大豆过氧化氢酶的分离纯化及性质研究

新鲜大豆芽经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析,获得电泳纯的过氧化氢酶。该酶酶活回收率为30.92%,纯化倍数为293.09,酶比活力达到26 322.43 U/mg。该酶全分子质量为234.9 kD,亚基分子质量为57.42 kD;最适pH值为7.2,最适温度为30 ℃,在pH 4.0～10.6及25～35 ℃范围内有较好的稳定性;在30 ℃、pH 7.2条件下测得该酶对过氧化氢的Km值为31.82 mmol/L;十二烷基硫酸钠、草酸、Ag+、Cu2+对该酶有强烈的抑制作用,Pb2+对该酶有双重作用,低浓度时有激活作用而高浓度时抑制酶活性。     

芦荟过氧化氢酶的分离纯化和性质研究

目的：获得库拉索芦荟过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究。方法：采用硫酸铵分级沉淀,DEAESepharose阴离子交换层析,CM-Sepharose 阳离子交换层析和Sephacryl S-200 凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE 鉴定酶的纯度、分子质量。结果：从芦荟中分离纯化获得电泳纯的过氧化氢酶,纯化倍数为228.05倍,酶活力回收率为14.10%,比活力达17427.30U/mg。该酶的分子质量为239.90kD,亚基分子质量为60.60kD。推测该酶由4 个相同亚基构成。该酶最适温度为45℃,最适pH 值为7.5,以过氧化氢为底物测定该酶的表观Km 为34mmol/L。结论：成功分离纯化获得过氧化氢酶,该酶具有良好的热稳定性和酸碱耐受性。     

贻贝过氧化氢酶的纯化及部分性质

新鲜贻贝肉匀浆抽提液经硫酸铵盐析、ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层纯化,得到一种过氧化氢酶。该酶为糖蛋白,亚基分子量约为７６０００,中性糖含量约为１０．５６％,研究结果表明,贻贝过氧化氢酶的最佳ＰＨ７．０左右,对热不稳定,４５℃保温１５ｍｉｎ,酶的残余活力约为７０％;６０℃保温１５ｍｉｎ,则酶的残余活力仅剩１０．６％左右。ＮａＮ３、ＫＣＮ及某些金属离子如Ｐｂ＾２＋、Ｈｇ＾２＋、Ｆｅ＾２＋、Ｃｄ     

甘南牦牛肝过氧化氢酶超滤纯化工艺及酶学性质研究

采用超滤工艺从甘南牦牛肝中分离纯化过氧化氢酶,得出的超滤最佳工艺为超滤膜截留分子质量250 kDa、超滤温度25 ℃、压力0.20 MPa、流速30 m/s、浓缩倍数为3倍。酶学性质研究结果显示,该酶最适温度、pH值分别为35 ℃和7.5,米氏常数（Km）值为53.8 mmol/L。     

韭菜过氧化氢酶的分离纯化及其部分酶学特性

为获得韭菜过氧化氢酶纯品并对其性质进行研究,将新鲜韭菜通过匀浆、抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose 离子交换层析、Superdex-200凝胶过滤层析等步骤,获得了电泳纯的韭菜过氧化氢酶(CAT),纯化倍数为70.36,回收率为18.33%,酶比活力达到22064.57U/mg。其全酶分子质量和亚基分子质量分别为241.76、62.43kD。该酶反应的最适温度为37℃,最适pH值为7.2。该酶在25～40℃以及pH5～9有较好的稳定性,同时在最适条件下测得其Km值为46.93mmol/L。甲醇、乙醇、异丙醇、SDS以及Cu2+、Ag+、Fe2+等金属离子对该酶有较强的抑制作用。     

重组过氧化氢酶与一种商品过氧化氢酶的性质比较

将重组过氧化氢酶和市售一种商品过氧化氢酶的性质进行了比较。重组酶的最适温度为70℃,某商品过氧化氢酶的最适温度为40℃;与这种商品过氧化氢酶相比,重组酶的热稳定性更好。重组过氧化氢酶和这种商品过氧化氢酶的最适pH都是7．0;重组酶和这种商品过氧化氢酶在pH3-8的范围内均较为稳定;重组酶在室温放置1个月后酶活力基本保持不变,而此种商品过氧化氢酶活力损失约70％;金属离子对重组酶和这种商品过氧化氢酶都有抑制作用,抑制程度有所不同;EDTA抑制这种商品过氧化氢酶的活性,但不抑制重组酶的活性。     

过氧化氢酶的功能及研究

过氧化氢酶是一类广泛存在于动物、植物和微生物体内的氧化酶,其功能是催化细胞内过氧化氢分解,防止氧化。在论述过氧化氢酶类型划分、结构特点及生理功能的基础上,对其分离纯化、活性测定、性质研究做了综述。     

米曲霉氨基酰化酶的纯化及粗酶性质研究

利用硫酸铵分级盐析法从米曲霉L-09中提取氨基酰化酶,比活力为56.01 U/mg,纯化倍数为2.06,酶活力回收率为80%。详细研究该粗酶的酶学性质。结果表明,经盐析法提纯的粗酶最适pH为7,最适反应温度为55℃,在55℃下热稳定性良好。溶液中的金属离子对酶活力有很大影响。其中,高浓度的Fe~(2+)、Mn~(2+)和Ca~(2+)对酶活力有抑制作用,低浓度的Co~(2+)离子对酶活力有激活作用。     

横梗霉产酯化酶的纯化及酶学性质

在研究浓香型白酒的过程中为了提高出酒率以及优质酒率可以从酯化酶的研究入手,酯化酶对提高出酒率和产优质酒有着积极的影响。本实验从五粮液大曲中经过严格的筛选得到一株高产酯化酶的菌株横梗霉。纯化分离横梗霉酯化酶发酵液使用盐析、透析、层析等步骤得到纯化的酯化酶,纯化提高到35.66倍,且具有2.54%的活性回收率,相对分子质量约为43000 u。通过酶学性质研究得出,酯化酶作用时的最佳温度是40℃,存在热敏感特性;60℃条件下反应30 min后有67.97%酶活残留;当p H为6～8时,酶活性较佳,当p H达到7.5时,最优;使用纯化后的酯化酶进行酶学性质研究发现金属离子对酯化酶有抑制作用的是Fe~(2+)、Zn~(2+)、Mn~(2+)、Cu~(2+)对酯化酶。得到结论该横梗霉所产的酯化酶有着高产、耐热性差、对热敏感、具有良好的耐碱性的性质,在使用过程中应该注意高温以及酸性环境对活性的影响。     

蒜氨酸酶的分离纯化及其酶学性质测定

大蒜中功能成分含硫化合物是由蒜氨酸酶(alliinase,E C4.4.1.4)催化蒜氨酸(alliin)生成的。本实验通过提取、盐析、透析及层析,自新鲜大蒜中分离纯化出蒜氨酸酶,并测定了蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的适宜分离纯化过程及条件为:pH7.0Na /K 磷酸缓冲液提取,45%饱和度NH4(SO4)2盐析,10000×g离心沉淀30min,pH6.5的Na /K 磷酸缓冲液溶解,截留1.4万分子量透析袋透析,Sephadex G-200层析,收集洗脱时间4.75h的洗脱液。蒜氨酸酶最适温度和pH值分别为30℃和6.3,Mg2 、Zn2 、Fe2 、Fe3 、EDTA-Na金属离子对蒜氨酸酶有激活作用,Fe3 激活作用最明显,Cu2 严重抑制蒜氨酸酶活性。以合成S-烯丙基-L-半胱氨酸亚砜为底物,蒜氨酸酶的Km为5.91mmol/L、Vmax为1.55μmol/min。     

Purification,properties and heat inactivation of pectin methylesterase from apple (cv Golden Delicious)

Pectin methylesterase from apple (cv Golden Delicious) was extracted and purified by affinity chromatography on a CNBr‐Sepharose®‐PMEI column. A single pectin methylesterase peak was observed. Isoelectric points were higher than 9. Kinetic parameters of the enzyme were determined as K_m = 0.098 mg ml⁻¹ and V_max = 3.86 µmol min⁻¹ ml⁻¹ of enzyme. The optimum pH of the enzyme was above 7.5 and its optimum temperature was 63 °C. The purified PME required the presence of NaCl for optimum activity, and the sodium chloride optimum concentration increased with decreasing pH (from 0.13 M at pH 7 to 0.75 M at pH 4). The heat stability of purified PME was investigated without and with glycerol (50%), and thermal resistance parameters (D and Z values) were calculated showing that glycerol improved the heat resistance of apple PME. © 2000 Society of Chemical Industry     

Bacillus sp.LS 壳聚糖酶的分离纯化及性质研究

以 Bacillus sp IS 产生的壳聚糖酶粗酶液出发,经 (NH4)2SO4盐析、DEAE-Sephadex A25 阴离子交换、Sephadex G-100 凝胶过滤分离纯化后,SDS-PAGE 显示为一条带,测得其分子量为 30.9k u.同时对其酶学性质进行了初步研究,发现该酶在低于 40℃、pH6.0～7.5 范围内较稳定.最适反应温度和pH值分别为55℃和 5.0;Zn2 、Ag 、Ca2 、Co2 、Mn2 对该酶有明显的促进作用,而 Fe3 、Hg2 对该酶有强烈的抑制作用;该酶的米氏常数为2.50 mg/mL,最大反应速度为 4.19μmol/mL·min.     

苹果多糖提取的优化工艺研究

分别采用碱提、酸提和酶提的单级提取法和各法结合的多级提取法,从苹果渣中提取苹果多糖,通过正交实验等优化各提取方法的工艺参数,结果表明,碱提法优化工艺为:4mol/L NaOH溶液,70℃浸提1h;酸提法优化工艺为:pH2.3,100℃提取3h;酶提法时,采用复合酶组合比单一酶作用提取率高,最佳复合酶组合为:先加3%复合果胶酶,再加3%纤维素酶,最后加入5%α-淀粉酶,每次加新酶后于50℃保温2h.采用优化工艺对苹果多糖进行分级提取,结果比各一步提取法的多糖产率都高,可以有效地提高苹果渣的利用率.     

采前喷钙对红富士苹果果实品质及贮藏性能的影响

以红富士苹果为试材,探讨采前喷施Ca(NO3)2、CaCl2、糖醇螯合钙和柠檬酸钙等对红富士苹果果实品质和贮藏性能的影响。结果表明:各种喷钙处理比对照喷清水可更好地保持贮藏期间果实的硬度、可溶性固形物含量及Vc含量。贮藏60d时,采前喷钙处理的果实硬度、可溶性固形物含量、SOD酶活性和POD酶活性高于对照,而果实丙二醛含量、PG和Cx活性则低于对照;贮藏120d时,Ca(NO3)2、CaCl2及糖醇螯合钙处理的果实硬度和可溶性固形物含量均显著高于对照。     

Purification and properties of pectinesterase from papaya

Pectinesterase (PE) was partially purified from papaya pulp, and its biochemical properties were studied. The enzyme was eluted in a single peak after DEAE-cellulose and Sephadex G-100 chromatography. The PE had a molecular weight of 53000 and showed an optimum pH of 8.0. Its activity was dependent on an NaCl concentration of 0.2M . The enzyme was heat stable: approximately 80% of the original activity remained after 60 min of heating at 50°C but completely inactivated by incubation at 80°C for 1 min. The activity was linear with time and protein concentration. The maximum reaction in 3 min was found at 60°C and the initial rate increased 9-fold from 20 to 60°C. The estimated K_m was 0.12g litre^?1 with citrus pectin as the substrate. The kinetic study revealed that polygalactur-onic acid is a competitive inhibitor, and a K_i value of 0.07 g litre^?1 was determined. On the basis of this study, papaya PE properties resembled those of pectinesterase from other sources.     

Purification and properties of polyphenol oxidase from oil bean (Pentaclethra macrophylla Benth) seeds

Polyphenol oxidase extracted from oil bean (Pentaclethra macrophylla) seeds was purified 165-fold over the crude enzyme extract. The apparent molecular weight of the enzyme by gel filtration was 110.8 k ± 9.0 k while SDS-PAGE indicated a single species of molecular weight 28.0 k. A copper content of 1.9 mg g^?1 corresponds to one copper atom for each of the four subunits. The purified enzyme oxidised pyrogallol, catechol, 4-methylcatechol and L-dihydroxyphenylalanine but had low activity towards tyrosine. p-Cresol, caffeic acid and cholorogenic acid were not oxidised. Thio-compounds were strong inhibitors of the enzyme. The phenolic compounds tyrosine, resorcinol and orcinol inhibited catechol oxidation but became oxidised in the process.     

Seed oils of apples (Malus pumila)

Apple seed oils were found to be characterised by a high content of linoleic acid (48–64 %), together with 24–42 % oleic acid, 48–71 % palmitic acid and lesser percentages of stearic and arachidic acids. The Granny Smith seed oils contained significantly greater amounts of palmitic and linoleic acids than those of the Dougherty and Sturmer varieties and lesser amounts of oleic acid. Differences in fatty add composition between the Sturmer and Dougherty varieties were not significant. The apple seed oils contrasted with those of other sub-families of the family Rosaceae in containing neither a-elaeostearic acid nor more than traces of linolenic acid. The apple processing industries could well be a useful source for the production of oil rich in linoleic acid.     

苹果酒中酚酸、黄烷-3-醇的检测

以小国光(Ralls)和富士(Fuji)及其所酿制的新鲜苹果酒为试验材料,采用反相高效液相色谱法测定分析苹果原汁、发酵中酒样和苹果成品酒中11种酚酸、5种黄烷-3-醇的含量。结果表明:苹果和苹果酒中存在4种酚酸(原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、对-香豆酸)、2种黄烷-3-醇(儿茶素和表儿茶素);不同品种的苹果原汁和苹果成品酒中酚类物质的含量都存在显著差异。其中,小国光苹果和小国光苹果酒中的酚类物质总含量较高;对于每个品种,绿原酸都是最主要的酚酸类物质,含量最高的黄烷-3-醇类物质都是表儿茶素。随着发酵过程的进行,苹果酒中酚类物质的含量有不同程度的增加。其增加趋势为S型曲线,即先平缓再较快再平缓。     

新鲜奶油中黄嘌呤氧化酶的纯化及其酶学性质

采用正丁醇处理、硫酸铵沉淀、凝胶过滤层析和阴离子交换层析等分离技术,从新鲜的稀奶油中纯化得到SDS-PAGE电泳纯的黄嘌呤氧化酶,其最终回收率为19.9%,纯化倍数为82.42,酶比活为8.65U/mg。该黄嘌呤氧化酶的相对分子质量约为280kDa,最适作用温度为40℃,在35℃以下比较稳定;最适pH值是8.5,在pH6.5～8.5时较稳定;Zn2+、Fe2+和K+对黄嘌呤氧化酶活性有促进作用,Ag+、Mn2+、Ca2+和SDS对黄嘌呤氧化酶活性有抑制作用。     

苹果废渣中天然抗氧化物的提取、分离及活性研究

以苹果渣为原料,用不同浓度乙醇提取得到苹果多酚粗提物,再分别用乙酸乙酯萃取和薄层层析纯化,用猪油POV值测试为跟踪方法对各组分进行筛选,然后以BHT为对照,对最高活性组分与V_c、PG、柠檬酸的协同作用进行了系统探讨。结果表明,95％乙醇的提取效果最好,其干物质以无水乙醇重溶后活性显著提高；PG与苹果多酚的协同效果最好,是对照BHT的2．33倍。