部分烟草核心种质过氧化物同工酶标记分析

对40个不同类型烟草核心种质进行了过氧化物同工酶标记分析，结果表明，种问遗传差异是比较明显的，但多数品种间遗传差异不明显，这与过氧化物酶本身所能表达的遗传多样性有关，但也与实验环境控制及实验技术的掌握有关。40个种质的酶带可划分为13个种群，其中种群A、B和J包括较多的种质，3个野生种具有特异的谱型，种质问的遗传差异与栽培类型并无必然联系，主要取决于种质间演化关系。采用信息聚类法进一步将40个种质划分为3大聚类群，3个野生种分属3个不同聚类群，反映了与其它种质的亲缘关系。类群Ⅰ包含种群A、C、D、M共17个种质；类群Ⅱ包含种群B、E、F共9个种质；类群Ⅲ包含种群G、H、I、J、K、L共14个种质。其聚类群的遗传差异以类群Ⅱ最大，其次是类群Ⅰ，类群Ⅲ最小。     

23株酵母菌株遗传亲缘关系的SRAP分析

探讨酵母菌株间的遗传亲缘关系以及遗传多样性,为酵母菌株的分类和鉴定提供科学依据.利用44个SRAP(sequence-related amplified polymorphism)引物组合对23株酿酒酵母菌株进行聚类分析、主成分分析及遗传多样性的评价.结果表明,从160个SRAP引物组合中筛选得到44个多态性引物组合,共检测到529条DNA带,其中多态性条带有465个,多态性条带百分率为86.20％,平均每个引物组合产生多态性条带10.1个.各菌株遗传相似系数在0.531～0.813之间,平均遗传相似系数为0.671;根据UPGMA聚类分析,23株酵母菌种在遗传相似系数0.610处被分为两大类群,在遗传相似系数0.705处被进一步划分为6个亚类群.第Ⅰ大类又分为Ⅰ a(包括1、2、4、7、10、11、12、14和13号酵母菌株)、Ⅰ b(包括15、16、19、20和21号酵母菌株)、Ⅰ c(包括17和23号酵母菌株)及Ⅰ d(18号酵母菌株);第Ⅱ大类分为Ⅱa(包括3、8、9和6号酵母菌株)和Ⅱb(包括5和22号酵母菌株).主成分(PCA)分析结果与此一致.这也与形态及生理特性的分类基本相似.SRAP标记技术能很好地用于酿酒酵母遗传亲缘关系、菌种鉴定和分类的研究,是一种经济、有效和可靠的分子标记技术.     

部分烤烟种质遗传多样性与亲缘关系的RAPD分析

以22份烤烟材料为供试材料,应用RAPD(随即扩增多态性DNA)分子标记技术研究22份烤烟材料之间遗传多样性和亲缘关系.结果表明,第一等级划分(D=0.30)可以将22份材料划分为三大类群.第二等级划分(D=0.23)可以将22份材料划分为六个小类群,其中,一个是由云烟系列与亲本是特字401系选的品种及其杂交后代组成的类群;一个是由多数美国来源品种组成的类群;一个由9804、岩烟97和Coker176三个品种组成的类群;一个由CF965和K07两个品种组成的类群;红花大金元和C2分别独立成类.说明分子标记多态性基本上反映了品种间的遗传变异.本结果为烟草品种改良和杂交种选配,提高育种效率提供了理论依据.     

基于SSR标记的花生品种遗传多样性分析

从212对SSR标记引物中筛选出48对引物,对63份花生品种进行遗传多样性分析,共得到251个等位变异,变异范围为2~13个,平均每个标记位点有5.23个变异;48个SSR标记的多态性信息含量为0.252~0.873,平均为0.647;63份材料的遗传多样性指数为0.508~2.243,平均值为1.272;品种间的遗传相似系数在0.657~0.960之间,不同类型的花生品种间的遗传相似性较小,不同来源花生品种间的亲缘关系也较远;聚类分析结果表明,63个花生品种在遗传相似系数为0.74处分为4大类,聚类分析结果与传统的花生分类结果吻合。     

秀珍菇菌株的亲缘关系分析

采用ERIC-PCR 技术对12 株秀珍菇菌株的亲缘关系进行分析,并与拮抗实验和酯酶同工酶实验进行对比。结果表明：在12 株秀珍菇菌株中,ERIC-PCR 扩增出的条带清晰,重复性好,多态性高。PCR 产物大致在150～3500bp 范围内,各菌株扩增条带数在9～16 条之间。聚类分析表明,在79% 的分类水平上,12 个菌株聚成4 组。MY 灰和MY 白菌株亲缘关系较近,聚为第1 组;HZ845 为第2 组;HZ3、HZ5 和HZ 夏亲缘关系很近,聚为第3 组;LD1、GY16、GY18、GY163、SM、XY 秀1 亲缘关系很近,聚为第4 组。ERIC-PCR 聚类分析结果与拮抗实验和酯酶同工酶分析结果基本一致,验证了ERIC-PCR 技术的可靠性。     

基于SSR分子标记的普通菜豆种质遗传多样性分析

建立SSR-PCR反应体系对69份菜豆种质资源进行遗传多样性分析,并利用UPGMA法进行聚类分析及类群划分。17对SSR标记共检测获得等位变异位点55个,变幅2～5个,平均每对检测到标记3.24个;17对引物的多态性位点数17个,多态性百分含量100%。根据聚类分析结果：材料间遗传相似性系数（GS）变异范围0.392～0.963,平均值为0.659;在遗传相似系数0.67水平上将69份菜豆种子材料分为4个类群,说明普通菜豆种质遗传多样性丰富。     

双孢蘑菇RAPD标记的遗传多样性分析

随机抽取108个随机引物对40个双孢蘑菇栽培菌株的DNA进行RAPD-PCR扩增实验,发现有71个随机引物能够扩增出清晰的、稳定的、具有多态性的RAPD条带。结果表明,71个随机引物共扩增出567条DNA带,平均每个引物扩增出7.99条DNA带,其中434条DNA带具有多态性,占总数的76.5%。基于RAPD-PCR扩增资料,采用欧氏距离平方系数和组间连接法,应用SPSS 11.0软件进行聚类分析,探讨40个品种间的亲缘关系与类群划分。当取欧氏距离平方系数阈值为20.5时,所有品种分为三大类;当取欧氏距离平方系数阈值取8.5时,40种双孢蘑菇菌株可被分为6个类群,此结果与双孢蘑菇菌株群的同工酶分类研究结果相当吻合。     

利用微卫星标记分析核盘菌遗传多样性

利用微卫星（SSR）标记,分析来自欧洲和中国的30个核盘菌菌株的遗传多样性和群体结构。结果表明,3对微卫星引物共扩增出21条清晰的谱带,平均每对引物扩增7条谱带,片段长度为158bp～358bp。根据SSR分析结果,30个核盘菌分离物具有较高的遗传相似性。物种水平的Nei遗传多样性指数为0.139 3,Shannon多样性指数为0.248 8。不同菌株群体的Nei遗传距离都较小,为0.009 6～0.049 6。其中俄罗斯群体和奥地利及英国群体之间的遗传距离最大。从30个菌株的UPGMA聚类分析结果看,核盘菌群体结构与地理来源没有明显的直接关系。许多地理来源相同的菌株分散在不同的组里。仅第三组组内的菌株地理来源一致,均来自于中国,且遗传距离比其他菌株的远。群体遗传分析显示,总群体的基因流比较高（2.111 6）,基因分化系数比较低（0.191 5）。     

Flavonoids of Lotus (Nelumbo nucifera) Seed Embryos and Their Antioxidant Potential

Flavonoids from lotus (Nelumbo nucifera) seed embryos were fractionated over a macroporous resin chromatography into 2 main fractions (I and II), and subsequently identified by high‐performance liquid chromatography coupled with tandem mass spectrometry (HPLC‐MS²). Sixteen flavonoids were identified in lotus seed embryos, including 8 flavonoid C‐glycosides and 8 flavonoid O‐glycosides, in which the flavonoid C‐glycosides were the main flavonoids. Among them, 2 flavonoid O‐glycosides (luteolin 7‐O‐neohesperidoside and kaempferol 7‐O‐glucoside) were identified in lotus seed embryos for the 1st time. For further elucidating the effects of flavonoid C‐glycosides to the bioactivities of lotus seed embryos, we compared the differences of the flavonoids and their antioxidant activities between leaves and seed embryos of lotus using the same methods. The results showed the antioxidant activity of flavonoids in lotus seed embryos was comparable or higher than that in lotus leaves, whereas the total flavonoid content in seed embryos was lower than lotus leaves which only contained flavonoid O‐glycosides. The flavonoid C‐glycosides of lotus seed embryos had higher antioxidant properties than the flavonoid O‐glycosides presented in lotus leaves. This study suggested that the lotus seed embryos could be promising sources with antioxidant activity and used as dietary supplements for health promotion.     

莲房原花色素的纯化分级和结构鉴定

莲房中原花色素经甲醇水提取,大孔树脂纯化,制得莲房原花色素提取物(LSPE),酸降解法测定其平均聚合度,并经TSK HW-40s凝胶树脂分级,高效液相色谱-二极管阵列检测器和电喷雾质谱分析。结果表明:采用60%甲醇水溶液,调整pH值至2.0,料液比1:20(m/V),在60℃提取1h,提取率可达7.65%,最适合纯化的树脂为AB-8。LSPE乙酸乙酯相和水相平均聚合度为3.2和15.4。LSPE乙酸乙酯相主要由儿茶素、没食子酸儿茶素、儿茶素和没食子酸儿茶素构成的二聚体、三聚体和少量四聚体构成。凝胶树脂将LSPE乙酸乙酯相分为11个级分(F1～F11),F1～F4可能为黄酮类及黄酮苷类,F5主要为儿茶素以及少量表儿茶素,F6为没食子酸儿茶素、原花青素二聚体B3、儿茶素,以及含有没食子酸儿茶素单元的原花色素,F7为儿茶素和原花青素B1、B2、B3,F8为原花色素类物质,F9～F11可能为儿茶素和没食子酸儿茶素组成的更高聚合度的聚合物。     

红莲外皮原花青素各级分的分析鉴定

以分级分离得到的4 种红莲外皮原花青素级分（F1、F2、F3、F4）为原料,分别进行平均聚合度的测定,通过红外光谱、反相-高效液相色谱以及反相高效液相色谱和电喷雾质谱联用分析,以揭示不同级分的组成和化学结构特征。结果表明 F1、F2、F3、F4的平均聚合度分别为2.12、7.27、7.85、8.16。F1、F2、F3和F4的红外光谱图均表现出明显的原花青素特征骨架振动,并推测出红莲外皮原花青素的主要结构单元是原花青定。F1的反相高效液相色谱和电喷雾质谱联用分析检测出3 种单体、4 种二聚体和2 种四聚体,其中3 种单体分别为棓儿茶素、儿茶素、表儿茶素,4 种二聚体和2 种四聚体都是由儿茶素或表儿茶素聚合而成。F2、F3和F4的反相高效液相色谱分析均检测出儿茶素单体和表儿茶素单体。通过与F1的高效液相色谱图对比,推断出F2、F3和F4均含有3 种二聚体,并且其中1 种二聚体含量较多。同时F2、F3、F4中还存在一种含量较多的未知组分。     

利用微卫星标记分析酿酒酵母的遗传多样性

为研究本土酿酒酵母的种内多态性,以及本土野生酵母与商业酵母之间的差异性,本实验采用4个微卫星标记（ScAAT1、YOR267C、C11、YPL009C）分析18株商业酵母和28株陕西泾阳分离的野生酿酒酵母的遗传多样性,利用PopGen32进行遗传参数的分析。结果表明：4个位点共检测出66个等位基因,每个位点等位基因数为16～18个;平均多态信息含量0.862 3,均为高多态位点;46株菌表现出39种基因型,分辨率为98.94%;观测杂合度0.478 3～0.658 5。野生酵母和商业酵母均具有丰富的遗传多样性,两个群体各具有自己独特的等位基因,且两者在聚类图中有较清晰的界线。     

HPLC法测定莲子壳提取物中原花青素的含量

目的：建立测定莲子壳提取物中原花青素含量的高效液相色谱法。方法：色谱柱Diamonsil C18柱（4.6 mm×250 mm,5 μm）;流动相甲醇-水-甲酸-异丙醇（13∶73∶8∶6,V/V）;检测波长525 nm;流速1.0 mL/min;柱温35 ℃;进样量10 μL。结果：原花青素在37.6～300.8 μg/mL与峰面积呈良好的线性关系,r=0.999 5,加样回收率为99.2%,相对标准偏差为0.30%。结论：该方法简便、快速、准确,具有良好的重复性和回收率,可作为莲子壳提取物中原花青素含量的测定方法。     

巴莲莲子生物碱减弱盐酸/乙醇诱导的小鼠胃黏膜损伤研究

本研究的目的是探讨巴莲莲子生物碱对盐酸/乙醇诱导的胃黏膜损伤的作用并对其机制进行研究。小鼠被巴莲莲子生物碱（alkaloids from Ba lotus seed,ABLS）灌胃处理后用盐酸/乙醇诱导胃黏膜损伤,小鼠的血清细胞因子及其他指标采用试剂盒进行测定,同时用逆转录聚合酶链式反应和western blot对胃组织进行检测。100?mg/（kg·d）的ABLS处理小鼠的胃黏膜损伤面积、胃损伤抑制率、胃液分泌量和pH值分别为1.13?mm2、84.5%、0.52?mL和3.3。ABLS作用的小鼠血清白细胞介素（interleukin,IL）-6、IL-12、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、γ-干扰素（interferon-γ,IFN-γ）、胃动素（motilin,MOT）、P物质（substance P,SP）、内皮素-1（endothelin-1,ET-1）水平低于对照组小鼠,而生长抑素（somatostatin,SS）、血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）水平高于对照组。ABLS作用小鼠胃组织比对照组小鼠具有更高的超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性和更低的MDA含量。相比对照组ABLS处理还可以上调胃组织中核因子κB抑制蛋白α（inhibitor kappaB-α,IκB-α）、表皮生长因子（epidermal growth factor,EGF）、表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）、神经元型一氧化氮合酶（euronal nitric oxide synthase,nNOS）、内皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase,eNOS）、Mn-SOD、Gu/Zn-SOD、过氧化氢酶（catalase,CAT）的mRNA和蛋白表达,同时下调核因子κB（nuclear factor kappaB,NF-κB）、诱导型一氧化氮合成酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）表达。这项研究表明ABLS处理可减轻胃黏膜损伤,并且这种作用是来自ABLS的抗氧化能力。     

汾酒大曲酯酶和淀粉酶同工酶的分析

利用同工酶技术进行了清茬、后火和红心3种汾酒大曲酯酶和淀粉酶同工酶的比较研究。大曲电泳参数研究表明:酯酶和淀粉酶同工酶电泳分离胶浓度分别为12%和10%,上样蛋白浓度分别为5.5～11 mg/mL和0.34～0.69 mg/mL,连续抽提10批储存9 d,同工酶电泳图谱一致稳定。3种大曲同工酶酶谱分析表明:每种大曲都含有丰富的酯酶和淀粉酶同工酶酶带。3种大曲酯酶同工酶谱主带的数量和位置基本相同,曲皮、曲心和整曲也基本一致,仅在弱带区有所不同。3种大曲淀粉酶同工酶谱明显不同,后火曲有一条特征主带。曲心明显不同于曲皮和整曲,曲心的淀粉酶同工酶酶谱明显将3种大曲鉴别,其中有一条酶带可作为后火曲的同工酶标记。10批混合生产用曲的同工酶分析,酯酶和淀粉酶同工酶酶谱基本一致,淀粉酶同工酶谱分析混合曲中有后火曲存在。     

莲原花青素抗黑色素瘤的研究

目的：探讨莲房和莲子壳中原花青素对黑色素瘤B16 生长的影响。方法：采用MTT 法测定莲房和莲子壳原花青素对B16 细胞的体外抑制作用;并借助显微技术观察B16 细胞形态;以荷黑色素瘤的C57BL/6J 小鼠为体内研究对象,通过瘤体积和瘤重测定,探讨体内抑瘤作用,采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥酸法测定荷瘤鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。结果：莲房和莲子壳中原花青素体外对黑色素瘤B16 细胞均有较强的抑制作用,抑制率分别为87.4% 和78.2%,均使细胞的膜破损,细胞形态改变;体内能显著减小瘤体积和减轻瘤重,抑瘤率分别为55.3% 和46.7%,并能有效降低荷瘤小鼠血清中MDA 含量,提高SOD 活力。结论：莲房和莲子壳中原花青素对黑色素瘤均具有较强的抑制作用。