新疆酿酒葡萄中内生放线菌的分离与初步鉴定

采用组织块分离法分别从新疆酿酒葡萄的根、茎、叶中分离内生放线菌,共分离出14株不同的放线菌,其中根部的数量明显多于叶片和茎部;菌株经形态和生理生化鉴定,初步确定分属于链霉菌属和诺卡氏菌属,并以链霉菌属居多,占总菌数的78.57％.     

产抗氧化活性物质的海洋放线菌筛选与鉴定

采用传统的分离培养技术对4种海洋动物肠道中的放线菌进行分离,利用紫外-可见分光光度法对分离菌株的代谢产物进行抗氧化活性初筛测定,再采用电子自旋共振仪（ESR）进行4种自由基清除率复筛测定,并对抗氧化活性强的菌株进行16S r DNA水平鉴定与系统发育树分析。结果表明共分离到37株放线菌,初筛测定获得7株菌的代谢产物对DPPH自由基清除率超过50%,其中菌株CH16与CH38的代谢产物通过ESR测定发现对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基及烷基自由基的消除率均超过50%,并分别鉴定为Amycolatopsis rifamycinica与Amycolatopsis sp.。该研究为从海洋环境获得产生抗氧化活性物质菌株资源与开发提供依据。      

产抗氧化活性物质的海洋放线菌筛选与鉴定

采用传统的分离培养技术对4种海洋动物肠道中的放线菌进行分离,利用紫外-可见分光光度法对分离菌株的代谢产物进行抗氧化活性初筛测定,再采用电子自旋共振仪(ESR)进行4种自由基清除率复筛测定,并对抗氧化活性强的菌株进行16S r DNA水平鉴定与系统发育树分析。结果表明共分离到37株放线菌,初筛测定获得7株菌的代谢产物对DPPH自由基清除率超过50%,其中菌株CH16与CH38的代谢产物通过ESR测定发现对DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子自由基及烷基自由基的消除率均超过50%,并分别鉴定为Amycolatopsis rifamycinica与Amycolatopsis sp.。该研究为从海洋环境获得产生抗氧化活性物质菌株资源与开发提供依据。     

产内切菊粉酶的海洋放线菌菌株的筛选与鉴定

获得高活性内切菊粉酶微生物菌株是以菊粉生产低聚果糖的基础。本研究采用以菊粉为唯一碳源的选择培养基从鸭绿江滨海湿地海泥样品中筛选获得14株产菊粉酶菌株。通过摇瓶复筛,获得3株产较高活力内切菊粉酶的放线菌菌株,其酶活力分别为14.13、18.24、28.52U/m L。通过16S rRNA测序分析和形态观察确定该3株菌分别为孔雀石褐链霉菌(Streptomyces malachitofuscus)、棘孢小单孢菌(Micromonospora echinospora)、锂链霉菌(Streptomyces carpaticu)。其产酶活性均高于目前已报道产内切菊粉酶放线菌菌株,为内切菊粉酶工业化生产提供了依据。      

脂肪酶产生菌的分离筛选及菌株鉴定

以富含油脂的土壤、菜籽等为脂肪酶菌株分离材料,分离得到11株脂肪酶产生菌株;对产酶活力高的菌株进行酶学性质实验,测得其所产酶最适作用pH为7,最适温度为40℃,酶活力为34.55U。在pH为8.5和35℃时酶具有良好的稳定性。采用形态学及rDNA-ITS序列分析法进行鉴定。结果表明,分离、筛选出的性能较理想的产脂肪酶菌株为米曲霉(Aspergillusoryzae)。     

宁夏贺兰山东麓酿酒酵母分离筛选及菌株鉴定

为进一步探究宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄酵母菌的多样性,更好开发利用葡萄产区酵母菌资源。从宁夏贺兰山东麓的西夏王陵、红寺堡、玉泉营、青铜峡、张裕十五世酒庄地区的葡萄园土壤、葡萄浆果表皮以及葡萄自然发酵过程中进行酵母菌的分离筛选,对得到的122株酵母菌株运用WL营养琼脂培养基进行初步分类,同时结合26S r DNA D1/D2区序列分析。共鉴定出克鲁维毕赤酵母(Pichia kluyveri)、美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)、葡萄汁有孢汉逊酵母(Hanseniaspora uvarum)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、大隐球酵母(Cryptococcus magnus)共5种酵母菌。进而初步确定宁夏贺兰山东麓酿酒葡萄产区酵母菌的主要种类,为地方特色葡萄酒酵母菌的筛选和选育提供理论基础和研究依据。     

旱生植物内生细菌的分离及耐旱菌株的筛选鉴定

为筛选耐旱内生细菌,并对其进行鉴定,以典型耐旱植物为材料,分离纯化出142株内生细菌。采用液体培养基中添加聚乙二醇6000降低渗透势的方法分析内生细菌的耐旱情况。从中筛选出1株能够耐受质量浓度为60g/100mL聚乙二醇6000的内生细菌PB14。对该菌株进行形态学观察,生理生化和16S rDNA序列鉴定,判定菌株PB14为蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)。     

一株放线菌菌株HDF-1的分离、鉴定及抑菌活性研究

从黑河湿地土壤样品中分离得到一株中度嗜碱放线菌HDF-1,适宜生长pH值为8～10,培养时可以向细胞外分泌蛋白酶、淀粉酶,不能分解含硫氨基酸产生硫化氢,不能产生胞外纤维素酶。菌株HDF-1能够利用葡萄糖、果糖、蔗糖以及麦芽糖作为碳源;该菌株代谢产物中含有抑制金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的活性物质,抑菌圈直径达到了15.2 mm,而对黑曲霉（Aspergillus niger）、青霉（Penicillium chrysogenum）和大肠杆菌（Escherichia coli）的生长没有抑制作用。根据菌株HDF-1的形态特征、生理生化特征及其16S rRNA系统进化分析,将该菌株鉴定为链霉菌属（Streptomyces sp.）。     

恒山黄芪内生真菌分离鉴定及抗菌活性的研究

目的:分离和鉴定恒山黄芪的内生真菌,并对其进行活性筛选。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,以金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、白假丝酵母和青霉为指示菌对分离得到的植物内生真菌进行抗菌活性实验。结果:从恒山黄芪中分离得到内生真菌菌株49株,经分类鉴定,分属于3目、6科、17属。49株内生真菌中有33株菌至少能抑制1种指示菌,占总菌数的67.35%。结论:恒山黄芪内生真菌种类多样,具有很好的研究和应用价值。     

金莲花内生真菌的分离与初步鉴定

从内蒙古采集新鲜的金莲花植株,在确定了该植株内生菌分离的最佳表面消毒方法后,对其根部、茎部和叶部的内生真菌进行分离。通过分析菌落表面形态,从中分离得到6株内生真菌,其中叶中4株,茎中1株,根中1株,并用乳酸酚棉兰液染色镜检观察,经形态学鉴定均为子囊菌亚门(Ascomycotina),青霉属(Pinicielium)。     

产油脂微藻的分离、鉴定及筛选

微藻油脂是生产生物柴油的重要原料,同时也是生产不饱和脂肪酸的原料来源之一。本文以广州市华南理工大学校内东湖为采样点,筛选鉴定湖中存在的微藻并研究其生长和油脂积累特性,旨在筛选出水体中可能存在的富油微藻以便后续研究分析。研究共筛选出6株绿藻,18Sr DNA鉴定显示6株绿藻中DH1、DH2、DH6均属于小球藻属,DH3、DH4、DH5均属于栅藻属,后分析构建了6株微藻进化发育树。通过藻细胞胞内油脂含量测定,表明DH1、DH2与DH6均能较好地积累油脂,尤其是DH2与DH6两株微藻。培养25 d发现其最大生物量(细胞数)分别达到2.14×10~7个/m L和2.74×10~7个/m L,油脂产量分别达到103.89 mg/L和131.69mg/L,藻细胞油脂百分含量均超过30%,表明该两株微藻是潜在的较为理想的产油微藻,可作为生物柴油制备的备用藻种资源。     

转化白藜芦醇苷虎杖内生真菌的分离和鉴定

为提高虎杖中白藜芦醇得率,采用虎杖内生真菌直接发酵虎杖转化白藜芦醇苷为白藜芦醇,通过从虎杖根、茎中初筛得到6株内生真菌,复筛以虎杖煮提液为底物发酵,采用高效液相色谱法定量检测发酵液中白藜芦醇苷和白藜芦醇含量。结果表明：6株内生真菌均具有转化白藜芦醇苷为白藜芦醇能力,其中分离于茎内的J1转化率最高为25.6%。J1经形态学观察及ITS-5.8S rDNA序列分析,鉴定为草酸青霉Penicillium oxalicum,Genbank登录号为HQ732137。     

虎杖中高效转化白藜芦醇苷的内生真菌筛选和鉴定

从虎杖根部分离获得8株内生真菌,经液态培养基发酵后进行HPLC检测,以白藜芦醇苷转化率为指标,从中筛选出具有高效转化能力的2株内生真菌G8和G10,其转化率分别达到64.2%和58.1%,将虎杖中的白藜芦醇含量提高到原来的3.84倍和3.57倍。结合ITS测序与Genback中rDNA同源序列对比,鉴定G8和G10分别为青霉菌RF3(Penicillium sp.RF3)和青霉菌ST008(Penicillium sp.isolate ST008)。     

大头菜发酵过程中生香酵母的分离、筛选及鉴定

利用孟加拉红选择培养基从大头菜发酵液中分离、筛选出9株酵母菌,再通过嗅闻筛选出6株生香酵母,J1、J3、J5、J7、J8、J9。根据形态特征、生理生化特性和18SrDNA鉴定,结果表明:J1、J3、J7为奥默柯达酵母,J5、J9为季也蒙毕赤酵母,J8为热带假丝酵母。生香酵母在大头菜发酵过程中具有重要作用。     

百香果籽内生细菌的分离鉴定及生长条件的研究

百香果籽提取物具有多种生物学活性,其活性物质可能来源于内生菌的代谢产物,该文对柳州百香果果籽中的内生细菌进行分离和鉴定。以新鲜的百香果为原料,用平板计数琼脂(plate count agar,PCA)培养基分离纯化果籽中的内生细菌,然后对其进行分子生物学鉴定,最后测定其最适生长温度、最适pH值、生长曲线等生物学特征;结果显示利用PCA培养基从百香果果籽中分离到的内生细菌菌落均呈白色;经革兰氏染色,均为革兰氏阳性球菌,直径在1.3μm^1.9μm之间;随机挑选3株菌进行分子生物学鉴,均属于不动杆菌属;测定其生长条件,均在LB培养基中生长较好;最适生长pH值均为7.0;最适生长温度均为25℃,而在15℃以下和40℃以上时其生长收到较强的抑制;用LB培养基测定其生长曲线,菌株在接种后的6 h^16 h处于对数期。通过对百香果果籽中内生菌的分离鉴定,发现柳州百香果果籽中存在不动杆菌属细菌。     

高产胞外多糖沙棘根瘤内生细菌的筛选、鉴定及其发酵条件优化

目的:从6株产胞外多糖的沙棘根瘤内生细菌中,筛选出高产胞外多糖的菌株,并对其进行鉴定和发酵条件优化。方法:利用苯酚-硫酸法联合DNS法测定菌株胞外多糖产量,筛选高产胞外多糖菌株;利用形态学观察、生理生化特征及16S rRNA基因序列分析法对高产胞外多糖菌株进行鉴定;利用单因素实验法优化产多糖的发酵培养基与发酵条件,并利用正交实验法进一步优化培养基中蔗糖、KNO₃、KH₂PO₄的最适添加量。结果:筛选得到一株高产胞外多糖菌株TT207,鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。经条件优化,确定其高产胞外多糖的最优培养基组分为蔗糖50 g/L,KNO₃ 10 g/L,KH₂PO₄ 8 g/L;最佳发酵条件为:培养时间48 h,培养温度34℃,初始pH6.5,接种量4%,装液量70 mL/250 mL,摇床转速140 r/min。利用优化后的发酵条件,菌株胞外多糖产量提高了6.04倍。结论:高产胞外多糖菌株枯草芽孢杆菌TT207在最优发酵条件下,胞外多糖产量达到12.39 mg/mL,是一株具有开发潜力的胞外多糖生产菌株。     

污水中絮凝细菌的分离及鉴定

为了阐明污泥中絮凝细菌的种类和特性,利用常规培养技术通过絮凝率测定和多次富集从污水水渠中分离和筛选絮凝菌,并对筛选得到的菌株进行形态学观察、生理生化特征分析、分子生物学鉴定以及絮凝率特性分析。结果利用营养琼脂培养基分离出絮凝菌20株,筛选出絮凝性能稳定且活性良好的两株微生物絮凝菌ZF1和ZF18,其絮凝率分别为57.68%和57.20%,超过其余18株的絮凝率。经鉴定可知,ZF1为志贺氏菌属(Shigella sp.),ZF18为荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens)。此研究不仅为研究絮凝微生物提供良好的菌种资源,更对于研究污水治理具有很好的应用潜力。     

花椒产香内生真菌的分离鉴定及其挥发性成分分析

从新鲜的花椒茎中分离内生真菌并进行分离纯化,共获得12株纯系微生物,通过筛选获得1株产香浓郁的菌株,利用GC-MS对其发酵产物进行分析.结果表明:该菌株代谢产物的香气成分主要为其中1(2)号菌株检出的61种化合物,菌株1(2)发酵液挥发性成分主要为十八烯(8.79％)、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(6.79％)、双环[2.2.2]辛烷-1-羧酸(6.24％)、3-羟基-2丁酮(4.67％)、[1,2-a]吡嗪-1,4-二羰基-3-苯甲基-萘吲哚(4.10％)、3-(2-甲基)六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-1,4-二酮(3.83％)、5-二十碳烯(3.72％)、5-异亚丙基-3,3-二甲基二氢呋喃(3.54％)、2-氨基-丙二醇(3.27％)、月桂酸(3.25％)、1,2-苯二甲酸丁基二甲基酯(2.97％)、邻苯二甲酸二异丁酯(2.82％).     

酱香大曲中3株放线菌的分离筛选及挥发性成分分析

为探究酱香大曲中放线菌的种类及功能,建立了一种有效的放线菌分离筛选方法,并通过此方法在28 ℃培养条件下,从茅台大曲中分离出了3株放线菌,对其进行形态学特征、生理生化实验及分子生物学鉴定,并对菌株的产酶、产香特性进行了研究。结果表明,FBKL4.001、FBKL4.002鉴定为可可链霉菌（Streptomyces cacaoi）、FBKL4.003鉴定为沙阿霉素链霉菌（Streptomyces zaomyceticus）,3株菌产果胶酶能力较为突出,分别为299.66 U/g、216.52 U/g、294.86 U/g,其固态发酵挥发性成分以酯类物质为主,分别占62.80%、59.23%、46.77%,且均能产生吡嗪类物质。     

孝感民间传统米酒菌株的分离、鉴定与筛选、培养

孝感民间传统米酒菌种中除大量根霉外，其他微生物种类繁多，酶系丰富，生产的米酒清香醇厚，甜度适中。但美中不足的是菌种质量不易稳定。为此，我们将优质传统米酒菌种进行分离、鉴定，初步分离出36个种、属的微生物菌株，从中筛选出6个属中的13种优良菌株进行纯种培养。在此基础上，采用多菌种混合制曲，生产出酶系丰富、质量稳定的优质菌种。