强化鲁氏接合酵母对酱油品质的影响

为了研究强化鲁氏接合酵母（JL-02）对酱油品质的影响。通过测定JL-02菌株耐盐性、成曲pH和中性酶活力、不同酿造工艺两种酱油的理化指标以及挥发性风味物质并进行分析。结果表明,JL-02菌株耐盐性高达16%,成曲pH为6.85±0.08,中性蛋白酶活力为（2109.2±45.2）U/g;强化鲁氏接合酵母后的酱油总酸含量为（1.14±0.01）g/100 mL,较对照组有所增加,而还原糖含量为（1.06±0.01）g/100 mL,pH为5.09±0.03,均较对照组有所降低,氨基态氮含量并无明显差异,均达到特级酱油标准。同时成曲、对照组和实验组挥发性风味物质分别为15、52和57种,而后者新增呋喃类风味物质（2-正戊基呋喃、4-甲氧基-2,5-二甲基-3(2H)-呋喃酮和2,3-二氢苯并呋喃）,对三组样品挥发性风味物质进行主成分分析,聚类分析结果良好。本研究为今后酱油企业进行强化酵母菌株酿造酱油工艺提供一定的思路和技术方法。     

沿面放电等离子体对苹果汁中耐高渗酵母的杀灭效果

目的：研究沿面放电等离子体对苹果汁中耐高渗酵母（Zygosaccharomyces rouxii）的杀灭效果及其对苹果汁品质的影响。方法：以耐高渗酵母LB为目标菌株,首先利用不同电压和不同气体流速沿面放电等离子体处理目标菌株,通过微生物技术分析沿面放电等离子体对目标菌株的杀灭效果,并观察处理过程对细胞膜的破坏作用;其次,评估沿面放电等离子体处理对苹果汁理化指标及色泽和挥发性化合物的影响。结果表明：在21 kV等离子体处理30 min后,500 mL 苹果汁中的耐高渗酵母数量降低了5.60 个对数,并且等离子体处理会造成细胞膜损伤,从而导致细胞死亡。沿面放电等离子体处理对苹果汁理化指标和挥发性化合物总体没有显著影响（P＞0.05）,但处理前后苹果汁颜色参数变化显著（P＜0.05）。结论：沿面放电等离子体对苹果汁中耐高渗酵母具有显著的杀灭效果,研究结果可为该技术应用于食品中微生物的杀灭提供理论依据。     

辉光放电等离子体对苹果汁中棒曲霉素降解作用及对苹果汁品质的影响

为了寻求一种能最大限度保持苹果汁品质又能有效降解其中棒曲霉素(Pat)的技术方法,本文采用辉光放电等离子体技术,研究了其对苹果汁中棒曲霉素的降解效果及对果汁品质的影响。结果表明,当直流电压为550 V,电流范围为145~155 m A时,辉光放电等离子体可在5 min内有效降解苹果汁中的棒曲霉素,降解效果显著(p<0.05),降解率达到96.63%。在0~30 min处理时间范围内,苹果汁中的可溶性固形物无变化,苹果汁的色值和透光率提高。10 min内苹果汁总酸度变化不大,p H稍微降低,粘度、电导率、A660和A420无显著变化。综合分析,10 min的处理时间已完全使苹果汁中的棒曲霉素降低到一个很低的水平,又不会对苹果汁的主要理化指标造成影响。      

酱油发酵用菌鲁氏接合酵母的安全性

对传统酱油发酵用菌鲁氏接合酵母的安全性进行研究。利用气相色谱-质谱联用法探讨了菌株在酱醪汁发酵中的代谢产物并研究传统菌株的代谢安全性;通过胆盐羟化酶活性检测、溶血实验及耐药性实验研究菌种自身的安全性。结果表明:鲁氏接合酵母在酱汁发酵代谢产物分析中未检出有害代谢物,并能够利用糖类及氨基酸转化成相应的醇类和酯类物质;在培养过程中鲁氏接合酵母不产生胆盐羟化酶也不具有溶血性;对伏立康唑、酮康唑、制霉菌素、两性霉素B四种基本抗生素敏感,对氟康唑存在剂量依赖性。进一步测定了两性霉素B对鲁氏酵母的最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC)为2μg/mL,氟康唑对鲁氏酵母的MIC为8μg/mL,低于美国临床实验室标准化委员会的药物耐药判断标准。     

酱油中鲁氏接合酵母的安全性初步评价

鲁氏接合酵母（Zygosaccharomyces rouxii）在食品发酵中应用广泛,但该菌株安全性的研究相对缺乏,故该研究对酱油中的鲁氏接合酵母进行急性毒性及亚慢性毒性评价。通过给予小鼠低（7.5×109 CFU/mL）、中（3.75×1010 CFU/mL）、高（7.5×1010 CFU/mL）剂量组的鲁氏接合酵母,测定小鼠的基本指标、脏器系数、血常规、血生化指标等。急性毒性实验结果表明,最大给药剂量为7.5×1010 CFU/mL时,未测出鲁氏酵母的半数致死量（LD50）。从体质量增长率和脏器系数来看,各组间无显著差异（P＞0.05）,无菌株易位现象。亚慢性毒性实验结果表明,小鼠的一般体征、行为、饮食、粪便无异常现象,各组小鼠体质量正常增长,与对照组相比,低、中、高剂量组的小鼠一般指标、血常规指标、血生化指标及机体指标无明显差异（P＞0.05）,高剂量组小鼠主要脏器组织无明显病理变化。实验结果表明在一定的剂量范围内鲁氏接合酵母对小鼠没有明显的毒副作用。     

吡哆醇对鲁氏接合酵母高盐胁迫耐受的影响

为了提高鲁氏接合酵母抗高盐胁迫能力,作者探索了添加吡哆醇对鲁氏接合酵母高盐胁迫耐受的影响。通过测量甘油、海藻糖含量以及Na⁺/K⁺-ATP酶活性等一系列生理表征来验证鲁氏接合酵母高盐适应性的变化。实验结果表明,鲁氏接合酵母在高盐胁迫条件下外源添加吡哆醇,在延滞期时,菌株提前24 h积累细胞内甘油,并且加快了细胞内海藻糖分解代谢速率;在对数期时,细胞内钠钾比率（Na⁺/K⁺）降低82.3%,细胞膜上Na⁺/K⁺-ATP酶活性增加16.9%,2-苯乙醇产量（质量浓度）提高6.42倍;在稳定期时,生物量提高10.6%,乙醇产量（质量浓度）提高5%,2-苯乙醇产量（质量浓度）提高1.26倍。综上所述,吡哆醇的添加能有效提高鲁氏接合酵母的高盐胁迫耐受能力,进一步增强了鲁氏接合酵母在酱油等高盐发酵食品中的应用前景。     

响应面法优化鲁氏接合酵母产MAP酶条件

为研究产MAP酶的最佳培养条件,以鲁氏接合酵母为原料,MAP酶为响应值,在单因素实验的基础上根据Box-behnken实验设计原理,采用三因素三水平的响应面分析法对MAP酶培养条件进行优化,通过响应面实验,建立了MAP酶含量与三个因素变化的二次回归方程。同时根据回归模型进行了计算机模拟实验并绘制了曲面图,探索MAP酶随主要因素水平的变化规律与优化点。结果表明,鲁氏接合酵母产MAP酶最佳培养条件为:温度27℃、盐浓度9.28%、培养时间80.4h,此培养条件下MAP酶浓度3.189ng/mL。     

天然抑菌剂对鲁氏接合酵母的抑菌作用

本课题研究植物源、动物源与微生物源三种来源的20种天然抑菌剂对鲁氏接合酵母的抑菌活性。采用双层平板打孔法,根据抑菌圈直径判断20种天然抑菌剂的抑菌活性;采用二倍稀释法测定天然抑菌剂对鲁氏接合酵母的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC);用比色法测定鲁氏接合酵母在YPD培养基和果汁中的生长情况;用比色法分别测定两种天然抑菌剂以及两者以不同的添加比例加入果汁中对鲁氏接合酵母生长状况的影响;研究柠檬酸浓度、温度、紫外线照射时间对复合抑菌剂抑菌稳定性的影响。研究结果表明微生物源抑菌剂对鲁氏接合酵母的抑菌效果最好;鲁氏接合酵母在YPD中的生长情况要好于在果汁中;筛选出了纳他霉素和ε-聚赖氨酸两种微生物源抑菌剂,且两者具有协同作用;柠檬酸浓度、温度、紫外线照射时间会影响复合抑菌剂的抑菌稳定性。     

香芹酚对鲁氏接合酵母的抗菌活性及其机制

为研究植物源活性物质香芹酚对食品腐败菌鲁氏接合酵母的抗菌活性,首次从细胞凋亡角度解析其潜在的抑菌机制。采用牛津杯抑菌圈法和双倍稀释法分别测定抑菌圈直径(DIZ)、最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC),扫描电镜观察酵母细胞形态变化。采用流式细胞仪和酶标仪检测细胞凋亡系列典型生化和形态特征,并通过qRT-PCR检测凋亡关键调控因子转录水平的变化。香芹酚处理后鲁氏接合酵母的DIZ、MIC和MFC分别为(13.67 ± 0.58)mm,0.156 mg/mL和0.3125 mg/mL,MIC和MFC香芹酚处理后鲁氏接合酵母细胞表面产生褶皱;MIC香芹酚处理后鲁氏接合酵母胞内活性氧迸发,Ca2+浓度升高,线粒体膜电位去极化,半胱氨酸蛋白酶活化,磷脂酰丝氨酸外翻及DNA断裂,且促凋亡因子Yca1、Dnm1、Cyc1、Nuc1及Ndi1转录水平上调1~4倍。上述结果表明香芹酚可能通过依赖半胱氨酸蛋白酶的线粒体途径诱导鲁氏接合酵母凋亡,从而发挥抗菌活性。研究结果对解析香芹酚的抑菌机制提供了新思路,也为绿色、高效食品防腐剂的开发应用奠定了理论基础。     

鲁氏接合酵母产葡萄糖醛酸发酵条件优化

以1株产葡萄糖醛酸的鲁氏接合酵母ZSR2为研究对象,通过单因素优化确定了鲁氏接合酵母ZSR2发酵产葡萄糖醛酸的最佳发酵条件(发酵培养基含有80 g/L蔗糖、30 g/L大豆蛋白胨,培养基初始p H 5. 0,种龄9 h,接种量为3%)。在此条件下,鲁氏接合酵母ZSR2产葡萄糖醛酸水平提高到14. 68 g/L,是优化前的3. 8倍。此外,通过在发酵过程中采用补料策略,使葡萄糖醛酸产量进一步提高到22. 36 g/L,是目前纯菌发酵法产葡萄糖醛酸的最高水平。研究结果可为微生物发酵法生产葡萄糖醛酸的工业化进程奠定基础。     

脉冲电场和热处理对鲜榨苹果汁贮藏期品质的影响

研究高压脉冲电场处理 (PEF)和热处理对鲜榨苹果汁贮藏期的品质影响。研究发现 ,4℃贮藏 3 0d ,PEF( 2 5kV/cm ,1 0 3 5个脉冲 )和热处理 ( 72℃、1 5s和 90℃、60s)可以降低果汁中微生物数量 ,而且对苹果汁的电导率、Brix和 pH值的影响不显著 (P >0 0 5 )。但是热处理对果汁的浊度有显著影响 (P <0 0 5 ) ,而PEF处理差异不显著 (P >0 0 5 )。PEF处理苹果汁的L值和色值均优于热处理 ,感官评价中风味和色泽比热处理的苹果汁更接近对照的风味和色泽。     

硫胺素对鲁氏接合酵母高盐适应性的影响

采用同位素内标-超高效液相色谱串联三重四极杆质谱（UPLC-MS/MS）法测定金沙江攀枝花江段6种常见鱼中卡巴氧代谢物喹恶啉-2-羧酸（QCA）和喹乙醇代谢物3-甲基-喹恶啉-2-羧酸（MQCA）的残留量。样品经过预处理,采用ZORBAX SB-C18色谱柱分离,以0.1%甲酸水-乙腈为流动相进行梯度洗脱;采用电喷雾-正离子多反应监测模式（MRM）检测,同位素内标法定量。结果表明,QCA和MQCA的质量浓度为2.0～100.0 ng/mL时,线性关系良好（R＞0.999）,回收率为91.4%～100.4%,精密度试验结果相对标准偏差（RSD）为6.3%～11.5%,定量限为0.2 μg/kg,检出限为0.05 μg/kg。该方法灵敏度及准确度良好,能满足6种常见鱼的组织中卡巴氧及喹乙醇代谢物残留分析的要求。     

Characterization of plasma membrane proton-ATPase from salt-tolerant yeast Zygosaccharomyces rouxii cells

Plasma membrane was isolated from the salt-tolerant yeast Zygosaccharomyces rouxii and from Saccharomyces cerevisiae. The ATPase in the plasma membrane of Z. rouxii cells was a typical proton-ATPase as judged by testing with various ATPase inhibitors. There were slight differences in the pH optima of activities and in the sensitivity to sodium chloride (NaCl) and potassium chloride (KCl) of the ATPase from Z. rouxii and S. cerevisiae. The specific ATPase activity from Z. rouxii was higher in cells grown in a medium containing 2 _M-NaCl than in those not containing NaCl. No in vivo activation by incubation with glucose was observed in Z. rouxii cells and the specific ATPase activity was independent of the growth phase, unlike S. cerevisiae cells.     

介质阻挡放电等离子体(DBDP)对橙汁杀菌及钝化酶的影响

杀菌技术作为食品加工的一项重要技术,在防止食品腐败,延长食品货架期等方面起非常重要的作用。与传统的热杀菌技术相比,冷杀菌技术能够最大限度地保持食品的质构、色泽、风味及营养成分等。本文利用自行设计的介质阻挡放电反应器(DBDR),以鲜榨果汁为杀菌介质,研究循环次数、温度及电压等因素对介质阻挡放电等离子体(DBDP)杀菌作用和钝酶作用的影响。试验结果表明,随着循环次数、橙汁温度及电压的升高,杀菌效果和酶的钝化作用逐渐增强。与金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌相比,大肠杆菌和沙门氏菌较易被杀灭。     

Kinetics of Peroxidase Inactivation in Carrot Juice Treated with Pulsed Electric Fields

Peroxidase activity accounts for quality losses in many plant‐based foods. The paper provides insight into the inactivation kinetics of peroxidase (POD) in carrot juice treated with pulsed electric fields (PEF). Juice samples were subjected to electric field intensities of 20 to 35 kV/cm for 300 to 2000 μs. Up to 93% of the initial activity was inactivated after treating at 35 kV/cm for 1500 μs. POD activity inactivation correlated well with the increase in energy density input. A first‐order fractional conversion model best fitted the experimental results. Other kinetic approaches such as the Fermi's model can be used to estimate residual POD activity values in treated juices as a function of electric field strength. Practical Application : Pulsed electric fields (PEF) are a processing technology that can be used for the pasteurization of liquid food products. Peroxidase activity inhibition is required in carrot juices to prevent undesirable quality losses, such as discoloration, flavor changes, and loss of nutrients. The most significant processing parameters ruling POD inactivation in PEF‐treated carrot juice are identified and mathematical modeling of experimental data is conducted.     

D-果糖对鲁氏酵母菌生理特性及转录组学的影响

为揭示D-果糖调控对鲁氏酵母菌代谢的影响,研究了鲁氏酵母菌响应D-果糖的生理特性和转录组学结果变化。结果表明,D-果糖的添加显著提升了鲁氏酵母菌细胞生长,降低了发酵液pH值。转录组数据分析表明:与对照组相比较,鲁氏酵母菌经D-果糖调控后,发酵3 d时酵母菌的差异基因为7 469个,5 d时为4 611个,7 d时为8611个。GO富集分析发现:D-果糖调控下的鲁氏酵母菌发酵3d时,其分子功能差异基因比对照组显著增加;发酵5 d时,细胞组分差异基因显著增多;发酵7 d时,生物过程差异基因显著增多。KEGG pathway结果表明,D-果糖调控下,果糖代谢及其他次生代谢和氨基酸代谢等多种与鲁氏酵母菌代谢密切相关的途径差异显著。LC-MS/MS分析表明:D-果糖调控后的鲁氏酵母菌在发酵进行到3 d时产生的酸类物质增多;发酵至5 d时,其酮类和酯类等主要香气物质高于对照组,呋喃酮含量是对照组的7.5倍;发酵至7 d时,代谢物之间差距减少。本研究旨在对糖调控下鲁氏酵母菌的生理特性变化及产香的分子机制提供理论依据。