不同蛋白酶对小麦蛋白酶解物抗氧化活性的影响

小麦蛋白是小麦淀粉加工的副产物,酶解是提高小麦蛋白溶解性和功能性的有效方式,而酶解用酶种类可能对酶解产物的功能性如抗氧化活性有一定影响。采用碱性蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶6种常用的蛋白酶分别对小麦蛋白进行酶解,并对酶解4 h后酶解物的多肽得率、分子质量分布、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基清除率、超氧阴离子自由基(O_2~-·)清除率、羟自由基(·OH)清除率等反映水解程度和抗氧化能力的主要指标进行评价。结果表明,风味蛋白酶酶解物中多肽得率最高,达91.44%,且分子质量小于3 000 D的多肽含量达76.9%;酶解物质量浓度为3 mg/m L时,木瓜蛋白酶酶解物对DPPH自由基清除作用最好,清除率为65.12%(P0.01),其次是风味蛋白酶(58.43%)和碱性蛋白酶(55.29%);碱性蛋白酶酶解物对O_2~-·清除率效果最好,清除率为58.68%(P0.01),其次是风味蛋白酶(49.25%);碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解物对·OH清除效果最佳,清除率分别为59.23%和58.16%。结果说明,蛋白酶种类对小麦蛋白酶解物抗氧化活性影响显著,风味蛋白酶对提高蛋白水解程度和生成小分子质量多肽的作用明显,而碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶对提高酶解产物抗氧化活性效果较好。     

不同蛋白酶对红鳍笛鲷鱼排酶解液风味影响

以红鳍笛鲷鱼排为原料,分别采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶和风味蛋白酶4种酶水解,通过氨基酸组成分析、感官评价及电子舌对酶解液的滋味进行评价。结果表明：风味蛋白酶酶解液的水解度及多肽含量最高,分别为29.14%、4.27 g/100 g;氨基酸组成分析表明风味蛋白酶酶解液的氨基酸总含量最高。感官评价结果表明,4种蛋白酶酶解液中风味蛋白酶酶解液风味较好,苦味不明显,总体呈味鲜美浓郁。电子舌测定结果表明,中性蛋白酶与风味蛋白酶的酶解液最接近鲜味参比溶液。因此最终确定风味蛋白酶是制备红鳍笛鲷鱼排呈味肽的最佳用酶。     

酶法水解卵黄蛋白制备多肽的工艺优化

利用酶法制备卵黄蛋白多肽。比较复合风味蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶水解卵黄蛋白的效果,确定碱性蛋白酶与复合风味蛋白酶为复合酶解的工艺用酶。采用响应面分析法,以水解度、多肽含量为响应值,研究加酶量、酶用量比、复合酶解时间比、pH值对制备多肽工艺的影响。结果表明：酶法水解卵黄蛋白制备多肽的最佳工艺条件为：卵黄蛋白质量浓度10g/100mL、温度55℃、pH7.2,按0.8g/100mL添加碱性蛋白酶水解2h后,再按0.4g/100mL添加复合风味蛋白酶水解2h,在该条件下水解度和多肽含量分别为(13.31±0.5)%和(1.85±0.5)mg/mL。     

南瓜籽多肽的制备及其对人体皮肤细胞的体外作用

以南瓜籽为原料制备南瓜籽蛋白。分别采用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、风味蛋白酶、碱性蛋白酶-胰蛋白酶、碱性蛋白酶-风味蛋白酶酶解南瓜籽蛋白得到南瓜籽多肽。结果表明:碱性蛋白酶-胰蛋白酶酶解南瓜籽蛋白,水解度为27. 23%、多肽产率为39. 20%,均为5种酶解产物中最高;碱性蛋白酶-胰蛋白酶酶解制备的南瓜籽多肽中小于1 000 Da的多肽含量高达92. 72%,其具有较好的促进人体皮肤细胞增殖的性能及清除自由基作用,可降低细胞内活性氧含量,在人体皮肤细胞受到氧化损伤时,能起到良好的修复作用。     

酶解与体外模拟胃肠消化对脱脂羊奶粉ACE抑制活性的影响

本研究旨在探究商业蛋白酶酶解与体外模拟胃肠消化对高消化率的脱脂羊奶粉释放ACE抑制肽的影响,以评价脱脂羊奶粉酶解必要性及所需酶解程度。采用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、复合蛋白酶和风味蛋白酶对脱脂后的圭山羊奶粉进行酶解反应,并对脱脂羊奶粉及其酶解物进行体外模拟胃肠消化,测定酶解液及模拟胃肠消化液的多肽含量、ACE抑制活性以及分子量分布。研究发现,羊奶粉经过体外模拟胃肠消化后,消化液的多肽含量与ACE抑制率分别达到20.81 mg/mL和62.55%;而经过碱性蛋白酶和风味蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性反而下降;经过复合蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液的多肽含量与ACE抑制活性小幅度提高,分别达到22.67 mg/mL和69.29%;经过中性蛋白酶的适度酶解,其模拟胃肠消化液多肽含量与ACE抑制活性均显著提高,分别达到23.76 mg/mL和81.10%。分子量分布结果显示,经过体外模拟胃肠消化后,<1000 Da的小分子肽由酶解液中的70.77%提高到90%。综上,圭山羊奶粉经过体内胃肠消化就可以释放出较多的ACE抑制肽,而经过中性蛋白酶酶解至水解度8%后...     

核桃雄花多肽酶解法制备工艺

为优化核桃雄花多肽酶解法制备工艺,该试验以响应面法对核桃雄花多肽制备工艺进行研究。对中性蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶、菠萝蛋白酶和风味蛋白酶进行酶种类筛选及复配,以多肽得率为指标,通过单因素试验及响应面法研究复合酶添加总量、酶解时间、酶解温度、液料比对核桃雄花多肽得率的影响。结果表明,影响核桃雄花蛋白的多肽得率的因素顺序依次为酶解温度>酶解时间>复合酶添加总量>液料比。核桃雄花的最优酶解工艺为液料比8∶1(mL/g)、复合酶添加总量51 500 U/g（木瓜蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶质量比为25∶6∶20）、酶解温度45℃、酶解时间3.0 h,实际多肽得率达到30.00%。     

草鱼内脏蛋白质的水解特性

以草鱼内脏为原料,脱脂离心制备蛋白质粗提液,用SDS-PAGE方法测定蛋白质分子质量,然后以制备的草鱼内脏蛋白质为底物,比较研究木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶和中性蛋白酶的水解特性。结果表明:草鱼内脏蛋白质分子质量分别约为32.4、13.2、2.8kD。6种酶解液中氨基酸含量在前6h随着时间的延长迅速增加,后趋于平稳;风味蛋白酶的氨态氮含量最高,碱性蛋白酶与中性蛋白酶之间差异不显著,其他各种蛋白酶两两之间差异都显著。而胰蛋白酶、胃蛋白酶、中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、风味蛋白酶多肽含量在酶解6h达到最大值,碱性蛋白酶在酶解9h时达到最大值,木瓜蛋白酶多肽含量最高,而风味蛋白酶的最低。随着酶解的不断进行,酶解液的呈味效果不断发生着变化,酶解液的呈味特性随着氨基酸和多肽的释放,鲜味逐渐明显,以感官评价为指标风味蛋白酶的鲜味最强,6种蛋白酶互相之间差异都显著。     

牡蛎复合酶解提高蚝油风味的工艺探讨

采用多种酶复配的方法对牡蛎进行酶解处理,以获得风味良好、且蛋白质回收率和水解程度都比较高的产品.研究结果表明采用含0.05%中性蛋白酶+0.1%碱性蛋白酶+0.1%风味蛋白酶+0.1%复合蛋白酶的复合酶,可以使蛋白质回收率达到85%、水解度达到43.5%,酶解后的游离氨基酸含量比酶解前提高122.2%,酶解液无腥味,且...     

羊骨多肽酶法制备工艺优化及抗氧化活性研究

以羊骨粉为原料,用碱性蛋白酶进行酶解制备具有抗氧化活性的酶解多肽液。以水解度为指标,优化了羊骨多肽酶法制备工艺条件,并对酶解液的抗氧化能力进行了测定。结果表明,碱性蛋白酶制备羊骨多肽的最佳制备工艺条件为酶解时间5 h,酶解温度45 ℃,加酶量8 200 U/g,酶解pH值10,该条件下羊骨粉的水解度为(28.36±0.02)%。羊骨粉酶解液与对照组(未被碱性蛋白酶酶解的羊骨粉溶液)的抗氧化能力均随着溶液浓度的增加而上升,当酶解液浓度达到2.5 mg/mL时对DPPH自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基清除率和还原力均达最大值,分别为(65.42±0.11)%,(82.30±0.27)%,(79.83±0.22)%,0.484±0.007,显著高于对照组(P＜0.05)。说明碱性蛋白酶水解羊骨粉得到的酶解多肽液具有体外抗氧化活性。     

双酶复合酶解制备花生短肽研究

该试验以水解度和蛋白质提取率作为评价指标,研究了碱性蛋白酶和风味蛋白酶双酶对花生蛋白酶解特性的影响。通过单因素和正交试验确定了双酶的最佳酶解条件为:酶解时间3 h、pH 9.0、温度55℃、酶比例(碱性蛋白酶:风味蛋白酶)为2∶3,总酶浓度5.0×103 U/g、底物浓度5%,花生蛋白的水解度(DH)达12.02%,蛋白提取率71.60%,多肽得率达59.58%。同时研究了双酶酶解过程中花生蛋白水解度、pH及蛋白提取率的变化规律。     

[鱼回]鱼骨胶原多肽的制备工艺研究

鱼骨中胶原蛋白含量丰富,本研究采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶对鲴鱼骨进行分步酶解制备骨胶原多肽。通过单因素和正交优化实验,确定碱性蛋白酶水解鲴鱼骨胶原蛋白的最佳工艺条件为：料液比（w／v）4：50,酶解温度45％,加酶量4％,pH值8,酶解时间3h,在此条件下,水解度达到39．49％。风味蛋白酶分步酶解的最佳工艺条件为酶解温度50％,加酶量4％,pH值7．5,酶解时间3h,在此条件下,水解度达到47．2％,水解产物的风味在一定程度上也得到了改善。     

酶解脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽

以实验室自制的脱脂蚕蛹蛋白为原料,利用酶工程技术,通过对中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶等的筛选及单因素和响应面优化试验,对ACE抑制肽的制备工艺条件进行较系统的研究。结果表明：选择碱性蛋白酶作为脱脂蚕蛹蛋白制备ACE抑制肽的酶,制备ACE抑制肽的最佳工艺条件为料液比11.88:100、温度50.22℃、pH 9.46、加酶量7.03%、酶解4h。在此条件下制备的ACE抑制肽的ACE抑制率达到41.98%。     

风味蛋白酶酶解制备中国对虾调味料风味前体物质工艺优化

以中国对虾下脚料为原料,在碱性蛋白酶酶解基础上利用风味蛋白对中国对虾下脚料进行二次酶解,制备中国对虾调味料风味前体物质——酶解液,并考察温度、初始pH、风味蛋白酶用量等单因素对水解度的影响,再通过响应面分析法优化风味蛋白酶酶解工艺。结果表明,最佳酶解工艺条件为:料水比1:9、风味蛋白酶用量2.2%、初始pH6.4、酶解温度59℃、酶解时间3 h。在此条件下,中国对虾下脚料水解度为54.79%。酶解液中氨基酸含量为33.6862 mg/mL,其中必需氨基酸(如:苏氨酸、赖氨酸、异亮氨酸、苯丙氨酸等)含量为27.2543 mg/mL。谷氨酸和赖氨酸的含量有明显提高,极大的增强了鲜味强度。采用分步酶解法制备的酶解液具有诱人、浓郁虾风味,可作为调味基料。     

酶法制备小黄鱼下脚料调味料的风味前体物质

以小黄鱼下脚料为原料,利用酶解技术获得小黄鱼下脚料风味前体物质,通过单因素及响应面分析,确定碱性蛋白酶(Alcalase)和风味蛋白酶(Flavourzyme)同步酶解工艺,研究料水比、酶解时间、酶用量、初始pH 值和酶解温度对酶解液水解度和感官品质的影响。结果表明,优化的酶解工艺条件为料水比1:7(g/mL)、酶解温度55℃、酶解时间6.5h、初始pH8.0、Alcalase 用量2.5%、Flavourzyme 用量3.0%。在此酶解条件下的水解度为40.11%,所得酶解液中氨基酸含量86.383g/100g,其中必需氨基酸32.785g/100g,鲜味和甘味氨基酸38.384g/100g,与酶解前相比氨基酸含量明显增加,氨基酸总量增加了67.56%,其中必需氨基酸增加了82.02%,呈味氨基酸增加了79.52%,产品具有浓郁的小黄鱼鱼香味。     

紫苏高F值低聚肽的制备研究

以紫苏粕为原料通过酶法水解制备紫苏高F值低聚肽,探讨Alcalase蛋白酶对紫苏粕中蛋白质水解的进程曲线。结果显示其最适条件为底物质量浓度5%(g/100ml)、pH8.5、温度60℃、酶添加浓度5ml/100g底物、时间240min,此水解液进一步用木瓜蛋白酶水解,水解条件为pH7.0、温度55℃、加酶量1%、时间4h,然后用活性炭吸附去除低聚肽中的芳香族氨基酸,吸附条件为pH4.0、温度40℃、活性炭用量7%(m/V)、时间3h,最后得到F值可达79.25的紫苏低聚肽。     

4 种蛋白酶水解双孢蘑菇效果比较及风味蛋白酶水解工艺优化

采用生物酶解技术对双孢蘑菇进行酶解,从而充分利用并提取其中的滋味物质,对比4?种蛋白酶（中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、复合蛋白酶及风味蛋白酶）对双孢蘑菇的酶解效果,结果表明,风味蛋白酶酶解后水解液可溶性固形物、呈味氨基酸含量显著高于其他处理组,可以显著除去水解液的苦味、涩味,保持其鲜味,并显著提高其咸味和滋味的丰富性,水解液清透明亮。因此选择风味蛋白酶对双孢蘑菇进行酶解处理,并以水解液游离氨基酸浓度为指标,对酶解时间、酶解温度、pH值和加酶量4?个因素进行单因素试验以及L9（34）正交试验,结果表明酶解温度对风味蛋白酶酶解效果的影响达到极显著水平,pH值对风味蛋白酶的酶解效果达到显著水平,风味蛋白酶最佳酶解工艺为pH?6.5、酶解温度60?℃、加酶量1?000?U/g、酶解时间3?h,该工艺条件下所得到的水解液（游离氨基酸浓度140.27?mmol/L）可以作为双孢蘑菇调味品加工基料。     

双酶法制备马鹿茸降血糖肽工艺优化及其对α-葡萄糖苷酶的抑制效果

为探索制备马鹿茸降血糖肽的最佳工艺条件,以α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,从碱性蛋白酶、风味蛋白酶、中性蛋白酶和胰蛋白酶中筛选出两种酶,根据其体外降血糖效果确定酶的作用顺序,再以水解度、α-葡萄糖苷酶抑制率和蛋白质回收率为指标进行单因素试验和正交试验,优化降血糖肽制备工艺条件。结果表明:碱性蛋白酶和风味蛋白酶比中性蛋白酶和胰蛋白酶更适合用于制备马鹿茸降血糖肽。采用碱性蛋白酶-风味蛋白酶顺序对马鹿茸进行水解,所得酶解产物的α-葡萄糖苷酶抑制率、蛋白质回收率和水解度较高,分别为21.11%、39.12%、19.88%。通过单因素试验和正交试验确定双酶酶解最佳工艺条件为先用碱性蛋白酶在p H 8.0、60℃、底物质量分数12%、加酶量5 000 U/g条件下酶解3 h,再用风味蛋白酶于p H 6.5、45℃、底物质量分数5%、加酶量6 000 U/g条件下酶解1 h。双酶分步水解终产物的α-葡萄糖苷酶抑制率受质量浓度的影响,当质量浓度为3 mg/m L时,α-葡萄糖苷酶抑制率可达94.09%,IC50值为1.82 mg/m L。碱性蛋白酶-风味蛋白酶双酶分步水解马鹿茸可获得高α-葡萄糖苷酶抑制率的降血糖肽。     

响应面法优化酶解藜麦糠蛋白制备抗氧化肽工艺

以藜麦糠蛋白为研究对象,酶法制备藜麦糠抗氧化肽,进行酶解蛋白酶的筛选,确定最佳复合酶组合。根据单因素试验结果,利用响应面法分析各因素及交互作用对响应值（还原能力）的影响,得到藜麦糠蛋白最优酶解工艺为加酶量3?600?U/g、pH?7.66、酶解时间2.13?h、酶解温度50.53?℃,在此酶解条件下,抗氧化肽得率为76.25%,制得的藜麦糠抗氧化肽有很强的还原能力。该条件下藜麦糠抗氧化肽还原能力预测值为0.636?5,验证实验所得实测平均值为0.644,实测结果与预测值符合良好。同时藜麦糠抗氧化肽对超氧阴离子自由基和羟自由基均有良好的清除能力,且呈现较好的量效关系,在天然抗氧化剂和保健食品领域有一定的开发利用价值。     

低苦味花生多肽的制备

以花生分离蛋白为原料,研究复合酶协同酶解法制备低苦味花生多肽的最佳条件,并分析其体外抗氧化活性。根据单因素实验的结果,筛选出低苦味花生多肽的最佳水解条件,并通过测定清除DPPH、ABTS+自由基的能力来评价其抗氧化活性。结果表明,复合蛋白酶协同酶解花生分离蛋白的最佳反应条件为:使用碱性蛋白酶(pH8.5,温度55℃,时间4 h)、蛋白酶P(pH7.0,温度50℃,时间3 h)和风味酶(pH7.0,温度50℃,时间2 h)依次分步酶解花生分离蛋白,三种酶添加量分别为0.8%、0.4%和0.2%。此工艺下,酶解液苦味值为1.3,多肽得率为86.75%,相对分子质量低于1 kDa的多肽含量达85.93%。酶解液质量浓度为4 mg/mL时,对DPPH自由基和ABTS+自由基清除率分别为80.70%和87.92%,表明花生粗多肽抗氧化活性较好。