产纤溶酶的米曲霉筛选及测定方法的研究

利用平板透明圈法作为初筛方法，从不同的酿造曲样中筛选出1株产纤溶酶酶活较高的米曲霉菌株SA-6，其产纤溶酶酶活为25U／mL。通过比较发现，可以用自制纤维蛋白代替纤维蛋白原和尿激酶测定发酵液的纤溶酶酶活，在大通量的菌株筛选过程中可以节省大量费用。     

豆豉纤溶酶产生菌的筛选及诱变

从豆豉中筛选出一株产纤溶酶活力为295.34 U/mL的菌株DXR25,经鉴定为芽孢杆菌属,DXR25经过紫外线、60Co、硫酸二乙酯(DES)、亚硝基胍(NTG)诱变,筛选得到突变株DXR7,其产酶活力为55.42.是出发菌株的2.2倍,最后对DXR7进行了10代的培养,结果表明,该突变株具有稳定的遗传性能.     

产豆豉纤溶酶高产菌株的筛选及诱变育种

从豆豉中筛选出1株产纤溶酶的菌株DC33,鉴定为芽孢杆菌属,经过紫外线、^60Co、硫酸二乙酯（DES）、亚硝基呱（NTG）诱变筛选得到突变株DCDU7,其产酶活力为644．77U／mL,是出发菌株的2．4倍。对DCDU7菌株进行了10代的培养,结果表明该突变株具有稳定的遗传性能。     

1株纤溶酶菌株的筛选鉴定及提高产酶量的方法研究

从齐齐哈尔市拜泉县的自酿农家豆酱制品中分离筛选出1株产纤溶酶菌株HDBF-DJ3,对其进行菌体、菌落、生理生化特征分析,并结合16S rDNA序列分析结果,鉴定其为枯草芽孢杆菌.经亚硝基胍诱变筛选得到突变株HDBF-DJ3N7,其纤溶酶活力为368.78 IU/mL,是出发菌株的2.1倍.对菌株HDBF-DJ3N7进行连续10代的培养,结果表明该突变株的高产纤溶酶特性能够稳定遗传.该菌株有望应用到生产领域.     

亚硝基胍、紫外诱变筛选高产纤溶酶菌株

以产纤溶酶的根霉Y为出发菌株，通过亚硝基胍、紫外复合诱变，采用血纤维蛋白平板法测量发酵上清液的纤溶活性，得到一株高产突变株C6。其产酶活性是出发菌株的4．73倍，经过传代培养，该菌株的高产纤溶酶的特性能够稳定遗传。     

UV-ARTP复合诱变选育高产纤维素酶菌株

该研究以拟康氏木霉（Trichoderma pseudokoningii）TP-89为出发菌株，利用紫外（UV）和常压室温等离子体（ARTP）复合诱变方法对其进行诱变，并对其遗传稳定进行测定，以期筛选高产纤维素酶且稳定遗传的突变菌株。结果表明，出发菌株TP-89通过UV诱变100 s,ARTP诱变120 s后，筛选出一株纤维素酶产量高且稳定遗传的正突变菌株UA-67，其在产酶培养基上培养4 d时，滤纸酶活为2.59 U/mL、内切酶活为4.26 U/mL、外切酶活为7.79 U/mL，较出发菌株TP-89分别提高85.0%、125.4%和70.1%。     

抗性筛选纤溶激酶菌株

以枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为出发菌株经紫外线诱变处理，采用抗性筛选法，立接在梯度平根上挑取抗药性菌株进行初筛，然后经旋转式摇床300r／min、37℃发酵3d天，测定纤溶激酶产酶活力，再复筛，获得一株生产性能比出发菌株显著提高的突变株SS72，纤溶激酶酶活最高达到87lu／ml。     

产β-葡聚糖酶淀粉液化芽孢杆菌的选育

通过对一株淀粉液化芽孢杆菌进行紫外和^60Co逐级诱变，使该菌株产β-葡聚糖酶酶活从80U／mL提高到105U／mL；对突变株进行多次单菌落分离及传代，对其传代稳定性的研究表明：该菌株产酶性能稳定；在5L发酵罐中突变株的产酶水平比摇瓶要高，可达120U／mL，产酶周期比摇瓶缩短了15h．     

1株产耐热脂肪酶根霉突变株的选育

采用紫外线、硫酸二乙酯、紫外线和硫酸二乙酯复合对实验室保藏的1株高产耐热脂肪酶的根霉SFE-L01菌株进行诱变处理,筛选获得1株突变株UD-23,产耐热脂肪酶活力比出发菌株提高了112.39%,达24 000.00 U/mL。对突变株UD-23的产酶条件及部分酶学性质进行了研究,结果表明,突变株UD-23所产脂肪酶最适作用温度为60℃,且具有良好的热稳定性。条件优化后,该突变株产酶酶活达30 000.00 U/mL,比优化前提高了25%。     

产纤溶酶菌株根霉12~#的诱变育种及固态发酵培养基的优化

以产纤溶酶的菌株根霉 12 # 为出发菌株 ,对其进行紫外线 氯化锂复合诱变 ,筛选到74株制霉素抗性突变株。所有抗性突变株经进一步固态发酵筛选 ,获得了 4株稳定高产纤溶酶的正突变株 ,其纤溶酶产量分别比出发菌株提高 3 2 9%、2 1 5 %、2 2 3 %和 18 0 %。以其中的 1株为菌种 ,研究了固态发酵产生纤溶酶的培养基组成。采用单因素试验、均匀设计方法对固态发酵培养基的碳源、氮源、碳氮比、初始pH、加水量、无机盐加量进行了优化。结果表明 ,实验范围内根霉 12 # 固态发酵产生纤溶酶的适宜培养基组成为 :m (麸皮 )∶m (豆粕 )=1∶2 ,初始 pH5 0 ,加水量 0 75mL/g物料 ,MnSO4·H2 O和 (NH4) 2 SO4加量分别为 0 2 5 %和1 42 % (对物料 )。优化条件下的固态发酵纤溶酶产量平均达 744 5 7U/g物料。     

红河传统发酵豆豉中高纤溶活性菌株的分离筛选及其纤溶酶基因分析

运用脱脂乳固体培养基及纤维蛋白固体培养基的两步分离筛选法,从云南红河传统发酵豆豉中分离筛选具有高产豆豉纤溶酶活性的菌株,同时对它们的豆豉纤溶酶基因进行克隆分析,以期为新型功能性豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。研究结果表明,两步分离筛选法能有效地从云南红河传统发酵豆豉中筛选到高产豆豉纤溶酶的菌株Bacillus subtilis LC-2-1,对该高产菌株的豆豉纤溶酶成熟肽基因分析及预测结果表明,菌株B subtilis LC-2-1确实能分泌一种由825个碱基编码275个氨基酸残基且分子量约为27.4kDa的豆豉纤溶酶,与纳豆激酶及其他豆豉纤溶酶相比差异显著,同源性仅为85.1%。同时其豆豉纤溶酶活性分析结果则表明,菌株B subtilis LC-2-1所产纤溶酶活性较高,可达79.84 U/mL。因此,本研究结果将为新型且具有溶血栓功能发酵豆豉的研发提供备选菌株及理论依据。     

产纤溶酶菌株L21的鉴定与发酵条件研究

利用纤维蛋白平板法从海参体内肠道中筛选到一株产纤溶酶活力较高的菌株L21,通过16S rDNA序列测定比对分析,初步鉴定菌株L21为交替假单胞菌（Pseudoalteromonas sp.）。采用单因素试验、Plackett-Burman试验及响应面法对菌株L21的发酵条件进行优化,结果表明,菌株L21最佳发酵工艺条件为NaCl 1 g/L,CaCl2 1.03 g/L,MgSO4 0.8 g/L,初始pH 7.40。在此工艺条件下,菌株L21纤溶酶活力达到399.86 U/mL,较优化前（86.09 U/mL）提高了4.64倍。体外溶血实验结果表明该菌株具有作为安全性溶栓剂的潜力。     

产酱香细菌中高活性纤溶酶菌株的筛选

以酱香型酒生产所使用的高温大曲、酒糟、窖泥为样品,经分离筛选获得24 株产酱香结果优良的细菌及16 株产酱香结果较好的细菌。对产酱香细菌进行纤溶酶活性筛选,得到一株高产纤溶酶菌株GZJSⅠ-2,经初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),测得其发酵液酶活力(相当尿激酶酶活力单位)为1479.11U/mL,酶比活力为21751.62U/mg。以pH7.4 的生理盐水作阴性对照,以尿激酶作阳性对照,在体外研究菌株GZJSⅠ-2 发酵液上清液的抗凝集和血栓溶解作用,结果表明该菌株发酵上清液具有显著的体外血栓溶解作用,及一定的抗凝血效果,具有潜在的应用价值。     

海洋源纤溶酶高产菌株的诱变育种及液体培养基优化

为获得纤溶酶高产菌株及其最优发酵条件,以海洋环境来源的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）H-A-03为出发菌株,经过60Co辐射诱变获得了一株遗传稳定性好的纤溶酶高产菌株F8-C,其酶活力较出发菌株提高28.78%。采用统计学优化方法获得了组分更简单、用量更少、更利于菌株产酶的培养基：可溶性淀粉41.6 g/L、黄豆粕粉26.2 g/L、CaCl2 1.0 g/L,KH2PO4 2.0 g/L。在此基础上,3 L摇瓶放大试验结果显示,菌株F8-C的产酶量达到（3 231±21） U/mL,较出发菌株H-A-3提高44.8%。结果表明利用60Co辐射诱变育种,并采用统计学方法优化培养基,对于提高枯草芽孢杆菌纤溶酶的产酶量是一种有效策略。该研究结果也将为下一步发酵罐扩大试验奠定基础。     

产纤溶酶乳酸菌筛选及安全性评估

以从传统发酵食品中分离出的2株产纤溶酶的粪肠球菌HYD09与HYN06为对象,测定其发酵上清液酶活,对菌株进行安全性评估。选较安全的菌株进行胃肠道生存能力测试;同时对发酵上清液进行蛋白酶处理试验;从发酵液中获得粗酶液,进行活性电泳。结果表明:HYD09和HYN06发酵上清液酶活分别为115.3 U/mL和107.2 U/mL;HYD09和HYN06吲哚试验、硝酸盐还原酶试验、氨基脱羧酶试验、溶血试验均为阴性,对14种抗生素无多重耐药性;HYD09无毒力基因检出,HYN06检出esp毒力基因。证明HYD09菌株是安全的。进一步研究发现,菌株HYD09有一定的耐酸耐胆盐能力;HYD09发酵上清液经胃蛋白酶和胰蛋白酶处理仍具有纤溶活性;且菌株HYD09发酵上清液的粗酶中有2种主要的组分,但具有纤溶活性的组分只有1种。     

重离子诱变对木聚糖酶产生菌产酶的影响

以1株由青藏高原牦牛粪中分离出的链霉菌为出发菌株,该菌株在发酵培养基中能产生胞外木聚糖酶(3 227.346 U/mL)。以此菌株为出发菌株,对其进行重离子辐照诱变处理,从大量突变株中筛选出木聚糖酶高产菌株SZ10-7,其酶活力达到5 338.42 U/mL,与出发菌株相比较,突变株SZ10-7的酶活力提高了1.65倍。对突变株SZ10-7的发酵条件进行了优化研究,结果表明,该菌株的木聚糖酶活力得到进一步提高,达到5 850.20U/mL,其最适发酵条件为:培养基(g/100 mL)为玉米芯∶麸皮(体积比1∶1)5,酵母膏0.8,K2 HPO4.3H2 O 0.1,MgSO4.7H20 0.5,NaCl 0.3,pH 7.0,培养温度25℃振荡培养时间96 h,实验结果表明,重离子辐照诱变技术是一种有效的微生物诱变育种新技术。