混菌完整细胞生物合成共轭亚油酸的营养条件

以MRS作为基础培养基,采用单因素及正交试验对植物乳杆菌和嗜酸乳杆菌的完整细胞共同合成共轭亚油酸的营养条件进行了研究。通过试验得到混菌完整细胞生物合成共轭亚油酸的最佳营养条件:MRS培养基,葡萄糖20g/L,蛋白胨15g/L,牛肉膏5g/L,酵母膏5g/L,无水乙酸钠7.5g/L,吐温-80 1.5g/L,柠檬酸二铵3g/L,K2HPO43.93g/L,MgSO40.58g/L,MnSO40.3g/L。在此条件下,共轭亚油酸的合成量为81.38μg/mL,比使用基础培养基时的合成量增加了11.34μg/mL。     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因定向进化研究

为得到具有催化活性的重组亚油酸异构酶,对嗜酸乳杆菌AS1.1854菌株亚油酸异构酶基因进行体外定向进化.经过两轮连续易错PCR扩增及一轮DNA改组获得了突变基因片段,并克隆到pET30a质粒载体上,转化大肠杆菌,构建了该酶的基因突变文库.经IPTG诱导表达后筛选出一株重组菌,可表达可溶性重组酶蛋白,经紫外分光光度计法测定,重组酶蛋白活力为8.2 U.     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶的结构与催化机理

对嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶基因及其启动子进行了定位,采用多种软件分析了酶蛋白中α螺旋、β折叠等二级结构的组成以及酶蛋白中的糖基化位点、磷酸化位点的分布.证明了该蛋白具有肌凝蛋白交叉反应抗原、链状球菌的67 000肌凝蛋白交叉反应抗原、番茄红素脱氢酶相关蛋白和FAD结合蛋白等4个功能结构域,并首次提出其催化共轭亚油酸合成时可能存在氧化还原反应过程.     

发酵条件对植物乳杆菌产共轭亚油酸的影响

以植物乳杆菌(L.plantarum A6-1)菌株为研究对象,系统研究了发酵条件对共轭亚油酸形成的影响,结果表明:反应温度、培养时间、底物浓度、初始pH、接种量对共轭亚油酸的转化有明显的影响.在接种量2%,37℃培养32 h,初始pH值7.0,底物亚油酸(LA)的浓度为1mg/mL,A6-1转化生成共轭亚油酸的产量可达91.4μg/mL.     

嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因的克隆与序列分析

将GenBank中已报道的罗伊氏乳杆菌亚油酸异构酶基因对已公布的嗜酸乳杆菌NCFM基因组全序列做tblast,找到一个同源编码框.参照此编码框的核苷酸序列及pQE30质粒图谱特性设计上、下游引物,利用PCR法扩增嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶基因,并克隆到pQE30质粒载体上进行测序.分析测序结果表明,扩增得到的目的DNA全长1 776 bp,G C含量为37.5%,共编码591个氨基酸,理论相对分子质量67.5kDa.用Signal P3.0对其N端前70个氨基酸序列进行分析,结果表明,第20~40位氨基酸有较强的疏水性.不过,N端前70个氨基酸的C值、S值和Y值并不高,最有可能的酶切位点位于第45位与第46位氨基酸之间,但预测其被切割的可能性概率低于1%.可以推断,在嗜酸乳杆菌AS1.1854亚油酸异构酶的N端氨基酸序列中不存在信号肽序列.     

培养条件对一株嗜酸乳杆菌突变株亚油酸异构酶活力的影响

对一株嗜酸乳杆菌突变株产亚油酸异构酶的条件进行了研究,得到最佳产酶条件为:以脱脂乳作为培养基,添加3%的乳糖、1%的(NH4)2SO4、0 1%的亚油酸及1%的NaCl,接种量为1%,培养时间为36h.在此条件下,所合成的亚油酸异构酶活力达252 0U/mL.     

嗜酸乳杆菌亚油酸异构酶在毕赤酵母中的分泌表达

以嗜酸乳杆菌AS1.1854来源的亚油酸异构酶基因为模板,用PCR方法扩增目的片段,并克隆到pMD19T载体.经双限制性酶切的pMD19T-LAI和载体pPICZαA连接转化得到重组质粒pPICZαA-LAI.将阳性重组质粒用sac Ⅰ进行线性化后,经化学法转化毕赤酵母GS115.提取重组酵母GS 115/pPICZαA - LAI基因组,利用交叉引物通过PCR方法筛选重组子.阳性毕赤酵母GS115/pPlCZαA-LAI经1％甲醇诱导,分泌表达出相对分子质量为69 000亚油酸异构酶.经测定发酵上清酶活力为0.107 U,未破碎重组酵母酶活力0.08 U.     

嗜酸乳杆菌酸奶的研制

在牛奶培养基中添加生长促进剂，可以使嗜酸乳杆菌 生长和产酸加快，保存期延长。用这种办法研制的酸奶不仅有良好的风味，而且含有大量活性乳酸菌，保健效果比普通酸奶更为理想。     

培养条件对一株嗜酸乳杆菌突变株亚油酸异构酶活力的影响

对一株嗜酸乳杆菌突变株产亚油酸异构酶的条件进行了研究，得到最佳产酶条件为：以脱脂乳作为培养基，添加3％的乳糖、1％的(NH4)2SO4、0．1％的亚油酸及1％的NaCl，接种量为1％，培养时间为36h，在此条件下，所合成的亚油酸异构酶活力达252．0U／mL。     

共轭亚油酸的三氟化硼-甲醇的衍生化条件优化

对共轭亚油酸进行三氟化硼-甲醇衍生化时,采用不同条件处理共轭亚油酸,常常导致共轭亚油酸的不完全和异构化,从而影响到分析的准确度.本文报道对化学合成共轭亚油酸的三氟化硼-甲醇衍生化方法实验研究.阐明三氟化硼在甲醇中的浓度、反应温度和反应时间对衍生化效果的影响.确定最佳衍生化条件：三氟化硼与甲醇的质量比为10：100、反应的温度为45℃、反应时间为30 min.     

共轭亚油酸的三氟化硼-甲醇的衍生化条件优化

对共轭亚油酸进行三氟化硼-甲醇衍生化时,采用不同条件处理共轭亚油酸,常常导致共轭亚油酸的不完全和异构化,从而影响到分析的准确度。本文报道对化学合成共轭亚油酸的三氟化硼-甲醇衍生化方法实验研究。阐明三氟化硼在甲醇中的浓度、反应温度和反应时间对衍生化效果的影响。确定最佳衍生化条件:三氟化硼与甲醇的质量比为10∶100、反应的温度为45℃、反应时间为30 min。     

异构化菜油中共轭亚油酸的紫外分光光度法的定量

采用wFZ UV-2102C型紫外分光光度计,定量分析碱性异构化菜油中共轭亚油酸的含量.在紫外区200～260 nm各种不同的波长下对菜油、共轭亚油酸标准品、Tonalin共轭亚油酸和异构化菜油的吸光度进行了比较分析,结果显示紫外分光光度分析可适用于样品中共轭亚油酸同分异构体总量的定量,共轭亚油酸的特征吸收峰在230～235 nm,并且在测定环境温度25℃、波长234 nm处,控制待测样液中共轭亚油酸浓度不大于40 μg/mL的条件下共轭亚油酸的总量与吸光度呈线性相关关系.     

抗氧化剂对共轭亚油酸甘油酯氧化稳定性的影响

采用了强化氧化实验条件,以过氧化值为指标,研究了维生素C、维生素E、柠檬酸三钠、甘草抗氧化剂对共轭亚油酸甘油酯氧化稳定性的影响.由过氧化值的一元线性回归方程得出它们对共轭亚油酸甘油酯均有抗氧化作用,甘草抗氧化剂抗氧化效果最好.单独添加质量分数为0.5%VC、0.1%VE、0.05%柠檬酸三钠、0.7%甘草抗氧化剂时,共轭亚油酸甘油酯的氧化稳定性最好.     

抗氧化剂对共轭亚油酸甘油酯氧化稳定性的影响

采用了强化氧化实验条件,以过氧化值为指标,研究了维生素C、维生素E、柠檬酸三钠、甘草抗氧化剂对共轭亚油酸甘油酯氧化稳定性的影响．由过氧化值的一元线性回归方程得出它们对共轭亚油酸甘油酯均有抗氧化作用,甘草抗氧化剂抗氧化效果最好．单独添加质量分数为0．5％VC、0．1％VE、0．05％柠檬酸三钠、0．7％甘草抗氧化剂时,共轭亚油酸甘油酯的氧化稳定性最好．     

嗜酸乳杆菌产细菌素培养条件的优化

为了提高嗜酸乳杆菌产细菌素的产量,通过单因素和正交试验优化了嗜酸乳杆菌产细菌素的培养条件。采用琼脂扩散法测定含有细菌素的发酵上清液对大肠杆菌的抑菌活性,根据抑菌圈的大小,确定最适培养基成分和发酵条件。试验结果表明,嗜酸乳杆菌产细菌素最佳培养基组分为:蛋白胨10g/L,牛肉膏12.5g/L,酵母膏5g/L,葡萄糖15g/L,柠檬酸氢三铵2g/L,无水乙酸钠5g/L,碳酸钙1g/L,K2HPO4·3H2O 2.62g/L,MgSO4·7H2O 0.58g/L,MnSO4·H2O 0.25g/L,Tween-80 3mL/L。最佳发酵条件为初始pH 6.3、37℃、接种量3%、培养时间22h。此条件下,抑菌圈直径可达22.4mm。     

酸浆中嗜酸乳杆菌的生物学特性

从传统老豆腐酸浆中分离筛选得到一株产酸菌(编号AP117),初步鉴定为嗜酸乳杆菌,采用MRS培养基对菌株的生长曲线、耐酸、耐胆盐等生物学特性进行了研究。结果表明:嗜酸乳杆菌培养6 h后活菌浓度达到105cfu/m L,进入对数生长期,第14 h后活菌浓度超过1010cfu/m L,第22 h后,活菌数慢慢下降。该菌株能耐受较强的酸度,用p H=1.5的酸度处理2 h后存活率达到49.8%,能耐受0.1%~1.5%的猪胆盐,对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌具有很强的抑制作用。     

紫外光谱法测定葵花油异构化产物中共轭亚油酸的含量

以葵化油为原料,经过皂化、酸化、共轭化过程制备共轭亚油酸。采用紫外光谱法,在232.62nm波长下进行测定,标准曲线的线性回归方程为Y=0.0104X＋0.054,相关系数为R^2=0.9995,方法的相对标准偏差为0.52％,回收率为94.05％—100.21％。     

嗜酸乳杆菌群双组分信号转导系统

为明确Lactobacillus acidophilus菌群中的双组分信号转导系统的分布及功能,采用HMMER、SMART、TMHMM、C lustalW等生物信息学手段对L.acidophilus菌群中全基因组进行扫描,对其中的双组分信号转导系统进行预测,并进行结构分析及功能预测.结果表明,L.acidophilus菌群中具有5~9个双组分信号转导系统,其中部分TCS系统调控细菌的耐酸、耐胆汁能力及细菌素分泌等益生功能密切相关的性能.     

碱催化异构化制备共轭亚麻酸的研究

共轭亚麻酸具有多种有益的生理功能,本文以亚麻油(含53.5%亚麻酸)为原料,氢氧化钾为催化剂,乙二醇为溶剂,碱催化异构化方法制备共轭亚麻酸,采用气相色谱法表征。研究了反应温度、时间、碱油比及溶剂用量对亚麻油共轭化的影响,得到了制备共轭亚麻酸的最佳实验条件。结果表明,当反应温度180℃,反应时间40 min,碱油比(mA∶mO)=3∶1,溶剂油比(VS∶mO)=20∶1时,亚麻酸的共轭收率可达52.70%。该方法能使反应在均相反应体系中较为温和的温度条件下较短的时间内完成。