烟草突变体筛选与鉴定方法篇:1.烟草突变体的筛选与鉴定

烟草基因组计划重大专项2011年研究项目"烟草突变体库创制、筛选与分析"实施1年后,通过化学和生物方法创制并收获了15万份烟草突变二代种子;建立了2个序列筛选方法和10个表型筛选方法并进行了初步筛选。2012年始,该项目将全面开展烟草各种突变体的大量筛选及鉴定工作。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:2.烟草抗主要病虫害突变体的筛选与鉴定

参照烟草品种抗病性鉴定标准GB/T 23224—2008,烟草基因组计划重大专项"烟草突变体创制、筛选与分析"建立了烟草抗病毒病、青枯病、黑胫病、赤星病、烟蚜的高通量筛选方法,将全面开展烟草抗主要病虫害突变体的大量筛选与鉴定工作。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:4.烟草抗干旱突变体筛选与鉴定

烟草经甲基磺酸乙酯(EMS)诱变处理可以分离得到多种突变体,这些突变体的获得将为揭示烟草生长发育规律奠定基础。烟草突变体的筛选已成为许多重要理论问题得以解决的前体,而筛选方法是突变体筛选成败的关键。干旱是影响植物生长发育的主要环境因子之一[1]。烟草在生长过程中,特别是从团棵期进入旺长期常常遭遇干旱,干旱已经成为影响其营养生长的重要因素。利用突变体材料筛选烟草抗旱突变体,不仅可为     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:5.烟草耐低钾突变体的筛选与鉴定

烟草是喜钾作物。除了作为重要的营养元素发挥作用外,钾与烟草的抗逆性、抗病虫害能力密切相关;钾含量也是烟叶品质评价的重要指标之一。基于钾素的重要性和我国土壤普遍低钾的国情及国内烟叶钾含量低的现状,开展烟草钾营养基础研究、选育耐低钾/钾吸收高效型烟草品种等工作极为迫切[1]。     

烟草种质资源抗青枯病筛选鉴定

参试260份烟草品种对青枯病抗性先做自然病圃初筛鉴定,从中选取表现R-LR和部份优质感病品种共n3份分菌系接种测定.结果表明,对青枯病Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型菌系反应R-LR的抗病品种有G3、反帝3号和G6等3份,这是迄今所发现抗病谱广且能抗强菌系的种质资源;抗Ⅰ、Ⅱ型菌反应R-MR,感Ⅲ型菌的品种有SPG117、OX2028和岩烟97等12份;抗Ⅰ型菌反应R-MR,感Ⅱ、Ⅲ型菌的品种有K326、K346、G80、RGll和Coker176等50份;对Ⅰ型菌反应为MS-HS的感病品种有中烟15、云烟87、春雷3号、大叶密目、大黄金和革新3号等195份,包括目前生产上的主栽品种NC89、云烟85、翠碧一号和红花大金元等.     

烟田前茬残留二氯喹啉酸的解毒剂筛选

为有效修复前茬除草剂二氯喹啉酸土壤残留导致的烟草药害,通过盆栽试验和田间试验筛选出了对烟草二氯喹啉酸药害有较好修复作用的解毒剂及配方。盆栽试验结果表明,赤霉素+吲哚乙酸+尿素+磷酸二氢钾（按质量比1∶1∶64∶32混合）、天达2116、格芙微生物菌剂、赤霉素、吲哚乙酸、尿素+磷酸二氢钾（按质量比2∶1混合）均对药害烟株的叶宽、株高和叶片数有一定的修复效果。其中,以赤霉素+吲哚乙酸+尿素+磷酸二氢钾（按质量比1∶1∶64∶32混合）对药害烟株的修复效果最好,修复后30 d烟株农艺性状与正常烟株无显著差异。田间试验以格芙30 000 g/hm2灌根,协同赤霉素+吲哚乙酸+尿素+磷酸二氢钾（按质量比1∶1∶64∶32混合）以1 470 g/hm2兑水叶面喷雾的解毒剂配方组合处理烟株长势最好,无畸形症状。与药害烟株相比,修复烟株的叶长、叶宽、株高、茎围和叶片数分别增加46.51%、162.28%、79.70%、79.24%和44.72%,差异达到显著水平。与正常烟株相比,修复烟株烟叶产量、均价、产值和上等烟比例分别提高12.25%、4.48%、17.37%和14.05%。同时,药害烟叶烟碱含量...     

二氯喹啉酸诱导烟草保护酶活性的动态变化

为了阐明大田土壤残留二氯喹啉酸致烟草畸形并未出现烟草病害发生的原因,采用盆栽法,在土中分别混入1.04×10^-3、2.08×10^-3、4.17×10^-3、8.33×10^-3 和1.67×10^-2 mg/kg 的二氯喹啉酸,检测诱导烟草保护酶活性的变化并分析酶活性与抗病关系。结果表明,当土壤中加入二氯喹啉酸时,能诱导激活超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化物酶(POD)的活性, 移栽14 d 后,各处理烟草叶片中SOD 活力均高于未用药的对照,分别提高9.21%、32.60%、109.36%、136.16%、151.94%。 移栽21 d 后,发现各处理此酶活性与对照差异不明显。各处理的烟草POD 活性明显高于对照,随着处理浓度的升高和时间的延长,POD 活性有上升趋势,移栽28 d 后,烟草中过氧化物酶活性较对照分别提高69.47%、35.80%、73.61%、134.69% 和230.45%。POD 同工酶的检测表明,处理过的烟根酶带增多、颜色加重、酶活性增强。     

烟草抗草甘磷植株的筛选

在细胞水平上,用有机磷除草剂草甘磷在云南省的主要栽培品种红花大金元。G-28,K326中筛选抗草甘磷的变异植株。已获得几个抗除草剂草甘磷的变异株。     

烟草突变体筛选与鉴定方法篇:3.烟草突变体的TILLING筛选与功能鉴定

TILLING(targeting induced local lesions in genomes,定向诱导基因组局部突变)是利用单核苷酸多态性筛选突变体的一种全新反向遗传学方法,该方法首先通过化学诱变产生高频率点突变,再利用点突变筛选技术如毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,     

烟叶发酵过程中产木聚糖酶菌株的分离及鉴定

本文研究了微生物对烟叶增香的作用,研究结果对烟叶发酵有着重要意的义。在研究中用于筛选的烟叶样品选自三个年份（2007年、2008年、2009年）的五个产地（毕节、楚雄、昆明、曲靖、襄县）,即有15组样品。对烟叶样品依次进行微生物的富集、分离纯化实验,然后进行产木聚糖酶菌株的筛选,筛选培养基经刚果红染液染色之后,以菌落周围出现透明圈作为产木聚糖酶菌株的筛选标准。然后对筛选出的73株产酶菌株采用3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）进行木聚糖酶酶活力的测定,从中选择一株产酶活性较高的菌株-Qb4号菌株,进行形态学分析实验、生理生化实验、碳源利用分析实验以及16SrRNA保守序列分析,最终将该菌鉴定为甲基营养型芽孢杆菌。将该菌应用于烟叶増香工艺流程中,是未来本课题研究的主要方向。     

烟草抗病毒病种质资源的鉴定与评价

2005-2006年采用温室苗期接种鉴定的方法对202份烟草种质进行了TMV、CMV以及PVY三种病毒病的抗性鉴定。结果表明:在供试种质中,对TMV表现免疫(21份)、抗病(1份)和中抗(30份)的材料共52份,表现中感(130份)和感病(20份)的材料共150份;对CMV表现抗性(4份)和中抗(20份)的材料共24份,表现中感(79份)和感病(99份)的种质共178份;对PVY表现免疫(1份)、抗病(2份)和中抗(33份)的材料共36份,表现中感(96份)和感病(70份)的材料共166份。所筛选的优质、抗病烤烟引进品种白色种、晒烟大るま以及香料烟KoKulu izmir可直接应用于烟草生产,另外对TMV表现免疫的材料白肋烟8301、黄筋蔸、抗3种病毒病的种质黄花烟阳高小兰花以及兼抗两种病毒病的种质可为烟草抗病毒病育种的亲本选择提供抗源。     

烟稻轮作田土壤中二氯喹啉酸残留阈值分析

为明确烟稻轮作田土壤中二氯喹啉酸导致烟草药害的残留阈值,研究了稻田不同施药剂量下二氯喹啉酸的残留量和降解规律,分析了残留量和烟草药害等级相关性。结果表明,土壤中较低浓度的二氯喹啉酸残留就可导致烟草药害。稻田推荐剂量的二氯喹啉酸在植烟土壤中半衰期为25.7 d,施用60 d后降解率为77.83%。移栽后60 d,土壤中二氯喹啉酸残留量与烟草药害等级呈指数关系,残留阈值为0.006 mg/kg,如超过此阈值,烟草会产生明显药害症状。烟田规划期即烟草移栽前60 d,二氯喹啉酸残留风险值为0.072 mg/kg。研究为控制二氯喹啉酸药害风险和烟田规划提供了理论依据和数据支撑。     

恩施州特色烤烟新品种筛选

为筛选出适合恩施州生态条件的特色烤烟品种,2009年在恩施烟区进行了品种区域适应性研究,对CF205、中烟100、中烟103、中烟201和云烟87的农艺性状、经济性状、外观品质及内在质量等进行了综合鉴定。结果表明,中烟103、中烟201和CF205在恩施州不同产区较好地体现了品种特性和经济效益,可以在恩施州烟区进一步示范验证。     

烤烟霉变病原菌鉴定及其生防菌筛选

为明确云南省大理州烟叶烘烤变黄期叶柄和部分叶片霉变的病原菌,依据柯赫氏法则,采用组织分离法分离病原菌,经室内和烤房内验证致病性,结合形态学和多基因序列分析鉴定病原物种类,运用平板拮抗法和活体生测法筛选生防菌。结果表明,分离物的形态学与根霉属（Rhizopus sp.）真菌相似,其ITS序列与少根根霉菌（Rhizopus arrhizus.,异名Rhizopus oryzae）模式菌株CBS 112.07T序列一致性大于99%;基于内转录间隔区（ITS）、肌动蛋白（ACT）和翻译延伸因子1-α(TEF)的多基因序列系统发育分析也表明,病原菌与少根根霉菌亲缘关系最近。综合形态学和多基因序列分析结果,确定烤烟霉变病病原菌为少根根霉菌。通过平板对峙法筛选获得5株抑菌能力较强的拮抗菌,其中芽孢杆菌（Bacillus spp.）Z002和05-1205在烤房内的防治效果均在70%以上。     

一种烟草细菌性叶枯病病原鉴定及防治药剂筛选

为明确在贵州省六盘水市烟区发生的一种烟草细菌性叶枯病的病原并筛选出防治药剂,本研究通过组织分离法分离病原菌,结合形态学鉴定、柯赫氏法则和分子生物学等方法鉴定病原菌,并初步研究该菌的生理生化特性,采用抑菌圈法测定15种杀菌剂对该病原菌的毒力。结果表明,该病害病原菌与成团泛菌（Pantoea agglomerans）同源性达100%,为革兰氏阴性菌,可利用D-阿拉伯糖、丙三醇和硝酸盐等碳氮源;室内防治药剂筛选试验表明,1.6%噻霉酮EW、3%中生菌素WP和80%乙蒜素EC对该菌有较好的抑菌效果,EC₅₀值分别为0.004、0.0135和0.1176 mg/mL。试验表明,该烟草细菌性叶枯病致病菌为成团泛菌（Pantoea agglomerans）,1.6%噻霉酮EW可作为防治该病害的有效药剂。     

毒素胁迫烟草抗黑胫病鉴定及抗性指标分析

为建立一种高效准确的烟草黑胫病抗性鉴定方法,以4种具有不同抗性特性的烟草品种为材料,研究培养基附加不同浓度黑胫病病菌毒素及不同胁迫时间对烟草种子萌发和根系生长的影响。结果表明,烟草黑胫病病菌毒素胁迫对烟草种子的发芽率和根系生长均有抑制作用,抑制效果随胁迫浓度的增加而增强,且不同品种对毒素胁迫的耐受力不同,利用体积浓度为50%的毒素胁迫15 d时,抗病品种G28、中抗品种YN116、中感品种净叶黄、感病品种红花大金元的根系长进培养基中的株数比率分别为79.38%、70.74%、33.55%和13.36%。初步确定鉴别烟草种子抗性特性的最佳粗毒素胁迫浓度为50%（即含蛋白质13.53μg/mL,含糖19.64 mg/mL）、最佳鉴定时间为胁迫15 d,利用该方法可在短期内高效准确地鉴定出不同品种（种质）对烟草黑胫病的抗感水平,加快烟草抗黑胫病育种进程。     

烟草赤星病拮抗芽胞杆菌的筛选、鉴定及促生防病作用

为获得对烟草赤星病菌具有较好生防效果的芽胞杆菌,从福建、山东、云南等地烟草叶片中分离得到187株菌株,对烟草种子进行浸种处理,通过测定发芽率筛选到能够促进种子萌发的6株菌株;利用平板拮抗法、离体叶片接种法、温室生测发现FJ1、FJ1-6能促进烟草生长且对赤星病防效较好;通过生理生化和分子生物学鉴定,FJ1为萎缩芽胞杆菌（Bacillus atrophaeus）,FJ1-6为贝莱斯芽胞杆菌（Bacillus velezensis）。防病特性研究发现,两菌株含有参与脂肽类抗生素Surfactin、Fengycin和Iturin合成的基因且脂肽类粗提物对赤星病菌丝生长有明显的抑制作用,抑制率分别为56.9%、65.0%。综上,FJ1、FJ1-6具有优良的促生防病特性及显著的促种子萌发效应,可应用于烟草育苗及赤星病的防治。     

植烟土壤高活性氨化菌的筛选鉴定及其氨化能力分析

为调控植烟土壤有机态氮分解,从贵州省威宁县和湄潭县植烟土壤分离出52株氨化细菌。通过纳氏试剂法和氨化菌培养液培养法筛选,发现W2、W4、W6、W12、W16、Z3、Z6、Z15、Z9、Z50对有机氮具有较强的分解效果。16S rDNA序列分析表明,菌株W2、W4、W6、W12、W16、Z3、Z6、Z15、Z9和Z50分别属于金黄杆菌属、泛菌属、芽孢杆菌属、简单芽孢杆菌属、梭形杆菌属、芽孢杆菌属、土壤杆菌属、巨大芽孢杆菌属、短波单胞菌属和节杆菌属。通过氨化菌培养液培养法对菌株的分解能力测定表明,培养72 h后,Z9菌株的有机氮分解能力显著（p≤0.05）高于其余9株,分解效果达到46.1%~93.4%。室内有机肥培养试验结果显示,施用菌株处理的无机氮含量均高于不施用菌株处理（CK）,培养65 d时各菌株处理较CK处理无机氮含量增加了550.80~1823.71 mg/kg,添施菌株使无机氮含量提高了1.15~1.49倍。研究结果可用于有机氮分解复合微生物菌剂的配置。