利用废革屑制备不同分子量肽-Zn螯合物的工艺探究

本文主要通过不同用量的碱对废革屑进行水解,制备不同分子量的多肽1、多肽2、多肽3,利用GPC测定3种多肽分子量,并将多肽和Zn(CH3COO)2进行螯合反应来制备多肽-Zn金属螯合物。设计单因素实验,考察了pH、反应温度、反应时间、多肽-Zn质量比等因素对螯合反应的影响。确定了Zn(CH3COO)2与多肽螯合的最佳条件。多肽1的最佳螯合条件:多肽-Zn比为7∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为8,最佳条件下的螯合率为66.83%;多肽2的最佳螯合条件:多肽-Zn比为7∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为8,最佳条件下的螯合率为75.33%;多肽3的最佳螯合条件:多肽-Zn比为6∶1,反应时间60 min,反应温度为60℃,pH为7,最佳条件下的螯合率为82.56%;最后,对多肽-Zn螯合物进行红外光谱分析表征,结果表明Zn离子成功螯合到多肽上,得到Zn肽螯合物。     

蛋白A的固定及在抗体亲和纯化中的应用

目的 以蛋白A作配基偶联活化的Sepharose 4FF后纯化兔免疫蛋白IgG.方法 以环氧氯丙烷(ECH)活化凝胶,正交试验确定最佳活化条件;以纯化数据确定抗体兔免疫蛋白IgG纯化最佳缓冲液盐浓度.结果 Sepharose 4FF最佳活化条件:ECH浓度20％(v/v),0.8 mol/L NaOH添加量为1 mL/1 g Sepharose 4FF湿胶,活化时间2.5 h,反应温度40℃.结论 建立将活化琼脂糖凝胶Sepharose 4FF与蛋白A偶联的条件,可应用于纯化兔免疫蛋白IgG.     

新型Cu2+-IDA金属螯合亲和膜制备及吸附蛋白质性能的研究

以纯棉布为载体,环氧氯丙烷(EPI)为交联活化剂,亚氨基二乙酸(IDA)为配基,可制备Cu2+-IDA金属螯合亲和膜,并对影响活化和偶联反应条件的因素包括NaOH浓度、反应时间、反应温度、IDA用量等进行了研究.实验表明,浸没在2.0mol/L NaOH中的纯棉布在30℃水浴中活化反应4h,所得的亲和膜环氧基密度可达1.54μmol/cm2.配基IDA偶联的最佳条件为IDA用量为0.08g/mLNa2CO3 (Na2CO3溶液浓度为1 5mol/L),反应温度为50℃,反应时间为10h.以溶菌酶为标准蛋白,其等温吸附线基本符合Langmuir形式,经曲线拟合得最大吸附量为30mg/g干膜.     

氨基酸多肽螯合钙的制备及其工艺优化

以罗非鱼下脚料(鱼头,鱼骨架)为原料,对原料进行水解获得氨基酸多肽溶液和鱼骨,鱼骨进行酸解获得游离钙,最终利用游离钙溶液与氨基酸多肽溶液反应制得氨基酸多肽螯合钙。作者获得了酸解鱼骨的较佳条件以及氨基酸多肽液与游离钙的较佳螯合工艺条件。骨钙溶出试验:温度50℃、溶出时间100 min、盐酸浓度4 mol/L、盐酸量12 mL/g(以骨粉计)。螯合试验:螯合液pH 5、螯合时间60 min、氨基酸多肽与钙离子质量比2.5∶1、螯合温度80℃。     

大豆多肽-锌螯合物的制备工艺优化及其结构表征

本文通过Alcalase酶水解大豆分离蛋白制备大豆多肽,并将大豆多肽与ZnCl₂进行螯合反应制备多肽-锌螯合物。以锌螯合能力为指标,通过单因素实验及正交试验,确定大豆多肽锌螯合物的最佳工艺条件为:反应温度75 ℃,pH5.5以及ZnCl₂溶液浓度为450 μmol/L,此条件下大豆多肽的锌螯合能力为(26.96±1.22) mg/g。紫外光谱和傅利叶红外光谱表明,锌离子可以与多肽中的羧基、氨基和肽键结合,从而形成大豆多肽锌螯合物。荧光光谱、扫描电子显微镜和Zeta电位的结果表明,与锌离子的螯合使得多肽发生分子内和分子间的折叠与聚集。 大豆多肽-锌螯合物为开发新型补锌制剂提供了新的研究思路和理论依据。     

AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞建立高血压损伤模型

目的:采用高血压发病因子血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)建立高血压损伤模型。方法:使用不同浓度(0.01、0.10、1.00μmol/L和10.00μmol/L)AngⅡ诱导HUVECs不同时间(3、6、9、12 h和24 h),通过考察HUVECs形态、活性、功能、微观结构及凋亡程度来评价HUVECs损伤程度,同时采用交叉设计方差分析和多重比较方法得到AngⅡ最适诱导浓度和最佳诱导时间。结果:AngⅡ呈浓度依赖式诱导HUVECs损伤,最佳诱导条件为1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h,此时HUVECs活性为44.85%、NO含量为43.57μmol/L、总一氧化氮合酶活力为6.99 U/mg pro、内皮型一氧化氮合酶活力为1.89 U/mg pro、丙二醛含量为7.46 nmol/mL、超氧化物歧化酶活力为27.29 U/mg pro、细胞凋亡率为41.5%,微观结构显示核膜皱缩,核仁消失,胞浆内出现大量空泡状结构,线粒体或细小或肿胀,粗面内质网扩张数目较少,部分核糖体丢失,平面内质网扩张,但细胞未解体,仍然保持细胞结构。结论:1.00μmol/L AngⅡ诱导12 h可以成功诱导HUVECs建立高血压损伤模型。     

鱼骨多肽钙粉的研究与开发

利用鲢鱼骨开发了一种综合性蛋白补钙制剂─鱼骨多肽钙粉,并研究了制备鱼骨多肽钙粉的最佳酶解工艺和钙活化工艺。结果表明,合适的酶解条件为温度65℃,木瓜蛋白酶用量5000U/g(原料),水解时间5h,pH为7,料液比(W/V)=1∶5,多肽产品得率为9.31%。合适的钙活化工艺条件为在室温35℃的条件下,乳酸浓度为20%,骨粉质量与乳酸体积之比m粉:V乳酸=10g∶70mL,活化时间约6h,活性钙产品得率为25.00%。     

响应面法优化罗非鱼皮胶原多肽螯合锌的制备工艺

以罗非鱼皮胶原多肽(TSP-I)为配位体,采用水合体系法与硫酸锌螯合,制备可用于补锌剂的多肽螯合锌产品。以响应面法优化罗非鱼皮胶原多肽螯合锌工艺。结果表明:最佳螯合工艺条件为:反应温度60℃、pH5.3、TSP-I与硫酸锌摩尔比2:1、TSP-I浓度3.4g/100ml水、反应时间40min。在此条件下螯合率理论值为92.57%,验证实际螯合率为92.17%。     

正交试验优化胶原多肽螯合钙的制备工艺

以胶原多肽及氯化钙为原料制备胶原多肽螯合钙并确定其最佳制备工艺,结果表明：胶原多肽螯合钙最适的螯合条件为钙元素和胶原多肽的质量比为13:100、pH6.0、时间30min、温度30℃。在该最佳螯合条件下得到的胶原多肽螯合钙的螯合率达到77.7mg/g。傅里叶变换红外光谱分析结果表明胶原多肽螯合钙是一种新的物质,后期的动物实验也证明了胶原多肽螯合钙具有增加骨密度的功能。     

鲢鱼源多肽锌的制备工艺对其抑菌活性的影响

研究了制备工艺中的主要因素对鲢鱼源多肽锌螯合物的抑菌活性影响。以抑菌圈直径为指标,探讨了酶解工艺(蛋白酶种类和酶解时间)和螯合工艺(螯合反应的pH、多肽与氯化锌的质量比、螯合反应的温度和时间)对多肽锌螯合物的抑菌活性影响。结果表明,酶法水解鲢鱼蛋白制备抑菌型多肽锌的最佳条件为风味蛋白酶酶解时间6h、螯合反应pH为6.0、多肽与氯化锌质量比为2:1、反应时间45min、温度30℃,得到的螯合物对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径分别为12.50mm和12.66mm,螯合物得率38.67%。因此,鲢鱼源多肽锌螯合物具有较好的抑菌活性,有望作为一种潜在的抗菌剂。