拳参愈伤组织的诱导及增殖效应的研究

目的研究适宜拳参愈伤细胞的诱导、组织分化及快速生长的培养基成分。方法以拳参的幼嫩叶柄为外植体,接种于附加2,4-D、N A A、6-B A、K T及其组合的M S培养基上,观察拳参愈伤组织的诱导、分化及愈伤细胞的生长状态。结果MS 0.4 mg/L 6-BA 2.0 mg/L NAA对拳参愈伤组织的诱导效果最好。MS 0.2 mg/L 6-BA 2.0 mg/L 2,4-D增殖培养的愈伤组织较适合于器官的分化,MS 0.2 mg/L 6-BA 4.0 mg/L NAA增殖培养的愈伤组织较适合于做细胞悬浮培养的材料。结论建立拳参愈伤组织诱导,愈伤组织分化和愈伤细胞快速增殖体系,为进一步研究药用植物拳参细胞的分子机制及次生代谢等提供资料。     

激素对烟草愈伤组织分化影响的研究

以烟草(Nicotiana tabacum)愈伤组织为材料,研究了不同激素配比及浓度对愈伤组织绿苗分化率、绿苗产量/玻璃苗产量(G/V)等分化指标的影响。试验结果表明:在 MS+IAA0.2mg/L+KT1mg/L 培养基上,可获得较高的绿苗分化率;在含IAA0.5mg/L+6-BA2mg/L 的 MS 培养基上,可获得较高的 G/V 值;当愈伤组织先在附加 IAA 和 KT 的培养基上培养20天,再转至附加 IAA+6-BA 的培养基上培养时,则既可得到较高的绿苗分化率,又可提高 G/V 值。     

甘蔗原生质体分化成根

用 MS 培养基,从甘蔗嫩叶或幼穗诱导愈伤组织,将愈伤组织放置 MS 液体培养基中悬浮培养,每3—5d 继代一次。MS 培养基附加2,4—D3mg/L,水解乳蛋白500mg/L,盐酸硫胺素1mg/L 以及椰子水5%。经4至5个月培养的悬浮培养物所分离的原生质体具有很强繁殖能力。原生质体植板于 K8P 琼脂糖培养基,持续细胞分裂和生长。原生质体衍生的无性系移到 MS 琼脂培养基,形成愈伤组织。9个糖蔗品种的原生质体形成这种愈伤组织,其中一个品种的愈伤组织在不含任何植物生长调节剂的 MS 培养基中分化出根来。     

苯乙酸对烟草单倍体植株叶脉组织培养一步成苗的效应研究

本研究探明了苯乙酸(PAA)对烟草单倍体植株叶脉切段培养一步成苗的效应,发现PAA与NAA、6-BA配合使用能有效促进一步成苗的发生。试验证明PAA对一步成苗的促进效应与各种激素浓度配比和基本培养基的种类有关,与基因型的关系不明显。烟草单倍体植株叶脉切段培养一步成苗的最佳培养基配方为MS+PAA 20 mg/L+NAA 0.5 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+谷氨酰胺50 mg/L+麦芽糖30 g/L。试验还证明,与2,4-D诱导产生愈伤组织途径的多级成苗培养相比,本研究建立的PAA一步成苗培养具有以下优点:1)显著提高愈伤组织的诱导率;2)显著提高愈伤组织的质量,有效提高愈伤组织分化率;3)成苗率显著高于多级成苗;4)再生植株具有更好的幼苗素质;5)再生植株的染色体数目变异率也显著低于多级成苗;6)获得双单倍体植株的频率显著高于多级成苗;7)能有效缩短培养周期、节约成本。      

甘蔗组织培养研究初报

我所于1978年用甘蔗梢部嫩叶诱导出愈伤组织小蔗苗。1979年在诱导愈伤组织的基础上,选出了胚性细胞团继代培养,经绿苗移植和田间试验观察,发现了很多变异类型。根据作物遗传变异性的特点,初步选出了粗茎、高锤度变异蔗株,为选育适合本地区优良品种提供了材料。     

甘蔗原生质体培养—快速再生植株

用ＭＳＣａ培养基从甘蔗ＰＣ９１０２嫩叶诱导愈伤组织。接种３０－４０天后，将愈伤组织转入ＡＡ液体培养基，进行悬浮培养，经过５０－８０天，建立起典型胚性细胞悬浮培养物，分离到原生质体，原生质体用ＭＲＰ２－ＭＲＰ２琼脂糖培养基培养，１６－２０天后给予光照，２５－３０天后转入Ｎｅ分化培养基，４５天左右可见绿芽分化。重复试验表明，从外植体诱导愈伤组织开始推行清洁 建立悬浮细胞系，分离原生质体到培养再生寒带小     

不同基因型甘蔗愈伤组织培养研究

以果蔗拔地拉、广东黄皮果蔗及糖蔗闽糖92-649,ROC16,ROC25为试验材料,研究不同预处理、蔗糖浓度及不同激素水平对甘蔗愈伤组织的诱导、分化的影响。结果表明以PVP水溶液浸泡外植体,可使平均褐化率由43．1％减低到22．4％,愈伤组织诱导率由61．04％提高到71．25％;添加50g／L的蔗糖浓度可促进愈伤组织的诱导及分化。     

激素对甜菜愈伤组织不定芽再生的调节作用

2，4－D能促进胚珠愈伤组织形成，但对不定芽再生有抑制作用，而IAA无此抑制作用。6BA和KT单独或组合使用在胚珠分化芽的愈伤组织诱导上，是不可缺少的。胚珠意伤组织不定芽可在附加IAA与KT（或再附加6BA）的诱导培养基上一步形成。0．5mg／L的6BA与NAA或IAA在一定浓度下的组合能诱导叶柄产生愈伤组织，分化培养后获得了再生芽。无论胚珠或叶柄，愈伤组织不定芽的再生，主要与前期诱导培营基的激素组合与浓度有关。     

烟草抗野火病细胞突变体筛选

烤烟品种红花大金元叶片组织悬浮培养细胞经过４～５代继代培养后，铺平板于含野火病粗毒的ＭＳ＋２，４－Ｄ２．０ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ０．１ｍｇ／Ｌ（简称ＭＳＩ）培养基上进行筛选或置于含野火病粗毒的ＭＳＩ液体培养基上进行浅层筛选培养。存活愈伤组织转移至相同培养基进一步筛选，经两次筛选得到的愈伤组织在ＭＳ＋２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ２．０ｍｇ／Ｌ培养基上诱导分化形成植株，通过上述方法筛选得到的抗性愈伤组织细胞比未经筛选进行继代培养的愈伤组织细胞对野火病粗毒表现出较强的抵抗力；对筛选得到的愈伤组织再生植株及其后代进行人工接种，从中筛选出一些抗病株系，研究结果表明，利用体细胞无性系变异，采用细胞离休筛选技术，可以获得抗野火病的烟草新材料。     

烟草愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养体系的建立

以鄂烟1号无菌苗的叶为材料进行愈伤组织的诱导,筛选出生长培养基的最佳激素配比,初步建立了烟草细胞悬浮培养体系。结果表明,愈伤组织诱导的最优基本培养基为MS培养基,以MS NAA1.0mg/L 6-BA0.5mg/L为最佳配方;愈伤组织最佳生长培养基为MS 2,4-D0.1mg/L NAA1.5mg/L 6-BA0.3mg/L,愈伤组织培养第6天进入对数生长期,第14天干重增至最初干重的12.536倍,并以此配方建立了烟草细胞悬浮培养体系。     

小麦成熟胚愈伤组织诱导及分化

该实验对5种不同小麦品种的成熟胚愈伤组织诱导和分化进行了研究,结果表明:在MS+2,4-D2.0mg/L培养基上,愈伤组织诱导率平均为96.6%;不同品种间诱导率差异不是很大,愈伤组织的质量与诱导率的高低无关;在MS+2,4-D0.5mg/L+1.5mg/L KT培养基上,分化率可达69.6%。     

烟草愈伤组织辐射诱变抗苯丙氨酸突变体筛选

以K326为材料,研究了L-苯丙氨酸的筛选浓度,γ射线剂量和愈伤组织活化时间对抗苯丙氨酸突变体筛选效果的影响。结果表明:L-苯丙氨酸浓度越高,愈伤组织培养过程中褐变比例越高,细胞活性越低;γ射线剂量和愈伤组织活化时间均对愈伤组织的致死率有较大的影响。综合分析后,采用活化1周的愈伤组织,40Gy的γ射线辐射,以附加3.00mmol/LL-苯丙氨酸的MS培养基为筛选培养基,经多次"筛选—回复"培养,筛选出了苯丙氨酸解氨酶含量显著提高的抗苯丙氨酸细胞系,并诱导分化出再生苗。烟草愈伤组织辐射诱变抗苯丙氨酸突变体筛选体系的建立,为高苯丙氨酸含量烟草材料的培育奠定基础。     

尾穗苋种子萌发及愈伤组织的诱导研究

以尾穗苋为实验材料,对种子萌发形成无菌苗的影响因素进行了优化,并探讨了不同激素配比对尾穗苋无菌苗下胚轴和子叶愈伤组织诱导的影响.结果表明,采用0.01%升汞消毒l min,l/2MS(所有元素均减半)培养基及暗培养1 d,第7 d的种子萌发率高达82.7%;以MS+6-BA0.5mg/L+2,4-D 0.5mg/L的培养基诱导尾穗苋子叶和下胚轴形成愈伤组织效果较好,均达到100%.     

甘蔗新品种桂糖48号的组织培养技术研究

甘蔗组织培养技术是加速繁殖新品种和加快新品种大面积推广的主要手段,不同品种的离体培养中其培养基中激素配比存在差异,因此筛选合适培养基是提高品种快繁效率的关键。本文以桂糖48号为材料,以MS基本培养基加外源激素浓度梯度进行试验处理设计,对品种的愈伤组织诱导、愈伤分化、试管苗增殖和生根阶段进行培养基筛选试验,以其筛选出最合适桂糖48号的培养基配方。试验结果表明:诱导愈伤组织培养基为MS+2,4-D 3.0 mg/L;愈伤组织分化培养基为MS+BA 1.0 mg/L;初代增殖培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+GA 0.5 g/L;继代培养基为MS+BA 2.0 mg/L+NAA 0.1mg/L;生根培养基为1/2 MS+NAA 12 mg/L。在该培养基下,生根最好,苗绿,比较高,长势好,对加快甘蔗新品种桂糖48号在广西大面积推广起到积极的作用。     

南果梨愈伤组织及花青素诱导的初步研究

通过对南果梨愈伤组织的诱导,选择形成花青素最佳的愈伤组织相关因素,为后期研究南果梨的花青素代谢调控打下基础.通过正交试验,观察花色素形成,寻找最佳外植体试材及其培养基,并且确定愈伤组织生物量周期,以及促进花色素形成的决定因素.结果表明:最佳外植体为子房,其愈伤组织诱导的最佳培养基为MS 0.5 mg/L 6-BA 0.5 mg/L IAA 1.0 mg/L 2,4-D; 愈伤组织生物量周期为33 d,第30天时细胞生物量达到最大值,为初始生物量的6 32倍.花青素的含量也随着愈伤组织生物量的增加而积累.葡萄糖是最佳碳源.利用外植体试材在最适培养基上培养30 d,可得到最大量愈伤组织及花青素.     

杜仲疏松愈伤组织诱导条件的优化筛选

杜仲愈伤组织生长过于致密从而导致难以实现悬浮培养,因此获得疏松、生长快速愈伤组织是实现杜仲细胞悬浮培养的前提.本文研究了不同外植体、激素和培养基对杜仲愈伤组织诱导率、疏松程度以及褐化率的影响,结果表明：上胚轴和子叶更容易被诱导为疏松愈伤组织,MS培养基是最适诱导培养基;适当增加6-BA浓度有助于褐化的减轻且提高愈伤组织疏松程度,杜仲疏松愈伤组织诱导最适激素配比为1.0mg/L 2,4-D＋1.0mg/L NAA＋1.0mg/L 6-BA.     

蒲公英愈伤组织诱导条件的研究

以蒲公英幼嫩叶片为外植体,以MS为基本培养基,通过添加不同配比的6-BA、NAA、2,4-D植物激素,探讨外植体愈伤组织的诱导。研究结果表明:叶片在含0.2mg/LNAA和2mg/L6-BA的MS培养基中培养20天后形成明显的愈伤组织,诱导率达到86.6%,且绝大多数愈伤组织状态、长势良好,呈比较湿润的嫩黄色颗粒状。     

不同培养条件对银杏愈伤组织生长及黄酮含量的影响

以胚为外植体,通过固体培养,研究了培养基,激素和光照对银杏愈伤组织诱导的影响,以及继代培养中激1素和活性炭对愈伤组织生长和产黄酮的影响,结果表明:愈伤组织的诱导的最佳条件为DCR培养基+1.0mg/L2,4-D+0.5mg/LBA+完全暗条件培养。继代培养过程中既能促进愈伤组织生长又使黄酮含量最高的处理为0.3mg/LBA+2.0mg/L2,4-D,活性炭抑制愈伤组织生长但能促进黄酮的积累。     

从甘蔗愈伤组织分化出植株

采用一种基本的无机物培养基补充出以10％的椰子水和2,4—D,从甘蔗(种间杂种)茎、叶和花穗的薄壁组织诱导出愈伤组织,把愈伤组织转移到没有2,4—D的基本培养基以促进植株分化,所研究过的全部植株,都发现其形态与亲系有变异。     

紫苏细胞悬浮培养生产迷迭香酸条件研究

通过诱导紫苏下胚轴和子叶外植体产生愈伤组织,建立细胞悬浮培养体系,以提高细胞产量及细胞中迷迭香酸含量。结果表明,在MS液体培养上添加3.0mg/L 6-芐氨基嘌呤(6-BA)＋0.3mg/L萘乙酸(NAA)培养基上,下胚轴愈伤组织呈嫩黄色松散状态,出愈时间短,出愈率可达100%。紫苏细胞悬浮培养产生迷迭香酸的最佳条件为培养时间7d、接种量鲜质量浓度20g/L、摇床转速110r/min、蔗糖30g/L、L-苯丙氨酸0.15g/L,此条件下可获得高达2.283mg/g的迷迭香酸。