～１９９９年在室内进行了菌克毒克防治ＴＭＶ药效试验。室内结果表明,使用菌克毒克１５０倍液、２００倍液、２５０倍液预防烟草花叶病毒的防效依次为８２．２％、７０％、６１．１％。抗病毒剂菌克毒克注射于珊西烟（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ ｔａｂａｃｕｍ ｖａｒ．Ｘａｎｔｈｉ ｎｃ）下部叶片,上部叶片接种ＴＭＶ,结果菌克毒克诱导上部未注射叶片对ＴＭＶ侵染的抗性对侵染的抑制率为６５．５％～８２．６％,对菌克毒克处理叶片及上部叶未处理叶片细胞间液中的病程相关蛋白进行电泳分析,结果表明,菌克毒克可系统地诱导珊西烟产生７种健康植株所设有的ＰＲ蛋白,ＰＲ蛋白的诱导与抗病性、耐病性的诱导相一致。     

一种利用水提物快速简便检测烟草中TMV 的方法

由烟草普通花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)侵染所致的植物病毒病是世界性的难题,具有寄主广泛,易于传播等特点。笔者研究了一种快速简捷检测烟草中TMV 的方法,通过利用无菌水研磨TMV 侵染后发病的烟草病叶,取上清液进行1%的琼脂糖凝胶电泳检测,可检测到一条特异性的,大小为6 000 bp 的电泳条带,而在健康烟草叶片水提物中却检测不到该电泳条带的存在。以TMV 复制酶基因片段为探针,对该特异性电泳条带进行Northern-blotting 分析。结果表明, 水提物中的电泳条带与TMV 复制酶基因探针发生较强的杂交信号,暗示该条带可能为TMV 的基因组。因此,该方法可在 10 min 内方便快速的检测烟株中TMV 的存在,避免了常规血清学检测和分子检测(RT-PCR 和western-blot)等方法的昂贵试剂和繁琐的操作步骤。但是该方法的水提取物在室温下不稳定,当静止3 h 以上,就很难再检测到特异性的电泳条带。     

贵州烤烟TMV的越冬存活

研究了贵州烟草普通花叶病毒(TMV)在烤烟不同烟株残体和其它寄主植物上的越冬存活情况。结果表明,①病秆露在土表比埋在土中,TMV更容易失去侵染力;TMV在粗根中存活的时间比在茎、叶中长,在叶片中存活的时间最短;病茎、叶中的TMV在水环境中经过10个月失去侵染力;在室内过冬的病烟秆和在土中过冬的烟桩能导致假植烟苗严重发病。②经过6～11月后,土表的病烟杈中未能检出有侵染力的TMV;用病烟权作猪饲料,煮后仍有较多病毒存活。③病株种子的果壳碎屑有病毒存活,但不导致烟苗发病。④仅在番茄、辣椒、白菜和刺天茄等其它寄主中检出TMV。总体认为,病株烟秆、烟根是TMV的主要越冬处所,即初侵染来源;刺天茄是重要的野生寄主。因此,提出以合理处理烟株残体、轮作和使用抑芽剂为主的防治对策,此对TMV的预防具有积极意义。     

抗烟草花叶病毒(TMV)生防菌的鉴定及其发酵条件优化

为有效防治烟草普通花叶病毒病(TMV),从土壤中分离筛选到1株抗TMV的细菌菌株Z5,经形态学、生理生化和分子生物学鉴定为贝莱斯芽胞杆菌(Bacillus velezensis),该菌培养液对TMV体外抑制率达到96.40％,田间小区试验对烟草普通花叶病毒病的防效为50.43％.通过单因素法优化Z5发酵体系,最适培养基...     

海藻糖增强烟草对普通花叶病的抗性及其机理的初步分析

[目的]明确海藻糖能否增强烟草对烟草花叶病毒（Tobacco mosaic virus，TMV）病的抗性。[方法]采用半叶枯斑法、组织化学染色法、qPCR等技术分析海藻糖对TMV钝化、预防和抑制的效果，海藻糖处理后烟叶中活性氧的含量和渗透调节物质的含量、抗氧化酶活性变化，相关抗氧化和抗病基因的表达变化。[结果]海藻糖能够钝化TMV，对花叶病有治疗和预防的效果。海藻糖处理24 h后，烟叶中H₂O₂和脯氨酸含量升高，POD和SOD活性下降，APX和编码NADPH氧化酶亚基基因的表达水平升高，抗病基因PR、N-LIKE基因和NtEIG-48表达增加。海藻糖处理未影响烟株的正常生长。[结论]认为海藻糖可能通过提高叶片中的H₂O₂含量，激活抗病基因表达而增强烟草对TMV的抗病性。      

疫霉葡聚糖激发子Gep1诱导烟草对烟草花叶病毒的抗性研究

烟草花叶病毒病是危害烟草的重要病害,可通过激发子诱导烟草产生抗病性。利用乙醇沉淀、DEAE-52、SephadexG-100柱层析的方法,从疫霉菌中分离纯化出一种葡聚糖类激发子Gep1。Gep1诱导后,烟草叶片产生和积累H₂O₂、酚类物质;烟草叶片苯丙氨酸解氨酶、多酚氧化酶和过氧化物酶活性均有不同程度的提高。Gep1可以诱导烟草抗TMV。盆栽实验表明,4 mg/mL Gep1的防效为67.4%,降低了发病率,推迟了发病时间。半定量RT-PCR结果显示,Gep1激发子诱导烟草抗病相关基因的上调表达,表明Gep1可激发烟草防卫反应,诱导烟草产生系统抗性,提高烟草对病毒的抗性。