玉米加工食品中转基因成分的PCR检测

通过分子生物学手段，以聚合酶链式反应（PCR）技术为基础，建立了从玉米加工食品中检测转基因成分的方法，实验分别采用CTAB法（十六烷基三乙基溴化铵）和试剂盒（Kit)方法对市场上选购的玉米片，玉米面，香脆玉米角，窝窝头，爆玉米等5种玉米食品中的DNA进行了提取，并用聚合酶链式反应（PCR）方法对玉米内标基因Inverase进行扩增，采用凝胶电泳对结果分析，比较两种DNA提取方法的优越性，再对通常转入的基因构建元件35S启动子，NOS终止子进行扩增对玉米转基因成分进行检验，结果表明：试剂盒法对玉米加工食品中的总DNA有更好的提取效果，并得到一个适宜的扩增条件参数；5种玉米食品的转基因检测结果均为阳性，即都含有转基因成分。     

市售豆瓣酱的转基因检测分析

转基因食品的安全是消费者关心的热点问题,尤其是转基因大豆深加工制品。以3种市售大豆豆瓣酱为材料,采用的CTAB改进方法对其进行了DNA提取,并鉴定了提取的DNA质量,凝胶电泳和PCR结果显示所提取的DNA能对内参基因进行有效扩增,表明了豆瓣酱的DNA提取的有效性,可以满足后续PCR的要求;在此基础上采用PCR方法检测了35S和NOS基因,结果显示待检测样品中不含转基因成分。豆瓣酱转基因检测方法的建立为今后同类产品的转基因评价提供了有效参考。     

PCR法检测大豆加工食品中的转基因成分

通过分子生物学手段,以聚合酶链式反应(PCR)技术为基础,建立了检测大豆加工食品中转基因成分的方法。实验分别采用CTAB法和试剂盒(Kit)法对大豆锅巴、豆浆、豆奶粉、豆腐、豆腐丝等五种大豆加工食品中的DNA进行了提取,用内标基因Lectin对此两种方法的提取效果进行了比较,并以提取的DNA为模板,利用不同的引物分别对目标基因35S和NOS进行了PCR扩增和琼脂糖凝胶电泳检测。结果表明:Kit法的DNA提取效果优于改良CTAB法,上述五种大豆加工食品中均检测出35S启动子和NOS终止子,且均含有转基因成分。     

玉米变性淀粉两种不同DNA提取方法的比较研究

采用两种不同方法对玉米变性淀粉基因组DNA提取比较,并经特异性引物进行实时荧光定量-聚合酶联反应(qRT-PCR)检测,从中选择出更适合玉米变性淀粉后续转基因成分检测的DNA提取方法。通过采用磁珠法和试剂盒法提取玉米变性淀粉基因组DNA,比较不同方法的提取效果。结果表明,试剂盒法的提取效果优于磁珠法。实时荧光定量PCR结果显示,试剂盒法提取的基因组DNA均可扩增出标准的S形曲线,而磁珠法提取的基因组DNA则无任何扩增信号。该研究为检测玉米变性淀粉中的转基因成分奠定了基础。     

豆腐中转基因大豆成分的检测

目的探索适合豆腐样品的DNA抽提方法并采用实时荧光聚合酶链反应(PCR)技术对豆腐试样中的转基因大豆成分进行检测。方法分别采用CTAB和SDS配制抽提缓冲液提取18个豆腐样品中的DNA,针对转基因大豆都含有大豆内源基因lectin及共同元件CaMV35S启动子、nos终止子及epsps基因进行实时荧光PCR扩增。结果 SDS法比CTAB法提取的豆腐DNA质量更好;18个豆腐样品均检测到了lectin,其中有2个样品检测到了CaMV35S启动子的荧光信号,4个样品检测到了nos终止子的荧光信号,所有样品均未扩增出epsps基因。结论 SDS法比CTAB法更适合于抽提豆腐样品的DNA,提取到的DNA可用于实时荧光PCR法检测豆腐内源基因和外源基因。     

植物油DNA的高效提取方法研究

针对植物油中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,以食用植物油为原料,旨在建立一种从植物油中稳定、高效提取DNA的方法。实验采用硅膜吸附柱法提取植物油基因组DNA,PCR扩增其相应内源基因进行质量鉴定,再针对通用的外源基因CaMV35S启动子进行PCR、LAMP和实时荧光PCR检测对该方法进行评价。结果表明:该方法提取的DNA质量可靠,采用PCR、LAMP和实时荧光PCR技术成功地检测出了植物油中的CaMV35S启动子。因此,硅膜吸附柱法提取的植物油DNA可以作为PCR、LAMP、实时荧光PCR扩增模板用于转基因成分的检测,该方法经济、稳定、安全,为植物油的基因检测奠定了基础。     

大豆粉转基因成分能力验证样品的检测分析

目的 提高实验室对转基因大豆定性检测的准确性和检测人员专业技术水平, 增强实验室竞争力。方法 通过核酸蛋白仪器分析法和单重实时荧光PCR (simplex real-time fluorescence PCR)法对样品内源基因扩增的循环阈值的影响来比较2种方法, 分析2种DNA提取试剂盒的提取质量。对标准SN/T 1204-2016《植物及其加工产品中转基因成分实时荧光PCR定性检验方法》扩增反应体系中DNA模板量进行优化后, 对样品进行检测。再依据标准SN/T 1202-2010《食品中转基因植物成分定性PCR检测方法》的要求, 对样品进行检测。最后对2个标准的检测结果进行比对。结果 通过内源基因扩增循环阈值的数据确认, 更能准确反映试剂盒提取的DNA是否满足后续外源基因的分析检测要求。2种标准方法对19-N578和19-M913 2个待测样品的检测显示3种外源基因CaMV35S、NOS、CP4-EPSPS均为阴性, 19-N578和19-M913待测样品均为非转基因大豆。结论 本次能力验证获得满意评价。DNA提取质量的评估, 体系中DNA模板量的优化, 检测方法的选择和实验的质量控制都是影响能力验证结果的重要因素。     

植物油DNA提取及转基因检测方法的研究进展

对乳化离心法、冷冻干燥法和试剂盒法3种植物油DNA提取方法进行综述,讨论植物油DNA提取的成功率和基于DNA检测植物油中转基因成分的主要方法,为后续植物油DNA提取方案的优化提供参考,并提出数字PCR在植物油转基因成分检测的应用前景。     

大豆及豆制食品中转基因成分检测分析

建立大豆及豆制食品中转基因成分分析的real-time PCR扩增体系和方法。选择市售的大豆、豆粉、豆干、豆腐、豆浆和腐竹等6种大豆及豆制食品,针对不同的样品探索高质量基因组DNA的提取方法,扩增大豆内参基因lectin进行质量检测。针对我国批准的3种主要转基因大豆品系(GTS40-3-2,A2704-12和MON89788)设计特异性的引物和探针,进行real-time PCR检测。购买3种转基因大豆品系的标准品作为质控对照。从该6种大豆及豆制食品中均提取到了高质量的基因组DNA,建立了稳定的针对外源基因特异性、结构特异性和品系特异性片段检测的real-time PCR扩增体系。成功建立了6种大豆及豆制食品中针对3种转基因大豆品系成分检测的real-time PCR方法。     

几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

茶籽油DNA提取方法的比较

针对食用油脂中DNA含量极低、DNA序列片段短、破坏严重的特点,通过实时荧光PCR法检测植物的通用tRNALeu,对茶籽油DNA几种提取方法进行比较,建立了食用油脂中DNA提取新方法。结果证明:较之于文献中常见植物油DNA几种提取方法,用改进方法提取的DNA含量高、纯度高,可以作为PCR反应的模板,为食用油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。     

植物源性食品DNA提取方法的建立及几种方法比较

以大豆和马铃薯植物源性食品为研究对象,比较了研究所建立的基于磁珠的DNA提取方法、3种商品试剂盒法和传统CTAB法共5种方法提取各种食品基因组DNA的效果;通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分析法、定性PCR和实时荧光定量PCR法对所提取的DNA进行检测,比较所得DNA的浓度和纯度,以及对下游检测的适用性。结果表明,与其他几种提取方法相比,研究所建立的方法提取到的DNA浓度稍低,但纯度较高,而且对于豆油和淀粉样品,可很好地提取到基因组片段,满足后续PCR检测要求。     

食用植物油DNA提取方法的优化

目的 建立可从不同种类食用植物油中提取得到高质量的、可用于分子生物学检测的DNA的提取方法.方法 使用2种改进十六烷基三甲基溴化铵法(cetyltrimethylammonium bromide,CTAB)和2种商用试剂盒提取6种食用植物油的DNA,通过紫外分光光度计检测所得DNA样品的浓度和纯度.设计特异性引物,并通...     

果汁DNA提取方法比较及柑橘属植物分子生物学检测技术的研究

以橙汁为研究对象,选取市售100%橙汁及橙汁饮料各3种,采用CTAB法、SDS-CTAB法以及改良CTAB法提取其DNA,对所提取的DNA的浓度、纯度及扩增效率进行比较;同时选取橙UDP-葡糖基转移酶蛋白基因设计柑橘属植物特异性扩增引物,通过定性PCR检测其特异性和灵敏度,并应用于果汁中柑橘属植物的检测。实验结果证明,由改良CTAB法获得的DNA模板质量较高,适用于果汁中DNA的提取。UGT基因引物可对柑橘属植物产生特异性扩增,最低检测限为10pg/μL。将该引用物用于市售橙汁的检测,其检测结果为阳性,从而证明UGT基因特异性引物可用于果汁中的柑橘属植物成分的检测及鉴伪研究。     

植物源食品DNA制备方法的比较研究

目的：探索可用作PCR方法检测和鉴定植物源转基因食品模板的DNA抽提方法。方法：分别用改良CTAB法、SDS法制备黄豆、玉米、土豆和番茄及其加工产品的DNA，PCR扩增叶绿体基因片段及黄豆、玉米的内参照基因lectin和zein10。结果：改良CTAB法所得DNA作为PCR扩增模板，叶绿体基因片段及lectin和zein10均呈阳性，SDS法所得DNA作为模板时，部分样品内参照基因lectin或zein10扩增阴性。结论：PCR方法检测转基因食品时，应用改良CTAB法制备DNA模板。     

A Cost-Efficient and Simple Plant Oil DNA Extraction Protocol Optimized for DNA-Based Assessment of Product Authenticity

DNA-based assays offer precision in ascertaining the species/cultivar origin of agro-food products. Yet, obtaining DNA of sufficient quality and quantity is the main challenge while performing DNA-based food authentication analyses. The aim of the present work was to standardize a cost-efficient, easy-to-apply, yet effective plant oil DNA isolation protocol that allows reliable downstream PCR-based analyses. Because capillary electrophoresis (CE) separation of species/cultivar discriminating genomic fragments is a widely adopted approach in food genomics, a CE system was utilized in order to assess the performance of the proposed cetyl trimethyl ammonium bromide (CTAB)-based protocol. A plastid intergenic spacer and a nuclear olive gene were used as targets in order to evaluate the amplificability of DNA extracted with the CTAB-based protocol. The plastid barcode not only allowed assessing the reproducibility of PCR amplifications from the extracted oil DNA samples (olive, hazelnut, corn, rapeseed, cottonseed, and soybean oils) but also proved successful in discriminating all tested oil crop species based on amplified fragment length polymorphisms. Moreover, the barcode assay proved successful in correctly identifying the tested olive oil: cottonseed oil blends as admixtures of the two oil species. Thus, it was also feasible to demonstrate the potential of the barcode sequence as a discriminatory analyte to detect adulteration in plant oils. In addition, application of a CAPS (cleaved amplified polymorphic sequence) assay designed to genotype a nuclear SNP (single nucleotide polymorphism) marker resulted in the successful identification of the two single-cultivar olive oils included in the study. As a result of the present work, it was feasible to standardize a reliable and cost-efficient DNA extraction protocol that works well with both unrefined (olive and hazelnut) and refined (corn, rapeseed, cottonseed, and soybean) oils.     

酱油、烤鳗酱油DNA 提取及原料成分的荧光PCR 检测

用4 种预处理方法对酱油进行浓缩,后采用CTAB 沉淀法提取DNA,再用SYBR Green Ⅰ荧光PCR 分别检测人工添加的大米gos9 基因、酱油原料成分(大豆Lectin 基因和小麦Wx012 基因)。结果显示：仅人工添加大米DNA、用CTAB 沉淀液浓缩的预处理方法提取的酱油DNA 中,大米gos9 基因、大豆Lectin 基因和小麦Wx012 基因的检测结果均为阳性,表明这种方法最适于酱油DNA 的提取。将建立的DNA 提取方法用于3 份酱油、4 份烤鳗酱油同样有效,gos9 基因检测结果均为阳性。2 份酱油检出大豆成分,2 份烤鳗酱油检出小麦成分,1 份酱油和2 份烤鳗酱油检出大豆成分和小麦成分。     

用Cytb基因序列分析鉴定肉制品掺假

目的采用Cytb基因进行肉制品真伪鉴定的尝试性探索。方法随机采集21份肉制品样品,首先采用CTAB法方法提取样品DNA,基于Cytb基因的通用引物对21份样品DNA进行PCR扩增,把扩增产物进行测序,然后采用DNAMAN软件进行序列的比对分析。结果 CTAB方法适合肉制品的DNA提取。10份牛肉样品中9份与标注吻合,1份检测出是猪肉;2份羊肉样品中1份与标注吻合,1份检测是猪肉;2份猪肉样品中1份与标注吻合,1份检测是鸡肉;1份鸡肉样品与标注吻合;6份牦牛肉样品中2份与标注吻合,4份检测是水牛肉。结论用Cytb基因序列分析比对方法适合肉制品的真伪鉴定,市场上肉制品存在掺假问题。