75mGyX射线全身照射激活小鼠免疫细胞转录因子CREB,NF— …

采用凝胶电泳迁移率变化分析和寡核苷酸竞争抑制方法检测小剂量Ｘ射一对小鼠免疫细胞基因转录水平调控的影响。７５ｍＧｙＸ射线全身照射小鼠后４ｈ，脾细胞核蛋白提取物的转录因子ＣＲＥＢ及ＮＦ－ｋＢ与其基因启动部位增强子控制序列的结合活性，分别增强了７倍及５倍。胸腺细胞核蛋白提取物ＣＲＥＢ、ＮＦ－ＫＢ及ＡＰ１的结合活性分别增强６倍，４．３倍及２倍。而ＳＰ１、ＧＲＥ有ＯＣＴ１无明显变化。竞争抑制试验证实ＣＲＥＢ     

X射线全身照射对免疫器官内NF-kB的DNA结合活性的影响

采用凝胶电泳移动变化分析（ＥＭＳＡ）方法,观察了 Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞及脾细胞内 ＮＦ－ｋＢ ＤＮＡ结合活性的时程变化及其剂量效应关系。结果表明;胸腺细胞及脾细胞核蛋白提取物内存在两种与 ｋＢ位点特异结合的 ＮＦ－ｋＢ二聚体。 照射后两者的变化时程及剂量效应关系显然不同． ２Ｇｙ照射后胸腺细胞内 ｐ５０／ｐ６５的 ＤＮＡ结合活住在 ２４～４８ｈ稍有升高,而 ｐ５０／ｐ５０的 ＤＮＡ结合活性在照射后很快开始上升,于 ４ｈ达峰值,维持于高水平至 １２ｈ后逐渐下降。 照射后 １２ｈ电离辐射诱导 ｐ５０／ｐ６５复合物活性变化不明显,当剂量达 １Ｇｙ以上时ｐ５０／ｐ５０的ＤＮＡ结合活性呈剂量依赖性升高。提示,中等以上剂量的电离辐射主要诱导具有转导抑制作用的复合物．对脾细胞核蛋白提取物剂量效应关系及２Ｇｙ照射后的时程研究表明,较低剂量辐射对 ｐ５０／ｐ６５ 二聚体的表达有轻度刺激作用,较高剂量则显示抑制效应,而对 ｐ５０／ｐ５０二聚体的活住几乎无影响．提示,ＮＦ－ｋＢ在不同免疫器官内的构成及其对电离辐射的反应存在着差异。     

X射线全身照射对小鼠脾细胞cyclin B1 和cdc2基因转录水平的影响

采用Northern blot杂交法研究了低、高剂量X射线全身照射后不同时间小鼠脾细胞cyclin B1和cdc2基因转录水平的变化。结果表明,75mGy X射线全身照射后2h及12－24h小鼠脾细胞cyclin B1 mRNA表达量略有升高,分别为假照组的1.25、1.27和1.22倍,48h回降至假照水平;而2.0Gy照射后4h开始下降,12h降至最低,与假照组相比降低了39％,48h恢复至假照组水平。同时观察了cdc2 mRNA表达量的变化,结果表明,与假照组相比75mGy X射线全身照射后2－48h的各时间点小鼠脾细胞cdc2 mRNA表达量未见明显变化;而2．0Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后cyclin B1的变化基本一致。结果提示：低剂量辐射可诱导小鼠脾细胞cyclin B1转录水平增高,进而促进其细胞周期进程,但对cdc2转录水平无影响;相反,较高剂量辐射可诱导cyclin B1和cdc2转录水平均明显降低,最终发生G2期阻滞。     

小鼠受X射线全身照射后腹腔巨噬细胞IL-1 β蛋白表达的变化

采用胸腺细胞联合增殖反应法,观察了不同剂量Ｘ射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ－１β蛋白生物活性的时程（７５ｍＧｙ和２．０Ｇｙ照射后６、１２、２４、４８、７２、１２０和１６８ｈ）变化和剂量效应关系（０．０７５、０．２、０．５、１．０、２．０４．０、６．０Ｇｙ照射后２４ｈ）。时程变化结果表明,７５ｍＧｙ照射后,小鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ－１β蛋白生物活性逐渐增高,照后６、１２、２４ｈ明显高于对照组,且以照     

X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞的肿瘤坏死因子α(TNFα)表达量的变化

用L929细胞染料摄入法检测了小鼠受不同剂量(75mGy,2.0Gy)X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)表达量的时程变化及全身照射后24h的剂量-效应关系.结果可见,75mGy照射后3h,TNFα表达量有所增加,从6～120h,均显著高于对照组,12h表达量最高;2.0Gy照射后3～120h,不同时间点均显著高于对照,表达量最高点为12h.从剂量-效应关系中可见,经50mGy～2.0Gy不同剂量照射后,TNFα表达量均显著高于对照组,0.5Gy照射组其表达量最高,而经4.0Gy和6.0Gy照射后,TNFα的表达量显著低于对照组.提示一定剂量电离辐射可诱导巨噬细胞产生TNFα.     

X射线全身照射对小鼠胸腺细胞Cyclin B1和p34cdc2蛋白表达的影响

本文采用免疫组织化学法研究了低、高剂量X射线全身照射后不同时间小鼠胸腺细胞CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达的变化。结果表明,与假照组相比,75mGy X射线全身照射后8h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始升高,12h达高峰,48h恢复至正常水平;而2Gy照射后4h小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达开始降低,12h降至最低,24h有回升趋势,48h恢复至假照水平。p34^cdc2蛋白的表达,与假照组相比,75mGy照射后4～48h未见明显变化;而2Gy照射后的时程变化与相同剂量照射后CyclinB1蛋白表达的变化基本一致。提示：低剂量X射线全身照射可诱导小鼠胸腺细胞CyclinB1蛋白表达增强,从而促进细胞周期进程,但对p34^cdc2表达无影响;相反,较高剂量照射导致CyclinB1和p34^cdc2蛋白表达均下降,最终发生G2阻滞。     

~（147）pm对小鼠中枢和外周免疫细胞的损伤及rIL－1、rIL－2的防护作用

本文研究了重核裂变产物１４７￣ｐｍ对小鼠中枢和外周免疫细胞的辐射损伤，以及外源性白细胞介素－１（ｒＩＬ－１）和外源性白细胞介素－２（ｒＩＬ－２）对机体的防护作用。结果表明，内污染１４７￣Ｐｍ后，可明显抑制中枢免疫器官骨髓细胞和胸腺细胞及外周免疫器官脾脏Ｂ淋巴细胞的ＤＮＡ合成，细胞增殖受到抑制；ｒＩＬ－１和ｒＩＬ－２对１４７￣Ｐｍ抑制上述细胞中ＤＮＡ合成具有完全或部分的保护作用。     

小剂量辐射诱导小鼠免疫细胞早期蛋白质合成动力学变化

采用３ＨＬｅｕ掺入示踪观察７５ｍＧｙＸ射线全身照射对小鼠免疫细胞蛋白质早期合成的影响。结果表明，小剂量Ｘ射线全身照射后小鼠胸腺细胞蛋白质合成开始增加，６～８ｈ达到峰值，随后逐渐下降。ＳＤＳＰＡＧＥ及光密度扫描结果表明，照射后小鼠胸腺及脾细胞蛋白质合成增加，同一细胞中不同分子量的蛋白质各有其消长特点，不同细胞间合成增加的蛋白质分子量有所不同。这些早期变化的蛋白分子参与复杂的细胞功能调节，可能与辐射兴奋效应有关。     

X射线诱导CREB活化及其与cAMP通路的关系

检测X射线全身照射对小鼠胸腺细胞内CREB的DNA结合活性的影响和cAMP/cGMP比值的变化,并探讨照射后CREB的活化与cAMP通路的关系。采用电泳移动变化分析及竞争性蛋白结合分析法分别检测了胸腺细胞内CREB的DNA结合活性和cAMP,cGMP含量的变化。结果表明,大剂量照射（0．5－6．0Gy)诱导CREB的DNA结合活性明显升高,2Gy照射后最显著;cAMP/cGMP比值也表现为剂量依赖性的显著增加,0．075Gy照射后,CREB的DNA结合活性短暂下降后轻度增强,cAMP/cGMP比值下降,24h达最低值。说明低水平辐射诱导的CREB活性短暂下降后的轻度增强,可能不通过cAMP通路,较高剂量X射线诱导的CREB DNA结合活性的明显增强。则主要通过cAMP通路。     

低水平辐射诱导免疫系统兴奋效应的研究现状

本文扼要地叙述了近年来有关低水平辐射刺激免疫功能的主要实验研究结果。指出了低水平辐射全身作用后免疫增强过程中细胞间的相互关系,强调辅助性Ｔ细胞激活的中心地位。提供了低水平辐射促进Ｔ细胞信息传递的主要环节的资料。对文献中流行的两种解释免疫兴奋效应的假说进行了分析评价,指出低水平辐射优先损伤抑制性Ｔ细胞或促进前体细胞凋亡的设想未能获得实验资料的支持。提出了低水平辐射改变神经内分泌调节功能在免疫兴奋效应     

低剂量X射线全身照射后小鼠IL-10和 IL-12的反向变化

通过检测低剂量辐射(LDR)对小鼠脾淋巴细胞中IL-10以及腹腔巨噬细胞中IL-12的影响,研究 LDR 辐射免疫效应的机制.采用 Northern blot 检测了75 mGy X 射线全身照射后, IL-10、IL-12 mRNA水平的变化,同时分别通过流式细胞术和ELISA检测了IL-10、IL-12 蛋白水平的变化. (1)Northern blot检测表明,75 mGy X射线全身照射后脾细胞中IL-10 的mRNA转录水平从照射后1 h即降低,并维持较低水平,一直到48 h开始恢复,达到假照射水平的86.2%;巨噬细胞中IL-12两亚基的mRNA水平的变化则表现为,照射后1h p35及p40亚基均迅速升高分别达到假照射组的131%和192%.而后,p35开始回降,直至照射后16-48 h恢复正常,p40亚基从照射后1-48h总体表现为升高. (2)对蛋白产物检测结果表明,脾细胞IL-10合成在照射后2 h开始即呈时间依赖性降低,至48 h仍无恢复迹象(p<0.01),双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)检测表明,巨噬细胞分泌IL-12明显增高.LDR引起IL-10和IL-12发生反向变化的结果为低剂量辐射增强细胞免疫功能提供了分子水平的实验依据.