中和抗体和细胞免疫在病毒疫苗有效性评价中的相互关系

在病毒疫苗有效性评价中,中和抗体和细胞免疫是相辅相成的两个方面。但是,因为疫苗种类不同,针对不同病毒,其诱导中和抗体和细胞免疫的机制也不同,因此,对疫苗有效性评价尚无统一的标准。然而,用科学的方法检测疫苗诱导的中和抗体和细胞免疫,针对不同的病毒疫苗建立科学有效的检测标准,对疫苗有效性评价及发展均有重要意义。本文就上述问题探讨中和抗体和细胞免疫在病毒疫苗有效性评价中的相互关系。     

HCV疫苗临床试验的研究进展

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染可引起慢性肝炎,最终导致肝衰竭、肝硬化和肝癌。目前尚无有效的HCV疫苗,其治疗仍以标准化方案聚乙二醇干扰素联合利巴韦林为主。其疗程长,费用高,副作用大,且不能从根本上解决慢性尤其是难治性丙肝的治疗难题,因此,HCV疫苗的研究迫在眉睫。本文就HCV疫苗临床试验的研究进展作一综述。     

丙型肝炎病毒NS3基因疫苗质粒的构建、表达及其体液免疫应答

目的构建基于Ii分子的丙型肝炎病毒(HCV)内源性靶向基因疫苗质粒,并检测其在真核细胞中的表达及免疫小鼠诱导的体液免疫应答。方法通过3轮PCR,以HCV-NS3的Th1表位(1248～1261aa)取代Ii链CLIP片段编码基因,构建基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗质粒,转染COS-7细胞,RT-PCR法检测其在mRNA水平的表达;用内源性靶向基因疫苗pHCV-NS3-Th1和非靶向基因疫苗pHCV-NS3经股四头肌肌肉免疫BALB/c小鼠,以生理盐水、pCI-neo和pCI-neo-Ii作为对照,检测小鼠的体液免疫应答水平。结果转染细胞中,内源性靶向基因疫苗质粒在mRNA水平获得表达;对BALB/c小鼠的免疫结果显示,只有pHCV-NS3组小鼠可以检测到针对HCV-NS3的特异性抗体,抗体滴度可达1:1024。结论已成功构建了基于Ii分子的HCV内源性靶向基因疫苗质粒,其能够在真核细胞中表达,但不能刺激小鼠产生HCV-NS3特异性抗体。     

一犬咬伤15人接种狂犬病疫苗的效果观察

<正>2009年10月,北京市昌平区某镇发生一起1只藏獒咬伤多人事件,共有17人致伤,其中15人于全程接种狂犬病疫苗后采集静脉血,检测抗狂犬病病毒中和抗体,现将结果报道如下。     

精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗的效果观察

为提高狂犬病疫苗的质量 ,对辽宁生物技术公司生产的精制地鼠肾细胞狂犬病疫苗进行了临床观察 ,经过第Ⅰ阶段 35人和第Ⅱ阶段 310人的暴露前和暴露后注射的观察 ,结果显示仅有轻微的副反应 ,无中、强度反应 ,总反应率 2 0 % (7/35 ) ,低于法国维尔博疫苗的 30 30 % (10 /30 )。无论是暴露前或暴露后注射 ,全程注射后抗体阳转率均为 10 0 % ,中和抗体GMT为 4 17～ 12 0 1IU/ml。该疫苗不仅副反应轻微 ,而且免疫原性良好     

脊髓灰质炎液体疫苗免疫应答

目的为了研究液体疫苗免疫应答对我省南通、淮安两个点进行了正常人群免疫成功率及疫苗效价检测。方法脊髓灰质炎中和抗体测定法、脊髓灰质炎疫苗效力试验。结果两个点113人总免疫成功率分别为I型96.46%、Ⅱ型96.46%、Ⅲ型95.58%。液体免疫效价≥5.00TCID50/人份。结论免疫阳转率相当高,与往年的结果相符。表明城乡初免儿童已形成了有效的免疫屏障。液体疫苗免疫应答效果显著。     

输血后丙型肝炎病毒NS4区抗体的动态化及其诊断意义

利用重组ＮＳ４抗原及合成肽５－１－１抗原分别检测５例输血后丙型肝炎患者的系列血清１３６份，并与ＨＣＶ总抗体及ＨＣＶＲＮＡ检测结果比较，发现抗ＮＳ４抗体的动态经虽然有两种模式。但在哆数情况下为一种模式，即抗体阳转后很少转阴，并且其动态变化基本与总抗体相似。同时发现２例病人抗ＮＳ４抗体阳转时间早于总体因此，推测ＨＣＶ检测试剂中增加ＮＳ４抗原可能对提高ＨＣＶ诊断试剂的灵敏度有一定意义。     

提纯流行性乙型脑炎疫苗不同免疫剂量的效果

提纯流行性乙型脑炎疫苗(下简称提纯乙脑疫苗)效价稳定,可维持3年以上。该疫苗接种儿童后的体温反应随着疫苗抗原量的减少而有规律地相应下降。提纯苗不同抗原量接种儿童后,血清中和抗体阳转率均达100%,几何平均值为302～382。     

H5N1人用禽流感疫苗免疫原性检测方法的建立

目的确定人用禽流感疫苗免疫原性检测方法。方法用禽流感病毒R1203株制备疫苗,以不同剂量免疫家兔,检测血清中的血凝抑制抗体和中和抗体,并进行交叉血凝抑制试验、交叉单向免疫扩散试验和交叉中和试验。结果R1203株疫苗接种家兔1针后14 d,中和抗体和血抑抗体滴度均较低;第2针后14 d均明显升高。血抑抗体量-效反应不明显,而中和抗体量-效反应明显。交叉血凝抑制试验显示,异型之间普遍有交叉反应,滴度大部分不低于1∶40。单向免疫扩散试验显示异型之间无交叉反应。禽流感疫苗抗血清不能中和人流感病毒,但能中和同型病毒(R1194),滴度可达1∶240。结论中和抗体能正确反映疫苗的免疫原性;检测中和抗体的方法可用于禽流感疫苗的效力试验。     

丙型肝炎病毒感染动物模型研究进展

丙型肝炎病毒(HCV)是对全球公众健康影响较为严重的一种病原,目前尚缺乏有效疫苗及针对性强的药物对其进行防控,究其原因是缺少有效的动物模型,使其致病机理研究较为薄弱。因此,建立一种有效的HCV感染动物模型是HCV研究工作中的重要环节。本文简要介绍了迄今为止国内外已建立的HCV感染动物模型的特点及其应用前景。     

第6套丙型肝炎病毒抗体诊断试剂国家参考品的研制

目的研制第6套丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗体诊断试剂国家参考品。方法从我国10省市血站及生物制品企业的供血员中筛选候选参考品血浆样本304份,采用国内外27种检测试剂进行HCV Ag、HCV Ab及HCV RNA检测后,应用CHIRON公司的RIBA HCV 3.0 SIA及MP公司HCV BLOT 3.0试剂进行确证检测;利用Abbott Real Time HCV GenotypeⅡ试剂,对HCV RNA阳性样本进行HCV基因型别检测,并以核苷酸序列测定方法对分型样本进行确认。通过分析上述检测数据,从中拟选出协作标定样本,邀请国内外生产或市场使用占较大份额的11个实验室参加该套参考品标定。取最低检出限参考品4份,分别于4、25和-20℃放置1、3、5、7、9和11 d,或置-70℃反复冻融1~6次,进行稳定性试验。结果选出65份样品组成第6套HCV抗体诊断试剂国家参考品,其中包括阴性参考品30份,阳性参考品30份,最低检出限参考品4份,精密性参考品1份。应用11家的16种HCV抗体试剂分别平行3次标定检测,阴、阳性参考品符合率均≥29/30;最低检出限参考品检测L1~L3均为阳性,L4为阴性;精密性参考品检测CV在1%~11%之间。不同温度保存11 d及-70℃保存反复冻融6次的检测结果均符合要求(P0.05)。结论建立了应用于血液筛查丙型肝炎病毒抗体试剂质量控制的第6套HCV抗体国家参考品。     

丙型肝炎病毒多表位基因核酸疫苗的构建及其免疫原性

目的构建丙型肝炎病毒(HCV)多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,用该重组质粒免疫BALB/c小鼠,并检测其免疫原性。方法用BamHⅠ和HindⅢ双酶切含有HCVC区、E2区模拟表位和NS3~NS5区细胞表位串联基因的原核表达载体pQE30-CtEm,克隆入真核表达载体pcDNA3.1(-),脂质体瞬时转染CHO细胞,并检测其表达。以100μg重组质粒免疫BALB/c小鼠,检测其体液免疫和细胞免疫效果。结果所构建的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm在CHO细胞中能获得有效表达。该质粒免疫小鼠后可诱导高水平的抗体,特异性淋巴细胞增殖反应、IFN-γ水平及CTL活性均明显高于空载体和生理盐水对照组。结论已成功构建HCV多表位基因的真核表达载体pcDNA3.1(-)-CtEm,免疫小鼠后可诱导特异性体液免疫和细胞免疫应答。     

关于HCV不同区段抗原的反应性研究

目的　探讨各种丙型肝炎病毒 (HCV)抗原在诊断中的作用及其与HCVRNA的关系。方法　利用HCV不同区段抗原抗 -HCV酶联免疫试验 (EIA)和逆转录聚合酶链反应法 (RT PCR) ,对不同临床型HCV患者进行检测。结果　各组患者均以抗 NS3和抗 C阳性率最高。但均有一定比例患者抗 NS4和抗 NS5阳性。与各单个片段抗 HCV阳性率相比 ,抗 HCV总抗体阳性率最高。结论　NS3和C抗原在检测抗 HCV中起很重要作用 ,但NS4和NS5抗原在抗 HCVEIA中的作用也不容忽视。联合应用不同区段HCV抗原将大大提高抗 HCVEIA试剂的灵敏度。     

狂犬病病毒基因疫苗和精制疫苗诱导小鼠产生的免疫应答

目的 比较重组疫苗与精制疫苗诱导小鼠的免疫应答,为研制新型狂犬病疫苗奠定基础。方法 应 用含狂犬病病毒（ＲＶ）糖蛋白基因的重组质粒ｐｃＤＮＡ３－ＲＧＰ（重组疫苗）和槽制灭活狂大病病毒（精制疫苗）分别免疫小 鼠后检测细胞免疫和体液免疫水平。结果 重组疫苗３次免疫与精制疫苗１次免疫的体液免疫水平相当,重组疫苗 ２次免疫与槽制疫苗ｌ次免疫的细胞免疫水平相当,重组疫苗与精制疫苗免疫小鼠的保护率分别为３０％和８４．６％。 结论 重组疫苗诱导小鼠产生的免疫应答水平低于精制疫苗。     

HCV Ag或HCV RNA试剂用于筛查丙型肝炎病毒感染样本的性能比较

目的比较丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)抗原(HCV Ag)与HCV RNA试剂检测HCV感染的性能。方法应用ABBOTT ARCHITECT HCV Ag和Abbott RealTime HCV RNA试剂分别检测经Ortho和DiaSorin公司抗HCV EIA试剂以及CHIRON公司RIBA HCV 3.0 SIA和MP Biomedicals Asia Pacific Pte公司确证试剂检测的304份血浆样本(抗-HCV阳性139份,抗-HCV阴性165份)。结果 139份抗-HCV阳性样本中,HCV RNA和HCV Ag试剂的阳性检出率分别为54.0%(75/139)和27.3%(38/139),HCV RNA试剂敏感性明显高于HCV Ag试剂(P0.01);检测165份抗-HCV阴性样本中,HCV RNA和HCV Ag试剂检测均为阳性的样本有5份,分别检出7份和2份单独阳性样本,特异性分别为7.3%(12/165)和4.2%(7/165),差异无统计学意义(P0.05);应用HCV Ab+HCV RNA或HCV Ab+HCV Ag筛查HCV感染,阳性检出率分别为49.7%(151/304)和48.0%(146/304),差异无统计学意义(P0.05)。在94份HCV Ag和HCV RNA阳性样本检测中,HCV Ag试剂阳性率随样本HCV RNA载量的升高而增加,HCV RNA载量与检测HCV Ag阳性率呈正相关。结论 HCV Ag或HCV RNA作为HCV筛查的补充试验方法,可有效降低HCV Ab窗口期的漏检率。     

人用H5N1禽流感裂解疫苗的制备工艺

目的设计3种工艺,制备不同裂解程度的禽流感疫苗,并观察其免疫效果。方法用禽流感毒种R1203株制备3种禽流感疫苗(全病毒、裂解-1和裂解-2),并分别以不同剂量免疫大鼠和家兔,肌肉接种2针(间隔14d),初免后14d和28d静脉采血,检测动物血清中血凝抑制抗体和中和抗体。结果两种动物在疫苗接种1针后14d,血抑抗体和中和抗体滴度均较低;接种2针后14d,均显著高于1针;裂解-2疫苗接种两种动物后的抗体反应均高于其他两种疫苗,且家兔的中和抗体量-效反应明显。结论裂解-2疫苗的工艺优于其他两种疫苗,其中和抗体能正确反映疫苗的质量。     

丙型肝炎病毒感染对内皮细胞趋化因子配体1表达的影响

目的探讨丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)感染对肝细胞及血管内皮细胞趋化因子配体1[chemokine(C-X3-C motif)ligand 1,CX3CL1]表达的影响。方法分别以0.5 MOI感染性HCV病毒颗粒(cell-culture-derived infectious HCV,HCVcc)感染Huh7细胞48 h、以不同剂量(0.1、0.2、0.5、1μg)的HCV RNA转染HepG2细胞48 h、以0.5和1.0 MOI HCVcc感染过表达人CD81的HepG2细胞48 h后,抽提各步细胞总RNA,采用Real-time PCR法检测HCV感染肝细胞对胞内CX3CL1 mRNA表达的影响。分别以1.0 MOI HCVcc刺激HUVEC 48 h、以0.1、0.2、0.4、1.0 MOI HCVcc刺激人脑微血管内皮细胞(human brain microvascular endothelial cells,HBMEC)48 h、以0.5 MOI HCVcc刺激Huh7和人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)共培养细胞体系48 h,抽提各步细胞总RNA,采用Real-time PCR法检测HCVcc刺激内皮细胞对胞内CX3CL1表达的影响。结果与未感染细胞对照相比,0.5 MOI HCVcc感染的Huh7细胞中CX3CL1 mRNA水平上调2倍多(P0.05),随着HCV RNA转染HepG2细胞剂量的增加,CX3CL1 mRNA水平随之升高,组间差异有统计学意义(P0.05),0.5和1.0 MOI HCVcc感染过表达CD81的HepG2细胞,胞内CX3CL1 mRNA水平分别上调7.56和13.91倍(P0.05)。与未刺激细胞对照相比,HCVcc刺激HUVEC可引起胞内CX3CL1的mRNA水平上调5倍多(P0.05);与HCVcc未刺激的共培养组相比,与HCVcc感染的Huh7细胞共培养的HUVEC胞内CX3CL1 mRNA水平上调约13倍,HUVEC受HCVcc刺激后,CX3CL1 mRNA水平的上调幅度高于HUVEC单独培养组(P均0.05);与未刺激细胞对照相比,0.1、0.2、0.4和1.0 MOI HCVcc刺激HBMEC可引起胞内CX3CL1 mRNA水平上调1.71、2.37、2.85和3.05倍(P0.05)。结论 HCV感染可引起肝细胞和血管内皮细胞CX3CL1表达上调,HCVcc感染肝细胞释放的细胞因子也是促进内皮细胞CX3CL1表达上调的刺激物,为HCV感染引起肝外疾病产生的机制提供了参考。     

柯萨奇病毒A组16型疫苗的研发进展

柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)是引起手足口病(hand,foot and mouth desease,HFMD)的主要病原体之一。研发CA16疫苗对控制HFMD流行具有重要意义。本文探讨了CA16疫苗研发的必要性和可行性,并对CA16疫苗中和抗体检测方法、动物模型、重组病毒样颗粒(recombinant virus-like particles,rVLPs)疫苗及灭活疫苗等相关的研发进展作一综述。     

重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗与DNA疫苗免疫原性比较

目的比较重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗与DNA疫苗的免疫原性。方法用载体疫苗和DNA疫苗分别免疫BALB/c小鼠,采用ELISA和ELISPOT法检测小鼠的体液免疫和细胞免疫水平。结果两种疫苗的血清抗体水平分别为135和104 mIU/ml,百万淋巴细胞中SFC数目分别为550和314,载体疫苗均优于DNA疫苗。结论重组乙型肝炎痘病毒载体疫苗较DNA疫苗具有更高的免疫原性。     

6和8月龄婴儿接种肠道病毒71型疫苗的安全性及免疫原性比较

目的 比较6和8月龄婴儿接种肠道病毒71型(enterovirus type 71,EV71)疫苗后的安全性及免疫原性。方法采用随机和对照原则选取山东、湖南、山西和陕西4个省份6和8月龄健康婴儿共540人,按月龄分为2组,分别在入组第0天采血并接种第1剂EV71疫苗,第30天接种第2剂EV71疫苗,60 d后采血。分离血清,微量中和试验检测抗体滴度;观察并记录每剂疫苗接种后全身及局部不良事件。结果 6和8月龄婴儿最终纳入分析人数分别为243和236人。总体安全性结果和分针次安全性结果均显示,6和8月龄组婴儿总体不良事件、全身不良事件及局部不良事件发生率差异均无统计学意义(χ²=0.000～5.234,P> 0.05)。6月龄组婴儿免疫前EV71中和抗体阳性率和几何平均滴度(GMT)均高于8月龄组,差异均有统计学意义(χ²_阳性率=18.812,t_GMT=2.51,P均<0.05);6和8月龄组婴儿EV71中和抗体阳转率分别为98.8%和99.2%,差异无统计学意义(χ²