HCV疫苗临床试验的研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染可引起慢性肝炎,最终导致肝衰竭、肝硬化和肝癌。目前尚无有效的HCV疫苗,其治疗仍以标准化方案聚乙二醇干扰素联合利巴韦林为主。其疗程长,费用高,副作用大,且不能从根本上解决慢性尤其是难治性丙肝的治疗难题,因此,HCV疫苗的研究迫在眉睫。本文就HCV疫苗临床试验的研究进展作一综述。     

应用AdMax系统构建携带HCV核心基因Core的重组腺病毒载体

目的应用AdMax系统构建携带丙型肝炎病毒(HCV)核心基因Core的重组腺病毒载体,为进一步研究防止HCV感染的基因疫苗和基因治疗奠定基础。方法RT-PCR法从丙型肝炎患者血清中扩增HCVCore基因,连接到腺病毒穿梭质粒的多克隆位点上,构建重组穿梭质粒pDC315-Core,在脂质体介导下与腺病毒辅助大质粒pBHGlox(delta)E1,3Cre共转染HEK293细胞,包装产生复制缺陷型重组腺病毒pAd-Core,经HEK293细胞扩增后,离子交换柱层析法纯化病毒,测定病毒颗粒数及滴度,并计算比活性及单细胞产量。结果重组腺病毒pAd-Core感染的HEK293细胞经PCR检测,可扩增出HCV核心基因Core片段,经测序证明,其插入序列与设计的HCV Core基因序列一致。扩增纯化后,重组腺病毒的比活性达0.034IU/VP,单细胞产量可达2.63×104VP/细胞。结论已成功构建重组腺病毒载体pAd-Core,为Core基因在腺病毒介导下的基因免疫和基因治疗的研究奠定了基础。     

发光试剂与酶联免疫试剂检测丙型肝炎抗体的临床评价

目的对丙型肝炎抗体的酶联免疫试剂和化学发光试剂进行临床考核和比较。方法用国外进口注册的抗HCV酶联免疫试剂和化学发光试剂检测丙型肝炎试剂国家参考品和283份可疑丙肝感染者血样,对不一致样品再用HCV RI-BA和HCVRNAPCR试剂进行确证。结果两种试剂均可达到国家标准,酶联免疫试剂特异性较好,化学发光试剂灵敏度较高。结论两种试剂均可用于丙型肝炎抗体检测。     

丙型肝炎病毒分片段抗体检测及优势抗原表位分析

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)分片段抗体,并分析HCV优势抗原表位,为HCV抗原、抗体检测及疫苗研究提供依据。方法收集经ELISA法检测抗HCV阳性血清样品90份,使用总抗体检测试剂及抗HCV分片段试剂进行检测,并用荧光定量PCR对抗体弱阳性及阴性样品进行复核,分析不同片段出现的阳性率,从而分析HCV的优势抗原表位。结果 90份抗HCV阳性的样品经总抗体检测试剂检测,其中阳性78份(86.67%);90份抗HCV阳性的样品中,分片段试剂检测1个片段以上阳性样品59份(65.56%);其中C、NS3、NS4及NS5片段抗体阳性分别为56份(94.92%)、57份(96.61%)、42份(71.19%)及47份(79.66%),NS3及C片段抗体是HCV的优势抗体。结论 HCV-C及NS3表位是HCV的优势抗原表位;HCV分片段抗体与总抗体检测试剂之间阳性检出率存在一定差异。     

庆阳地区丙型肝炎病毒基因型分布特点及其临床意义

目的探讨庆阳地区丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因型分布特点及其临床意义。方法收集庆阳地区289例各种丙型肝炎患者的临床资料及血液样本,采用PCR-荧光探针法检测HCV RNA和基因型,并对检测数据进行统计学分析。结果 289份HCV RNA阳性血清标本中1b型139例(48.1%),2a型136例(47.1%),3a型8例(2.8%),3b型5例(1.7%),未分出型1例(0.3%)。HCV基因型与患者的性别、年龄分布差异有统计学意义(P0.05)。不同感染途径患者的基因型分布差异有统计学意义(P0.05),输血是最主要的HCV感染途径,其次是血液透析。HCV基因2a型组的持续病毒学应答(sustained virological response,SVR)率(77.2%)高于1b组(69.8%),但差异无显著统计学意义(P0.05)。不同基因型的HCV RNA载量差异有统计学意义(P0.05)。1b型患者中肝硬化和肝癌的比例明显高于其他基因型(P0.05)。结论庆阳地区HCV基因型呈多基因型分布特点,主要为1b和2a型,两型比例相当;HCV基因型与患者性别、年龄、感染途径、HCV RNA水平、肝病的严重程度均有相关性。     

丙型肝炎病毒非结构区NS5基因片段的克隆和表达

从抗 HCV和HCVRNA均为阳性的病人血清中 ,采用RT PCR技术扩增得到HCVNS5基因片段。用含此基因片段的重组质粒pET 2 8a转化大肠杆菌BL2 1(DE3)后可高效表达NS5蛋白。该蛋白可用固定化金属离子螯合层析法 (IMAC)纯化。经Westernblot和ELISA检测结果表明 ,纯化的NS5蛋白可与丙型肝炎患者血清发生特异反应 ,在HCV感染的诊断中可能具有良好的应用前景。     

重组丙型肝炎病毒腺病毒载体疫苗rAd/E2的构建及鉴定

目的构建含丙型肝炎病毒(Hepatitis C virus,HCV)E2基因的复制缺陷型重组腺病毒载体疫苗,并进行鉴定。方法以含HCV(1a亚型)E2基因的质粒pEGFP-HCV/E1E2为模板,PCR扩增E2基因,扩增产物与pGEM-T载体连接,测序正确后双酶切亚克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/E2,Pme I酶切线性化后,与骨架质粒pAdEasy-1在BJ5183细菌内同源重组,获得重组腺病毒质粒pAd/E2,PacⅠ酶切线性化后,脂质体LipofectamineTM 2000介导转染HEK293细胞进行包装,获得重组腺病毒rAd/E2,在HEK293细胞内扩增,利用报告基因GFP的表达监测病毒包装及感染效率,PCR、RT-PCR和Western blot对重组腺病毒进行鉴定,并测定各代病毒的滴度。结果测序结果证明HCV E2基因序列正确;重组腺病毒质粒pAd/E2经酶切证明重组成功;PCR、RT-PCR及Western blot结果均证实重组腺病毒rAd/E2构建正确;第4代重组腺病毒的滴度为7.5×108 pfu/ml。结论已成功构建了重组HCV腺病毒rAd/E2,为丙型肝炎疫苗的研制提供了新的途径。     

丙型肝炎治疗药物研发动态

丙型病毒性肝炎(viral hepatitis type C,HC),系丙型肝炎病毒(HCV)感染所引起的疾病,HCV感染影响着全世界近2亿人群,是引起慢性肝脏疾病的主要病因,进一步会引起肝硬化、肝癌和肝功能衰竭。本文主要介绍HCV及其结构、基于不同靶点的治疗丙肝的药物(标准方案、DAA药物、DAA药物联合标准方案、DAA药物相联合、其他药物联合、HCV疫苗等)的最新研发动态,并对目前的研发现状进行了展望。     

丙型肝炎诊断试剂的研究进展

自从1989年确认丙型肝炎后,对丙型肝炎的研究发展很快,涉及HCV的生物学、分子病毒学及分子免疫学等方面。成为病毒性肝炎的研究热点。本文综述了丙型肝炎诊断试剂的研究进展,并对利用这些方法对丙型肝炎进行研究取得的成果进行介绍。     

丙型肝炎病毒NS3基因疫苗质粒的构建、表达及其体液免疫应答

目的构建基于Ii分子的丙型肝炎病毒(HCV)内源性靶向基因疫苗质粒,并检测其在真核细胞中的表达及免疫小鼠诱导的体液免疫应答。方法通过3轮PCR,以HCV-NS3的Th1表位(1248～1261aa)取代Ii链CLIP片段编码基因,构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗质粒,转染COS-7细胞,RT-PCR法检测其在mRNA水平的表达;用内源性靶向基因疫苗pHCV-NS3-Th1和非靶向基因疫苗pHCV-NS3经股四头肌肌肉免疫BALB/c小鼠,以生理盐水、pCI-neo和pCI-neo-Ii作为对照,检测小鼠的体液免疫应答水平。结果转染细胞中,内源性靶向基因疫苗质粒在mRNA水平获得表达;对BALB/c小鼠的免疫结果显示,只有pHCV-NS3组小鼠可以检测到针对HCV-NS3的特异性抗体,抗体滴度可达1:1024。结论已成功构建了基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗质粒,其能够在真核细胞中表达,但不能刺激小鼠产生HCV-NS3特异性抗体。     

丙型肝炎病毒感染动物模型研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)是对全球公众健康影响较为严重的一种病原,目前尚缺乏有效疫苗及针对性强的药物对其进行防控,究其原因是缺少有效的动物模型,使其致病机理研究较为薄弱。因此,建立一种有效的HCV感染动物模型是HCV研究工作中的重要环节。本文简要介绍了迄今为止国内外已建立的HCV感染动物模型的特点及其应用前景。     

N-[(2′R)-2′-脱氧-2′-氟-2′-甲基-P-苯基-5′-尿苷酰基]-L-丙氨酸1-甲基乙基酯及其制备方法

正本文公开式4的核苷氨基磷酸酯以及它们作为用于治疗病毒性疾病的药剂的用途。这些化合物是RNA-依赖性5RNA病毒复制的抑制剂,并且可用作HCV NS5B聚合酶的抑制剂、HCV复制的抑制剂、以及用于在哺乳动物中治疗丙型肝炎感染。还公开一种由式4表示的化合物的制备方法:(式4)其中     

吉林省职业献血员丙型肝炎病毒感染情况分析

<正> 作者对吉林省职业献血员丙型肝炎病毒(HCV)感染情况进行了调查。选择省内东部、南部、西部和中部7个血站308名职业献血员及286名无献血史成人作为对照。静脉采血,分离血清,置-20℃冻存。抗体检测采用西班牙LBE公司提供的丙型肝炎抗体(抗-HCV)检测试剂。该试剂包被的抗原为合成多肽抗原(含有结构区核心抗原和非结构区抗原)。应用酶联免疫吸附试验(ELISA)方法。凡检测样品OD值≥阈值为阳性。结果表明,职业献血员抗-HCV阳性率为21.75％(67/308),无献血史成人抗-HCV阳性率为5.24％(15/268)。职业献血员HCV感染率与无献血史成人HCV感染率差异显著(P<0.005)。国内资料报道,我国一般人群抗-HCV阳性率为1.4％～     

丙型病毒性肝炎合并非酒精性脂肪性肝病的研究进展

丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)引起的一种全球分布的传染性疾病,大部分患者可发展为慢性丙型肝炎(chronic hepatitis C,CHC)、肝硬化、肝癌。非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)是一类排除酒精及明确因素损伤,与肥胖、胰岛素抵抗等有关的综合性慢性肝脏病变。HCV合并NAFLD可加速肝脏疾病的发生和发展,更易发展为慢性肝炎、肝硬化和肝细胞肝癌。本文主要从CHC合并NAFLD的流行病学现状、两种疾病之间的相互影响、作用机制、诊断及治疗等方面作一综述。     

长春地区丙型肝炎病毒的基因分型及其与肝脏疾病的相关性

目的分析长春地区丙型肝炎病毒(HCV)基因型的分布及其与HCV RNA含量、感染途径、肝病程度的相关性。方法采用荧光定量PCR和型特异性引物PCR对82份抗-HCV阳性病人的血清标本进行HCV RNA检测及HCV的基因分型,并分析基因型与感染途径、HCV RNA含量和肝病程度的相关性。结果78份HCV RNA阳性血清标本中1a型占5.1%、1b型占48.7%、2a型占33.3%、2b型占11.6%、3a型占1.3%,未发现混合型。血源性与非血源性感染患者间HCV基因型构成比差异无统计学意义。基因1b型的HCV RNA含量高于2a型,且差异有统计学意义。HCV感染的不同程度肝病患者的基因型分布差异有统计学意义,基因1b型比率显著高于其他基因型。结论长春地区丙型肝炎病毒基因型流行株为1b和2a型;HCV基因型与感染途径无明显相关性;基因lb型的病毒含量明显高于2a型;HCV基因型与慢性丙型肝炎的严重程度及肝硬化、肝癌的产生有一定的相关性。     

HCV Ag或HCV RNA试剂用于筛查丙型肝炎病毒感染样本的性能比较

目的比较丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗原(HCV Ag)与HCV RNA试剂检测HCV感染的性能。方法应用ABBOTT ARCHITECT HCV Ag和Abbott RealTime HCV RNA试剂分别检测经Ortho和DiaSorin公司抗HCV EIA试剂以及CHIRON公司RIBA HCV 3.0 SIA和MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测的304份血浆样本(抗-HCV阳性139份,抗-HCV阴性165份)。结果 139份抗-HCV阳性样本中,HCV RNA和HCV Ag试剂的阳性检出率分别为54.0%(75/139)和27.3%(38/139),HCV RNA试剂敏感性明显高于HCV Ag试剂(P0.01);检测165份抗-HCV阴性样本中,HCV RNA和HCV Ag试剂检测均为阳性的样本有5份,分别检出7份和2份单独阳性样本,特异性分别为7.3%(12/165)和4.2%(7/165),差异无统计学意义(P0.05);应用HCV Ab+HCV RNA或HCV Ab+HCV Ag筛查HCV感染,阳性检出率分别为49.7%(151/304)和48.0%(146/304),差异无统计学意义(P0.05)。在94份HCV Ag和HCV RNA阳性样本检测中,HCV Ag试剂阳性率随样本HCV RNA载量的升高而增加,HCV RNA载量与检测HCV Ag阳性率呈正相关。结论 HCV Ag或HCV RNA作为HCV筛查的补充试验方法,可有效降低HCV Ab窗口期的漏检率。     

丙型肝炎负链RNA的检测及意义

检测HCV（－）RNA是了解HCV复制的有效手段。本研究采用HCV负链RNA检测法检查5例慢性活动性丙型肝炎病人的肝组织及10例慢性活动性肝炎病人的血浆及淋巴－单核细胞。HCV负链RNA在前者均被检出，但在后者未被检出。将一份HCV负链RNA阳性的肝组织提取液作10－2稀释后仍可测得阳性结果，说明肝脏为HCV复制的主要器官；该方法可用于疑难病人肝穿刺标本的检测及其它研究。     

HCV多表位抗原的选择及结构分析

目的：设计HCV复合多表位抗原,分析其空间结构,探讨其用于疫苗研究和HCV-Ag检测的潜在可行性。方法：选择HCV多表位抗原并将其串联成HCV复合多表位抗原基因B2,利用软件和网站分析其空间结构。结果：该HCV复合多表位抗原具备涵盖多种天然表位的抗原特性,且二级结构提示具有形成T细胞位点的倾向,易于诱导T细胞介导的细胞免疫应答,三级结构有良好的亲水性,可能激发良好的体液免疫应答。结论：该HCV复合多表位抗原选择合理,空间结构分析能激发良好的免疫反应,有望用于疫苗研究和HCV-Ag检测。     

献血清HCV核心抗原的初步检测及意义

<正>丙型肝炎主要经血液传播,目前尚没有特殊的预防和治疗方法。我国《献血法》规定,献血者的血液必须经过包括抗-HCV在内的初复检合格后方可用于临床,然而,抗-HCV的出现为HCV感染后的6～12周（窗口期）,所以,献血者抗-HCV检测阴性者不能排除携带HCV的可能。此时通过HCV核心抗原（HCV C抗原）的检测可提高检出率,降低 HCV漏检的风险。作者采用美国强生公司 HCV C抗原检测试剂对1100份无偿献血者血样进行检测,报告如下。 本次检测正常的血样824份中没有检出 HCV C抗原,可能是由于检测数量小的原因。检测HBsAg（+）者43份中有     

HCV/HBV联合抗原免疫原性研究

目的 探讨HCV/HBV联合抗原PCX/S免疫原性。方法 将纯化的HCV复合多表位抗原蛋白PCX与HBV的S蛋白按一定比例混合并免疫小鼠,用ELISA的方法检测抗-HBs和抗-HCVAb;~3H-TdR掺入法检测免疫小鼠T淋巴细胞增殖;~(51)Cr释放法检测免疫小鼠特异性CTL杀伤作用。结果 免疫后5、10及15μg的3组均能诱导抗-HBsAb和抗-HCVAb,但抗HCVAb水平明显低于抗-HBsAb水平。免疫小鼠可诱发针对PCX或S蛋白的CTL反应,前者更明显,并刺激T细胞增殖。结论 HCV/HBV联合抗原PCX/S蛋白可诱导特异性免疫应答,为HCV/HBV双价疫苗的研究提供一定实验基础。