表面复合修饰磁性颗粒固定化脂肪酶效能研究

以表面复合修饰的纳米超顺磁性Fe_3O_4颗粒聚集体为载体固定胰脂肪酶,比较分析固定化脂肪酶的固载效能及酶学特性,研究了固定化及游离脂肪酶的最适温度和pH值、不同环境下的操作稳定性等应用特性及基本动力学特征。结果表明:在室温下脂肪酶质量浓度为4.01 mg/mL时具有最大的固载酶量0.72 mg/10 mg,固定化脂肪酶最适作用pH为6,最适温度35℃,与游离脂肪酶相比,对酸性环境pH的变化更敏感,但具有更广泛的温度耐受性。固定化脂肪酶催化水解Lineweaver-Burk曲线线性相关,米氏常数K_m值为9.65 g/mL,远高于游离脂肪酶,亲和性弱于游离脂肪酶。固定化脂肪酶重复催化反应7次,相对酶活力仍剩余51.6%,半衰期为6.2次,重复操作较稳定。     

具脂肪酶和酯酶活性酵母菌的选育及酶学研究

从青岛市区含油土壤中筛选得到一株酵母S9菌株，它可以同时产生较高酶活的脂肪酶和酯酶．对影响S9产脂肪酶和酯酶的各种因素进行了研究，1％的可溶性淀粉为最佳碳源，最适的初始培养pH和温度分别为pH 6．5和28℃，对S9脂肪酶和酯酶的各种酶学性质进行的研究表明，脂肪酶和酯酶的最适作用温度都为30℃，最适作用pH分别为7．0和8．0，两者都属于常温酶，在30～40℃范围内比较稳定，脂肪酶在中性偏碱的pH环境中比较稳定，酯酶属于碱性酶，在pH 7．5～10．5范围内相当稳定。     

固定化地衣芽孢杆菌胞外脂肪酶的制备

脂肪酶是一类重要的水解酶,广泛应用于食品、医药、化工等领域。脂肪酶通过固定化可以提高酶的使用效率。文章采用戊二醛共价连接法将来源于地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)的胞外脂肪酶固定于氨基型载体ZH-HA之上,将1g载体置入10mL酶液中反应3h后固定化酶活力达到最高为60U/g湿载体。经固定化后该酶的温度稳定性得到显著提升,当反应温度为45℃时最高酶活力达到220U/g湿载体。同时,固定化使酶在碱性条件下的稳定性得到提高,最适反应pH值为10。通过自制柱式反应器考察该酶工作稳定性,经过15批连续水解反应,固定化脂肪酶仍保持90%的活力,展现出良好的稳定性。     

214型离子交换树脂固定化假丝酵母脂肪酶的研究

以假丝酵母脂肪酶(Candida rugosa lipase)催化脂肪酸甲酯化是植物油精制副产物中提取天然维生素E的重要预处理反应.为提高预处理效果,通过固定化假丝酵母脂肪酶提高其酯化能力,降低水解反应的能力.笔者在不同性能树脂筛选的基础上,开展了离子交换树脂214型固定化假丝酵母脂肪酶的研究.以酶固定化率为指标,开展了酶质量浓度、树脂的量、缓冲液pH、固定化温度、时间和振荡速率等条件试验和响应面试验,得到的最适固定化条件为酶质量浓度6.09mg/mL,5mL酶液中加入0.75g树脂,缓冲液pH 8.4,振荡转速134.26r/min,固定化温度30℃,固定化时间4h.该条件下,假丝酵母脂肪酶与树脂的结合率最高,酶的水解作用基本消失,酯化能力得到保持,可以获得较好的维生素E提纯预处理效果.     

海藻酸钠固定化胰蛋白酶的研究

研究了以海藻酸钠为载体固定化胰蛋白酶的条件,并考察了固定化酶的最适pH、最适温度、储存时间及反复利用稳定性。结果表明:最适固定化条件为CaC12质量分数为3.0%,海藻酸钠质量分数为3.0%,酶液量与海藻酸钠体积比为1∶2,固定化时间为3.0 h;固定化胰蛋白酶最适pH为9.0,最适温度为60℃,较游离酶分别提高1.0和10℃;4℃下保存30 d,活性保留96%以上;连续反应6次,活性保留52%。     

产碱性蛋白酶海洋细菌的筛选及其发酵条件优化

从大连海域的海参肠道中筛选得到一株产碱性蛋白酶较高的海洋细菌HS-A156,经形态学和16SrDNA序列分析初步鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)(GenBank检索号KC166863)。对菌株HS-A156的酶学性质进行初步研究,结果表明该菌株所产蛋白酶最适作用pH为9.0,在pH 8.0~11.0性能稳定;最适作用温度为40℃,在25~45℃具有良好的热稳定性。同时对该菌株产酶发酵培养基和发酵条件进行优化,确定了最适产酶培养基组成为葡萄糖1.5%、牛肉膏1.0%、酵母粉2.0%、CaCl20.05%;最佳发酵条件培养基初始pH 8.0、发酵温度30℃、接种量3%。经过优化后菌株HS-A156产碱性蛋白酶的酶活力达到538U/mL,比优化前的产酶量提高了3.7倍。     

磁性壳聚糖微球固定化脂肪酶的研究

以纳米级磁性壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂固定化脂肪酶,对固定化脂肪酶条件进行优化,同时对固定化脂肪酶的理化性质、活性回收率、热稳定性和储存稳定性进行研究.结果表明,固定化脂肪酶的最佳时间为7 h,最佳pH为8,最佳温度为50 ℃,最佳酶加量为每100 mg磁性微球加酶10 mg.和自由酶相比,脂肪酶被磁性壳聚糖固定...     

活性炭固定化α-转移葡萄糖苷酶的研究

以活性炭为载体,进行了固定化α-转移葡萄糖苷酶最佳条件研究,并探讨了固定化α-转移葡萄糖苷酶的酶学性质.固定化酶的最适pH值为4.0,最适作用温度为65℃,固定化酶的酶活较高,稳定性较好.     

离子交换树脂固定化脂肪酶催化合成蔗糖乙酯

南极假丝酵母(Candida rugosa)脂肪酶具有优良的催化性能,对其进行固定化可以很方便地实现酶的回收和再利用.采用4种离子交换树脂为载体,对来源于南极假丝酵母的脂肪酶进行了吸附固定化,并对固定化酶催化合成蔗糖乙酯的活性进行考察.结果表明,以弱碱性丙烯酸系阴离子交换树脂214为载体的固定化酶活性最高.固定化酶制备过程中缓冲液的最适宜pH值为8.4,最佳固定化时间为3h,最佳酶液浓度为8mg/mL,最适固定化温度为35℃.所得固定化酶催化合成蔗糖乙酯,酯化率达57.12%,蔗糖-6-乙酯的选择性达到51.21%.10批反应后,该固定化酶仍有较高的酶活力.     

壳聚糖微球固定化脂肪酶催化性质研究

以壳聚糖微球为载体制备固定化脂肪酶制剂并研究其催化性质.首先,制备壳聚糖微球,用2%醋酸溶液溶解壳聚糖,以液体石蜡为分散剂制成壳聚糖微球;然后,通过戊二醛交联制备固定化脂肪酶制剂,并研究其催化性质.结果表明:壳聚糖微球在2%戊二醛浓度下常温下交联9 h,脂肪酶固载率可达60%.与游离脂肪酶相比,壳聚糖微球固定化脂肪酶的最适底物、最适p H值及最适温度分别转变为4-硝基苯基辛酸酯,p H 8.57及50℃.固定化脂肪酶重复实验6次后仍保留有47.7%的催化活性,置于60℃下4 h酶活保留73%,其金属离子K+和Mg2+最适浓度分别为0.15 mol/L,0.10 mol/L.