葡萄灰葡萄孢生长及产孢条件研究

灰葡萄孢(Botrytis cinerea)可引起葡萄灰霉病,严重影响葡萄产量和品质。探索不同培养基、温度、光照、碳源、氮源等对葡萄灰葡萄孢菌丝生长和分生孢子产生的影响,以及菌丝与分生孢子的致死温度和时间,旨在探索灰葡萄孢生长及产孢的最佳条件。结果显示,灰葡萄孢菌丝生长的最适培养基为PDA培养基,最适温度25℃;产孢最适培养基为MSM培养基,最适温度23℃;在培养基pH3~11范围内灰葡萄孢均能生长并产生分生孢子,菌丝生长和产生分生孢子的最适pH均为6;灰葡萄孢以葡萄糖和乳糖为碳源时生长速率和产孢量达到最佳,而蛋白胨则为灰葡萄孢生长和产孢的最佳氮源;菌丝的致死条件是50℃处理25 min或55℃处理10 min;分生孢子的致死条件是45℃处理30 min或50℃处理10 min。研究为葡萄灰霉病的有效防治及分子生物学研究提供理论依据。     

库尔勒香梨采后贮藏期间“黑头病”致病菌生物学特性的研究

库尔勒香梨采后贮藏期间“黑头病”致病菌菌丝生长最适温度为28℃,最适pH 值为7,在PD A 培养基和梨汁培养基上有利于菌丝生长和产孢量。碳源、氮源对菌丝生长和产孢量的影响差异明显,葡萄糖和蛋白胨为致病菌的最佳碳源和氮源。分生孢子对光比较敏感,完全光照有利于致病菌菌丝生长和分生孢子的产生量。55℃水浴处理10 m in可致死致病菌的分生孢子,紫外辐照时间越长分生孢子的致死率越高。     

烟草赤星病菌的不同菌株在11种培养基上的生长和产孢能力

本文测定了烟草赤星病菌(Alternaria alternata)的18个菌株、茄子和番茄早疫病菌(A、solani)的各1个菌株、黄瓜的1个分离物(Alternaria sp.),共21个菌株在11种培养基上的生长特性与产孢能力。有16个菌株分别在8种培养基上产生同心轮纹状菌落。在25℃下培养5天后,菌落面积在菌株间和培养基间的差异都很大,从5～15到5～50平方厘米不等;低温(15C)下继续培养7天后,菌落面积增量为5～50倍不等,气生菌丝高度依培养基和菌株的不同从1到10毫米不等。由色差目测,建立了产孢量从0到4.0的9个等级,显微镜计数表明,能准确反映产孢能力的量和梯度关系。比较指出,产孢量在培养基间的差异大于菌株间的差异。据综合分析,供试的11种培养基可被分为:宜于产孢型、宜于生长菌丝型、中间型和不适型4类。     

广西烟草一种斑枯病新病原菌的鉴定

为明确导致广西田林县烟草叶片斑枯的病原菌种类,采用组织分离法对典型发病叶片的病原菌进行分离,并以菌丝块接种法测定分离物的致病性。用PDA和V8培养基培养并观察其形态特征,再将其rRNA-ITS和TUB2序列联合进行分子鉴定。结果表明,分离获得的代表菌株可致烟草叶片发病,在PDA培养基上不能产孢,在V8培养基上培养可形成分生孢子器和分生孢子。分生孢子器近球形,直径70～150μm。分生孢子为单胞,无色,呈椭圆形,平均大小7.1μm×2.7μm。代表菌株的rRNA-ITS和TUB2序列Blastn比对及系统进化树分析显示,其与木瓜拟多隔孢（Stagonosporopsis caricae）的相似度分别为99.61%和100%,与S. caricae归为同一分支。结合致病性和形态特征,将广西烟草斑枯病的病原菌鉴定为S. caricae。     

安徽烟草赤星病菌生物学特性及致病力分化研究

研究了安徽地区烟草赤星病菌的生物学特性和致病力分化,结果表明,该菌在10～35℃条件下均能生长,最适生长温度为25～30℃,温度低于7℃或高于40℃菌丝不能生长;分生孢子致死温度是53℃5 min和50℃10 min,幼菌丝致死温度是52℃5min和49℃10 min.病菌在pH 4.0～11.0的范围内均能牛长,呈现双峰曲线,即在pH 6.0～pH 8.0生长较快,尤以pH 6.0和pH 8.0的条件下菌丝生长更快;分生孢子在pH 4.0～11.0之间均可以萌发;在pH 6.0时,产孢量最高.在光照和黑暗交替的条件下,有利于菌丝的生长和孢子产生.致病力测定结果表明,不同菌株之间致病力存在显著差异,根据接种K326烟草后所致病情指数的大小可供试菌株致病力划分为致病力强、中等、弱和不致病4种类型,说明安徽烟草赤星病菌存在明显的致病力分化;在不同烟区间和同一烟区内均存在不同致病力类型的菌株,致病力类型的分布与菌株地区来源有一定的相关.     

六堡茶中“金花”菌的生物学特性

微生物对六堡茶的品质形成有重要影响,以"金花"菌普遍茂盛品质为佳。"金花"生长具有随机性,因此,难以控制六堡茶中金花的数量。本研究对从六堡茶分离出的一株金花菌株LB-1雪黄散囊菌(Eurotium niveoglaucum)的形态学与生理特性进行研究,力图掌握其发花规律。结果表明,该菌株的形态学表现为,大量黄色菌丝,有隔;闭囊壳缠绕在具饰菌丝网中,破碎释放子囊孢子;分生孢子头结构呈疏松放射形,其末端会出现泡囊状的顶囊,分生孢子梗较长,壁光滑,顶囊烧瓶形,产孢结构单层;分生孢子椭圆形,少数近球形。菌株LB-1生长周期呈"S"形,其生长适宜温度为25℃、pH值为6.1。菌株LB-1在不同碳源的培养基中以蔗糖和葡萄糖为碳源的培养基菌丝生长良好,其中蔗糖浓度为20%时生长最佳。NaCl浓度为5%时菌株LB-1生长良好。菌株LB-1在不同氮源的培养基中以牛肉膏、蛋白胨、酵母膏为碳源的培养基菌丝生长最佳。     

油菜黑胫病菌Leptosphaeria biglobosa生物学特性研究

为了解我国油菜黑胫病病原菌（Leptosphaeria biglobosa）的生物学特性,在实验室里研究了温度、pH值、光照、碳源及氮源等条件对该病菌营养生长及分生孢子产生的影响。结果表明：病原菌在5℃～35℃均可进行营养生长并产孢,最适生长和产孢温度为25℃;在pH4～10的范围内该菌均能生长并产孢,在pH7的条件下生长最快,产孢最多。光暗交替有利于菌丝生长和产孢,而持续光照不利于菌丝生长,尤其不利于产孢。最适的碳源、氮源分别是可溶性淀粉、牛肉膏。分生孢子的致死温度为52℃。     

高山被孢霉生长和产脂的影响因素分析

为探究影响高山被孢霉生长和产脂的因素,分析不同初始葡萄糖质量浓度、活化次数、接种量、装液量、发酵时间、菌球打碎时间等条件下高山被孢霉生长和产脂特点。结果表明,初始葡萄糖质量浓度、装液量和发酵时间对菌株生长和产脂的影响最为显著,且初始葡萄糖质量浓度与花生四烯酸的产量呈负相关性。根据不同条件下菌株生长和产脂情况,得到高山被孢霉最佳培养条件为:菌株活化3次,用高速分散机8 000 r/min打碎20 s至均匀状态,按2%～3%(体积分数)接种量接入初始葡萄糖质量浓度为50 g/L、装液量为20%(体积分数)的发酵培养基中,200 r/min、28℃培养8. 5 d。     

柚苷酶产生真菌的复筛及菌种初步鉴定

对前期分离获得的柚苷酶产生真菌进行复筛,从56株柚苷酶产生真菌中复筛出了8株脱苦能力较强的真菌,其中,实验室编号为4-4-1的菌株对柚皮苷的分解率为99%.对菌株4-4-1进行形态鉴定,结果表明,该真菌培养基中菌丝呈棉絮状,分生孢子梗单生,粗短,为轮辐状排列的瓶形小梗,分生孢子微弯、镰刀形,参照真菌鉴定手册第610页的描述鉴定为小型茄腐皮镰孢霉.     

高山被孢霉产孢培养基的筛选

为了促进高山被孢霉产孢,研究分析了8种常用于促进丝状真菌产孢的培养基对高山被孢霉菌丝生长和孢子产量的影响,并对产孢培养基进行了改良。结果表明,在40 g/L的玉米粉培养基中补加10 g/L葡萄糖和无机盐（硝酸盐（2 g/L KNO3）、磷酸盐（1 g/L NaH2PO4）与镁离子（0.3 g/L MgSO4·7H2O））,接种高山被孢霉后于28 ℃培养10 d,再在4 ℃培养14 d,孢子平均产量达到 8.57×106个/mL,是目前用于高山被孢霉菌株保藏的葡萄糖酵母培养基（GY）(孢子平均产量 3.85×106个/mL)的2.23倍。因此,在有少量葡萄糖和无机盐促进菌丝生长的前提下,40 g/L的玉米粉最适合高山被孢霉产孢。     

Effects of the origins of Botrytis cinerea on earthy aromas from grape broth media further inoculated with Penicillium expansum

Earthy “off” aromas from wine and grape juice are highly detrimental to the production of quality grape products. These volatile compounds are produced on grapes by Botrytis cinerea, Penicillium expansum and/or a combination of P. expansum and B. cinerea strains. B. cinerea strains were isolated from different (a) vineyards in Spain and Portugal, (b) grape varieties (c) bunches (i.e., sound and botrytized) and (d) positions in the botrytized bunch (i.e., interior or exterior). A novel Headspace-Phase Microextraction (SPME) followed by Gas Chromatrography/Mass Spectrometry (GC-MS) dedicated to analyze geosmin, methylisoborneol (MIB), 1-octen-3-ol, fenchone and fenchol in grape broth medium was used. Approximately 50% of the B. cinerea strains induced detectable geosmin. One strain accumulated significant amounts of anisoles, demonstrating that this contamination might already occur in the vineyard. Strains from the interior of Cainho grape bunches induced more geosmin and hence it may be possible to reduce this volatile in wine by avoiding using these grapes in case of B. cinerea attack.     

不同株系赤霞珠葡萄表皮酵母菌的多样性研究

通过采用富集分离方法,从3个赤霞珠株系（R5、ISV-FV5和169）的葡萄果实表皮共分离得到酵母菌36株。利用26S rDNA的D1/D2和5.8S-ITS区序列分析并结合形态学特征对这些菌株进行了多样性研究。共鉴定出3个酵母菌属的4个已知种群,分别为Cryptococcus magnus、Cryptococcus uzbekistanensis、Rhodosporidiobolus ruineniae和Hanseniaspora uvarum。Hanseniaspora uvarum为株系R5所特有,Cryptococcus uzbekistanensis和Rhodosporidiobolus ruineniae为株系ISV-FV5所特有,而Cryptococcus magnus同时存在于株系ISV-FV5和169上。结果表明,不同株系的赤霞珠葡萄表皮蕴含着多种类型的酵母菌资源,而且尽管其生长的客观条件是一致的,但因为株系的不同其所含酵母菌种群的组成上也存在明显的差异。     

‘东红’猕猴桃软腐病病原菌的分离鉴定及褪黑素对其控制效果

为明确‘东红’猕猴桃软腐病病原菌的种类及褪黑素对其的控制效果。以自然发病的‘东红’猕猴桃果实为试材,采用组织分离法对软腐病病原菌进行分离培养。对所分离得到的病原菌根据柯赫氏法则进行致病性检测,依据真菌形态学鉴定和rDNA-ITS序列分析对其进行鉴定,并研究不同浓度（0、100、300和500μmol/L）褪黑素对分离得到的两株病原菌的控制效果。结果表明,引起‘东红’猕猴桃贮藏期果实软腐病的主要致病菌为间座壳菌（Diaporthe phaseolorum）和葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）;褪黑素体外抑菌试验表明,其均能显著抑制这两种病原菌菌丝生长（P<0.05）。在培养5 d时,500μmol/L褪黑素对间座壳菌和葡萄座腔菌的抑制率分别为71.22%和63.34%;同时,褪黑素对损伤接种下软腐病病斑的扩展具有一定的控制效果。在损伤接种5 d时,500μmol/L褪黑素处理后接种间座壳菌和葡萄座腔菌的果实病斑直径分别仅为对照组的37.40%、45.50%。由此可见,褪黑素对‘东红’猕猴桃软腐病病原菌的控制具有潜在的应用价值。     

南方野生葡萄酵母菌资源研究进展

在南方野生葡萄人工大面积种植及各地大力发展葡萄酒产业的基础上,该文对南方地区野生葡萄酵母菌种生境的优势、酵母菌资源研究进展及酵母菌资源开发的研究方法进行了综述,发现南方地区的野生葡萄及葡萄酒产业具有独特的发展优势,且酵母菌资源丰富,但目前对其的开发及应用的程度有限,仍有较大的研究空间。为选育出适合酿造南方野生葡萄酒的优质野生酵母菌种、生产出具有地域性特色的葡萄酒产品以及为提高品牌的知名度提供了广阔的应用前景。     

茉莉酸甲酯处理对猕猴桃软腐病菌作用机制及果实品质的影响

以‘贵长’猕猴桃为试材,探究茉莉酸甲酯（methyl jasmonate,MeJA）对猕猴桃软腐病菌葡萄座腔菌（Botryosphaeria dothidea）作用机制及采前MeJA处理猕猴桃果实对其软腐病的防控和果实品质的影响。结果表明：随MeJA浓度（0～0.80 mmol/L）升高,其对猕猴桃软腐病菌葡萄座腔菌抑制作用增强,菌丝相对电导率、蛋白质与核酸相对泄漏度逐渐升高;0.80 mmol/L MeJA处理可引起菌丝细胞壁溶解、线粒体增多且形状不规则、空腔明显增加,细胞壁β-1,3-葡聚糖酶活力增强。田间实验结果显示：采前一个月用0.50 mmol/L MeJA浸果处理对猕猴桃软腐病防控效果可达77.70%,且可有效改善果实外观品质,提高果实VC、可溶性固形物质量分数;还可抑制猕猴桃贮藏过程中硬度下降,延缓可溶性固形物、可溶性糖质量分数的上升和VC的损失,从而提高其贮藏性能。综上,MeJA可影响葡萄座腔菌细胞壁结构完整性,具有抑菌活性,应用于田间防治猕猴桃果实软腐病效果理想,且能改善果实外形与品质、延长贮藏期。     

沙城产区酿酒酵母多样性研究

对沙城产区龙眼葡萄相关环境中分离筛选的酿酒酵母进行多样性研究。在连续3年(2008、2009、2010年)的实验中,共从葡萄园土壤、葡萄酒厂设备表面、接触过葡萄酒厂设备的葡萄汁和自然发酵过程中采集菌源样品227份,共分离得到1358株酵母菌。用5.8S-ITS区域RFLP方法进行分子水平的分类鉴定及赖氨酸培养基复筛,得到了270株酿酒酵母。再利用Interdelta PCR指纹图谱法将酿酒酵母区分为16类,其中土壤5类,自然发酵过程中第2、3、4期分别得到4类、10类和11类;酒厂设备表面3类;接触酒厂设备的葡萄汁3类。酿酒酵母的种类因样品采集时间、采集地点等不同有明显区别。自然发酵过程中得到的酿酒酵母被认为是本土酵母的可能性最大。     

复合益生菌协同发酵葡萄汁菌种筛选与工艺优化

为增强葡萄汁的保健功能,以巨玫瑰葡萄为原料,选择21株益生菌对葡萄汁进行发酵,经过初筛和复筛,得到适宜葡萄汁发酵的植物乳杆菌21802和短乳杆菌6239,并将两株菌进行复配,以活菌数和感官评分为指标,对复合益生菌协同发酵葡萄汁工艺进行优化。结果表明,复合益生菌协同发酵葡萄汁最佳发酵工艺条件为:植物乳杆菌21802与短乳杆菌6239的菌种比例1:2,葡萄汁料水比2:1,接种量5%,发酵温度36 ℃,发酵时间60 h。此条件下发酵所得益生菌发酵葡萄汁的活菌数可达到8.98×109 CFU/mL,感官评分为91.1分。     

产香果酒酵母耐低温菌株的分离选育

本文以葡萄的枝、茎、叶、果及果园土壤为材料,从中分离出6株产香酵母菌种为研究对象,在低温15℃条件下,用这6株菌株进行发酵,通过对发酵产品的各种性能参数的测定,挑选出较优菌株,最后确定较优菌株生长的最适温度和最适pH。     

Isolation of epiphytic yeasts with potential for biocontrol of Aspergillus carbonarius and A. niger on grape

Antagonistic yeasts were isolated from the epiphytic flora associated with grape berries cv. Negroamaro and identified at species level using molecular methods. A total of 144 yeast isolates were tested in a preliminary screening on agar to select isolates showing a killer activity against Aspergillus carbonarius and A. niger, the main species responsible for the accumulation of ochratoxin A in grape. Twenty-eight yeast isolates were selected for their inhibitory effects on the above fungal species and assayed by an in vitro nutritional competition test for their antagonistic capacity towards three selected ochratoxigenic strains. Six yeast isolates belonging to five species, namely 2 isolates of Issatchenkia orientalis and one each of Metschnikowia pulcherrima, Kluyveromyces thermotolerans, Issatchenkia terricola and Candida incommunis, were finally selected and screened on wounded grape berries for their ability to inhibit infection by ochratoxigenic moulds. With the exception of the K. thermotolerans isolate, when inoculated at 10(9) CFU/wound, the other five challenger yeasts reduced the A. carbonarius and A. niger colonization on grape berry (P<0.05). In particular, the best antagonistic activity was shown by the two I. orientalis isolates. Results suggest that antagonist yeasts with the potential to control A. carbonarius and A. niger on grape can be found among the microflora associated with the berries.     

含葡萄籽提取物的保健中品维生素B1含量的测定

目的 比对维生素B1的2种检测方法, 探究当食品中含有还原性物质葡萄籽提取物时, 检测维生素B1的准确性。方法 采用GB/T 5009.197-2003、GB 5009.84-2016分别测定保健食品中盐酸硫铵素、维生素B1的含量。结果 当样品中含有还原性物质葡萄籽提取物时, GB/T 5009.197-2003方法与标签值相差不大, GB 5009.84-2016检测结果的标准度偏差为57.3%。为了避免葡萄籽提取物的干扰, 必须加大衍生剂铁氰化钾的用量, 来提高维生素B1检测的准确性, 改进后, 回收率能达到101.8%, 符合检测要求。结论 当样品无干扰时, 2种方法检测的结果一致。当样品有还原性物质葡萄籽提取物时, 必须加大衍生剂的用量避免干扰, 使检测结果更加准确。