利用赤星病菌毒素快速高通量鉴定烟草抗性种质的方法研究

为寻求一种快速高通量筛选鉴定烟草抗赤星病种质或材料的方法,本研究以烟草（Nicotiana tobacum L.）种质净叶黄、Beinhart1000-1、NC89 和G140 作为供试材料,利用烟草赤星病菌毒素就烟草种质对赤星病的抗病性鉴定方法进行研究,试验设计3 种鉴定方法：毒素液浸根法、毒素液浸种法和毒素培养基法.为验证毒素培养基法鉴定结果的可靠性,对烟草种质材料净叶黄、Beinhart1000-1、NC89、G140、K326、G28 和中烟100 的室内鉴定结果,与其对烟草赤星病的田间抗性鉴定结果进行了相关性分析.结果表明,室内鉴定结果与田间鉴定结果之间极显著相关（r=-0.9588）,室内鉴定结果可准确反映烟草种质对赤星病的抗病性.     

烟草不同氮源水平对赤星病的抗性研究

从不同营养水平(N素来源)对烟草赤星病的抗病性进行了探讨,结果表明增加烟田肥料中N素含量中有机N所占的比例,可明显提高烟草对赤星病的抗病性.盛发期调查,各处理间以75%有机肥N和25%化肥N的组合赤星病危害最轻.     

烟草感染赤星病后有关酶动态的研究

本文研究１１个烟草品种感染赤星病后过氧化物酶（ＰＯＤ）同工酶、多酚氧化酶（ＰＰＯ）、硝酸还原酶（ＮＲ）和抗坏血酸氧化酶（ＡＡＯ）活性的变化规律。结果表明：抗赤星病强的品种，ＰＰＯ在接种３６ｈ内活性升高，以后下降；ＰＯＤ同工酶活性变幅大而快，接种初期活性稍有下降，然后增强，其中以阴极端２、４同工酶带增加较快，接种１８０ｈ后就由弱酶带变为强带；ＮＲ活性变化不大；ＡＡＯ活性提高。抗赤星病弱的品种，ＰＰＯ活性低于对照；ＰＯＤ同工酶变化不大，呈下降趋势；ＮＲ活性变幅大；抗坏血酸氧化酶在接种初期活性下降，８４ｈ后回升。     

不同抗性烟草品种内源激素对赤星病胁迫的响应差异

为进一步明确烟株内源激素与赤星病抗性的关系,以抗赤星病烟草品种净叶黄和感病品种长脖黄为研究对象,通过盆栽种植并接种赤星病菌,比较不同抗性品种内源激素含量对赤星病胁迫的响应差异。研究结果显示,在赤星病胁迫下,净叶黄、长脖黄的脱落酸（ABA）含量和乙烯（ET）释放量均呈上升趋势,而生长素（IAA）以及细胞分裂素（CTK）含量表现为降低。同时,赤星病胁迫导致净叶黄的赤霉素（GA）、茉莉酸（JA）含量增加,引起长脖黄的JA含量降低,GA含量则先增加后降低。与净叶黄相比,长脖黄的ABA含量增幅较小,而GA、IAA、CTK与JA含量降幅较大,并且ET释放量较高。综上,在赤星病胁迫下,内源激素的含量差异以及变化幅度可以反映不同品种的抗病能力。     

烟草对赤星病田间抗性的遗传研究

本文选用赤星病（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａａｌｔｅｒｎａｔａ）抗感程度不同的７个烟草品种，采用双亲交和双列交的交配设计，于１９９４～１９９６年间对其田间抗性的遗传进行了分析。结果表明，品种间抗病性差异显著，尽管环境因素对发病程度影响很大，各抗病品种的抗性基本稳定。双列分析和世代方差分析结果表明，抗病性呈部分显性，受多基因控制。基因表达的加性效应和显性效应同时存在，以加性为主。各抗性亲本的抗病基因的显隐性方向不同。遗传分析和配合力分析表明，狭义遗传率变幅为２１．２％～７８．１％，所有的抗性亲本均表现出较高的负效应一般配合力，具有较好的特殊配合力的组合有：宾哈特１０００－１×ＮＣ８２、宾哈特１０００－１×Ｇ－１４０、宾哈特１０００－１×金星６００７、净叶黄×ＮＣ８２、许金４号×ＮＣ８２、Ｇ－２８×Ｇ－１４０、Ｇ－２８×金星６００７。在进一步深入了解其抗性机制的基础上，这些材料都可以在赤星病抗病育种中加以利用。     

三生-NN与NC89接种TMV后防御酶的活性变化

通过研究抗性不同的烟草品种使用木霉孢子并接种TMV后其防御酶活性和MDA含量变化,发现三生-NN和NC89虽然都属于普通烟草(Nicotiana tobacum L),但某些抗性相关基因不同.使用木霉孢子后,两者的防御酶有些变化趋势相同(如PAL),有些则不同(如POD);受损伤程度(MDA含量)变化幅度也不相同.接种病毒后,抗性酶被激活,其活性由抗病毒物质、病毒和植物本身等多种因素综合作用.枯斑三生作为烟草抗病毒物质的筛选的指示植物具有一定局限性,必须结合常规栽培品种进行更加系统的田间试验,才能确定某一抗病毒物质的实际应用效果.     

广东烟草青枯病菌菌系研究

广东主要烟区南雄县和梅州市的烟草青枯病菌（Ｒａｌｓｔｏｎｉａｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ）没有本质上的差异。供试的菌株对烟草、茄子、番茄、辣椒都有强致病力,均为小种１,对２个花生品种（汕油７１,蔓生型）的致病力均分化为３个类型。所有菌株都能利用３糖３醇产酸,为生化型Ⅲ。琼脂双扩散试验结果表明,绝大部分菌株都能与南雄菌株和大埔菌株的抗血清形成３条吻合相连的沉淀带,说明这两个烟草青枯病菌菌株的亲缘关系十分密切。     

苯并噻二唑(BTH)诱导烟草抗青枯病活性与抗病机理研究

利用离体叶片注射感病的方法.测定了BTH在100、50、25、12.5、6.25μg/mL浓度下,诱导烟草抗烟草青枯病的活性.结果表明:经BTH处理的烟叶病情指数均显著低于对照处理.处理14 d后,50 μg/mL BTH处理的烟叶相对诱导活性达到50%以上.检测与抗性相关的防御酶系活性的动态变化发现,在25 μg/mL的BTH浓度下,处理叶片的4种防御酶:苯并氨酸解氨酶(PAL),过氧化物酶(POD),多酚氧化酶(PPO)及超氧化物歧化酶(SOD)活性都有所提高,与对照比提高率分别达127.5%,54.9%,47.1%和70.3%.表明BTH诱导烟草抗青枯病的机理与激活植物体内防御酶活性有关.     

接种TMV的烟草高温胁迫后防御酶活性的变化

采用温度转换和人工接种试验研究了接种TMV的烟草经高温胁迫后防御酶活性的变化。结果表明:烟草接种TMV后经过高温处理(48℃,24h),防御酶中的超氧化物歧化酶(SOD)活性变化较小;过氧化氢酶(CAT)活性在处理后2d内没有明显变化,2d时高于对照;过氧化物酶(POD)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性均高于对照;多酚氧化酶(PPO)活性在大部分阶段高于对照。因此,CAT、POD、PPO、PAL活性的变化可能与高温诱发烟草对TMV的抗性有关。     

膜醭毕赤酵母与壳聚糖复合处理对柑橘果实防御酶及防御物质的影响

研究膜醭毕赤酵母与壳聚糖复合处理对柑橘果实防御酶和防御物质的影响。采用损伤接种与无损伤浸泡复合液两种处理方式,分别研究经复合处理后果实防御酶和防御物质在7 d和28 d贮藏期内的变化。结果显示：与对照果实相比,复合液接种处理果实中的苯丙氨酸解氨酶（PAL）、过氧化物酶（POD）、多酚氧化酶（PPO）、几丁质酶、β-1,3葡聚糖酶（GLU）等防御酶在贮藏期内活性增加明显,其中以PAL、POD、GLU 3 种防御酶最为明显,在贮藏第3天时均达到最大值;复合液浸泡处理果实中的PAL、POD、几丁质酶活性和木质素含量的增加较为明显,在贮藏第14天时达到最大值。结果表明,膜醭毕赤酵母与壳聚糖复合处理能够诱导柑橘果实中防御酶活性和防御物质含量的升高,从而起到提高果实抗病性的效果。防御酶在果实贮藏前期发挥较关键的抗病作用,而酚类、木质素等防御类物质则在贮藏后期发挥抗病作用。     

烟草抗赤星病（Alternaria alternata）诱导因子的筛选

不同诱导因子的研究结果表明，真菌、细菌和病毒都可诱导烟草对赤星病产生抗性。抗性效应表现为发病率降低、严重度变小和病斑面积减少。真菌诱导因子中，只有弱毒株诱导产生抗性，抗性效应为７．４％～８０．１％；细菌诱导产生的抗性效应为１．３％～８５．８％；病毒及其组合的抗性诱导效应为３．９％～８３．２％。实验发现，真菌和细菌的某些菌株和某些病毒及其组合也可诱导烟草对赤星病的感病性，使病情加重。     

防治烟草赤星病药效试验

为了更有效地防治烟草赤星病 ,用 7种药剂进行了大田喷施对比试验。结果表明 :4 0 %“菌核净”可湿性粉剂 5 0 0倍液、4 0 %“菌核铜”可湿性粉剂 5 0 0倍液、4 5 %“菌克”可湿性粉剂 5 0 0倍液、“云岭酶素”30 0倍液、4 5 %“金叶舒”可湿性粉剂 60 0倍液、3%“多抗霉素”可湿性粉剂 30 0倍液、30 %“大力”可湿性粉剂 5 0 0倍液的相对防效依次为 :92 .5 6%、92 .13%、92 .13%、91.18%、90 .36%、87.5 6%、85 .0 2 %、83.91% ,差异达显著水平     

氨基酸对烟草赤星病菌毒素毒性的影响

采用摩擦接种处理法、浇根处理法和发芽种子根处理法测定了烟草赤星病菌毒素的毒性,确定了烟草发芽种子根处理法作为烟草赤星病菌毒素毒性的测定方法.用8种氨基酸分别以5种不同浓度与烟草赤星病菌GL-6毒素混合接种,测定结果表明L-精氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酸、L-丙氨酸和L-天门冬氨酸所有供试浓度均增强病菌毒素毒性;而L-脯氨酸、L-色氨酸和L-缬氨酸对病菌毒素毒性有抑制作用,其有效浓度分别为0.02～0.2、0.02～0.2和0.02～2mg/mL.     

烟草赤星病的生物防治研究进展

综述了植物诱导抗性、微生物拮抗作用、转基因技术在烟草赤星病的生物防治上研究现状,并对植物诱导抗性、植物源杀菌剂的研究与应用和筛选烟草赤星病菌拮抗菌等方面进行了展望。     

烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗药性检测

为了解吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的抗性水平,采用菌丝生长速率法,测定了318株烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑的药剂敏感性,建立敏感基线。运用最低抑制浓度法确定抗性菌株及频率,并比较不同采样地点的抗性水平。结果表明,供试敏感菌株对菌核净的敏感性频率分布呈连续的单峰曲线,接近正态分布,其EC₅₀均值2.916 μg/mL可作为两省烟草赤星病菌对菌核净的敏感基线,抗性频率为21.38%;烟草赤星病菌对苯醚甲环唑的敏感基线为1.198 μg/mL,抗性频率为18.24%。吉林省和黑龙江省烟草赤星病菌对菌核净和苯醚甲环唑产生了不同程度的抗性,不同地点抗性水平存在差异。本研究为烟草赤星病菌的抗药风险评估奠定了基础,为制定吉林和黑龙江两省烟草赤星病科学防治策略和科学用药提供了依据。     

烟草叶围细菌的分离及其对Alternaria alternata的拮抗作用

分离到烟草叶围细菌136株,通过对峙培养实验筛选出对烟草赤星病菌A.alternata有较强拮抗活性的9个菌株.离体叶片生防测定实验表明,9株细菌均能不同程度地减轻烟草赤星病的发生.其中菌株Tpb88具有较强和稳定的拮抗作用,无菌滤液实验表明,叶围细菌Tpb88在一定浓度范围内能有效抑制A.alternata菌丝生长、孢子萌发和芽管伸长,且浓度越高,抑制能力越强,结果表明Tpb88对烟草赤星病菌的拮抗机制可能为抗菌物质的产生.     

烟草赤星病菌株毒力与繁殖代数的关系

为明确烟草赤星病菌的毒力与其繁殖代数的关系,在室内采用离体、室外采用活体两种接种鉴定方法分别测定了烟草不同生长阶段分离到的6个赤星病菌株的毒力,并采用聚类分析方法比较了各菌株的毒力差异。结果表明,赤星病菌在田间繁殖代数与其毒力大小有关,生长后期分离的菌株(4、5和6号)比生长前期分离的菌株(1、2和3号)毒力强,即赤星病菌在田间繁殖代数越高,毒力越强。毒力分析聚类树状图也显示了菌株间的毒力差异,根据供试菌株在3个烟草品种上的毒力反应,可将其分为2个组,生长前期分离的菌株为一组,生长后期分离的菌株为一组。     

温度和叶面湿润时数对烟草赤星病菌侵染的影响

在控制条件下接种烟草赤星病菌的试验结果表明 ,在品种和菌株组成一定的情况下 ,接种温度 (DT)和叶面湿润时数 (WD)是影响病菌侵染的 2个主要因素。接种温度在 12～ 37℃范围内 ,病菌可以侵染寄主 ,成功侵染的最适温度为 2 7～ 30℃。在适宜温度条件下 ,接种后保湿 2h病菌即可侵入 ,保湿时间延长 ,侵染概率增大。侵染概率与接种温度、叶面湿润时数及其互作之间具有线性关系。     

抗烟草赤星病的植物源粗提物筛选

为筛选对烟草赤星病有较高抗性的植物源提取物,进行了从10个科植物中以不同提取方法提取的12种粗提物对烟草赤星病室内孢子萌发和田间小区防治试验。结果表明:胡椒科的山鸡椒(Litseacubeba)果实的水蒸气粗提物、菊科的牛蒡(Arctiumlappa)种子的石油醚提取物和桃金娘科的丁子香(Syzygiumaromaticum)花的水蒸气粗提取物可明显抑制烟草赤星病菌孢子萌发,具有相对较好的田间防治效果。     

田间烟草赤星病菌繁殖代数与其对杀菌剂敏感性的关系

为合理用药、提高防效,探讨了田间烟草赤星病菌繁殖代数与其对杀菌剂敏感性的关系。室内进行了在田间烟草不同生长时期采集的6个赤星病菌株对杀菌剂敏感性测定,并用聚类分析方法比较了各菌株对杀菌剂敏感性差异。结果表明,不同时期采集的不同繁殖代数烟草赤星病菌株对"菌核净"的敏感性差异显著,其中4号菌株对"菌核净"最不敏感,EC50为193 3644mg/L,已产生一定的抗药性,其次为1号菌株,EC50为102 3738mg/L,对"菌核净"最敏感的是2号和3号菌株,EC50分别为42 0390和58 4109mg/L。表明不论前期还是后期采集的菌株都有对"菌核净"敏感和不敏感的,烟草赤星病菌株的繁殖代数与其对"菌核净"的敏感性无一定规律性。从聚类分析树状图也可以看出这种敏感性的差异情况。