乳酸菌谷氨酸脱羧酶的酶学性质研究

本文对一株乳酸菌所产谷氨酸脱羧酶的酶学性质进行了较系统的研究,其中包括酶的热稳定性、pH稳定性及温度、pH和一些化学物质对酶活的影响。结果表明:此酶的最适温度为52℃,最适pH为4.5,米氏常数Km=24mmol。PLP、VB6及Ca2 在一定程度上都能促进酶活,且在含量小于100μmol时,作用程度为PLP>VB6>Ca2 。乙酸浓度小于0.05mol/L也能提高酶活力。     

米糠谷氨酸脱羧酶的酶学性质研究

研究了米糠谷氨酸脱羧酶(GAD)的酶学性质。结果表明:米糠GAD的最适温度为40℃,最适pH5.6,米糠GAD耐热性较差,60℃下保温0.5 h后,酶活下降至65%,保温1 h,酶活下降至48%,而70℃时酶就完全失活,而此酶在pH5.5～9都可以保持84%以上的酶活力。米糠GAD对底物和辅酶PLP的Km分别为0.028 45 mol/L和1.13μmol/L。KI、Ag~(2+)、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca~(2+)对米糠GAD的活性有较强的激活作用,提高了底物与米糠GAD的亲和力。     

玉米胚谷氨酸脱羧酶的性质

研究了玉米胚谷氨酸脱羧酶(GAD)的性质。结果表明:玉米胚GAD的最适温度为40℃,最适pH为5.7,其热稳定较差,60℃下保温1 h,酶活下降至39%,85℃时酶完全失活,而此酶在pH4.5～7.5可保持80%以上的酶活。玉米胚GAD对Glu的Km值和Vmax分别为51.87 mmol/L和1.807 mg/min。另外,KCl、NaCl和SDS对玉米胚GAD活性有较大的抑制作用,而Ca2+对此酶的活性有较强的激活作用,可提高底物与玉米胚GAD的亲和力。     

米糠谷氨酸脱羧酶的分离纯化及酶学性质研究

利用（NH4）2SO4分级沉淀、DEAE-Sephrose FF离子交换色谱技术分离纯化米糠谷氨酸脱羧酶（GAD）。米糠GAD纯化倍数为8·8,比活达到了30·1U/mg,酶活回收率为45·5%。同时对米糠GAD酶学性质进行了研究,结果表明,最适温度为40℃,耐热性较差;最适pH5·5,在pH5·5～9都可以保持较高酶活。米糠GAD对底物和辅酶PLP的Km分别为28·45、1·13μmol/L。KI、Ag+、SDS、乙酸对米糠GAD的活力有较大的抑制作用,而Ca2+对米糠GAD的活性有较强的激活作用。      

大肠杆菌L-谷氨酸脱羧酶定点突变及其酶学性质初步研究

L-谷氨酸脱羧酶（L-glutamate decarboxylase,GAD）是生物法生产GABA的关键酶,但是野生型L-谷氨酸脱羧酶的最适pH过低,这限制了它的工业应用。本文对编码来源于大肠杆菌谷氨酸脱羧酶的gadB基因进行了定点突变,分别构建了表达野生型GadB和突变型GadBΔHT的基因工程菌。在获得高表达的基础上,对两个酶的最适温度、最适pH、温度稳定性和pH稳定性进行了系统研究,证实了突变酶GadBΔHT在保持了与野生型相当的催化活性的前提下,表现出更广泛的pH适应能力,在pH3.4⁶.2的范围内,仍能保持50%以上的催化活性。突变酶更能适应工业生产的需要,降低生产成本,对于实际应用具有重要价值。      

南瓜谷氨酸脱羧酶酶学特性及γ-氨基丁酸富集条件

对生鲜南瓜(Cucurbita moschata)所含谷氨酸脱羧酶(Glutamate decarboxylase,GAD)的最适反应温度、最适pH、热稳定性和冷冻稳定性等酶学特性进行研究,并利用其富集γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA),探索了反应时间、南瓜品种、缓冲体系、南瓜及味精添加量、料水比对富集效果的影响。结果表明,南瓜GAD最适反应温度为30~35 ℃,最适pH为5.8。南瓜GAD对热比较敏感,50 ℃保温30 min,酶活力损失20%,70 ℃以上保温30 min可导致酶活力完全丧失。冷冻对GAD影响较小,但长期冷冻仍会导致酶活力损失,冷冻8周酶活力损失36%。GABA最适富集条件为:以pH5.8,0.2 mol/L磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液作为反应溶液,南瓜与缓冲液比例为1:3,南瓜添加量25%,味精添加量1.5%,30 ℃反应18 h,反应液中GABA浓度可达7633.2 mg/L,转化率为93.3%,单位质量南瓜GABA富集量为30.5 mg/g,与未富集时相比提高了132倍。     

乳酸乳球菌谷氨酸脱羧酶B重组质粒的构建、异源表达及酶学性质的研究

目的：旨在研究乳酸菌谷氨酸脱羧酶B(Decarboxylation of glutamic acid,gadB)的异源表达及其酶学性质。方法：以Lactocus lactis subsp. lactis Il1403的gadB基因序列为目的基因,实现gadB在大肠杆菌中的异源表达,探究其酶学性质,实现高效催化合成γ-氨基丁酸(γ-Aminobutyric acid,GABA)。结果：重组菌经IPTG诱导gadB过量表达后,进一步采用Ni²⁺亲和层析纯化gadB,经SDS-PAGE分析,在54 ku处出现明显条带,经检测可溶性蛋白含量约占70%。对酶学性质进行研究,gadB的最适pH值为4.8,最适反应温度为40℃,Na⁺和Mn²⁺限制gadB的酶活力,而Mg²⁺和Zn²⁺明显刺激酶活。对酶底物浓度进行研究,谷氨酸脱羧酶B的K_m为123.83 mmol,V_max为0.79 mmol/min。结论：该研究探索了gadB的酶学性质,为基因工...     

大豆谷氨酸脱羧酶分离纯化及酶学性质研究

对大豆中的谷氨酸脱羧酶(GAD)进行了提取、纯化及酶学性质的研究.采用硫酸铵分级沉淀技术对大豆中GAD进行了纯化,该酶被纯化了4.7倍.纯化后的大豆GAD最适温度为40℃,最适pH为5.9,大豆GAD的热稳定性较差,在80℃几乎失去活性,但该酶在pH5.0～8.0较稳定,能保持很好的酶活.大豆GAD对底物谷氨酸的Km值为19.4 mmol/L.Mg2、KCl对大豆GAD活性影响不大,但KI、Ag+、SDS对大豆GAD有抑制作用.Ca2+对大豆GAD有激活作用,当Ca2浓度为1 500 μmol/L时,对大豆GAD激活作用最强,相对酶活能达到160％.大豆GAD与其他植物GAD相比存在差异,并证实可被Ca2+激活.     

利用米糠谷氨酸脱羧酶富集γ-氨基丁酸的新研究

通过一系列实验对传统的直接法与"提酶法"富集米糠γ-氨基丁酸(GABA)进行了比较,结果表明提酶法进一步提高了GABA的产率并且成本几乎没有增加."提酶法"即采用米糠谷氨酸脱羧酶(GAD)粗酶液外加谷氨酸钠来富集GABA,产率达到3 789.1 mg/100 g米糠,在此条件下可进一步采用固定化酶的方法固定化GAD粗酶液中的GAD,从而不仅很大程度上提高GAD的利用率,更方便了后期GABA的纯化工作,适合工业化生产要求.     

谷氨酸脱羧酶基因工程改造研究进展

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是一种具有重要生理功能的天然氨基酸,广泛应用在医药、食品、化工等行业。利用谷氨酸脱羧酶催化法合成GABA因其反应条件温、对环境友好和原料易得已成为当前研究的热点。该研究论述了催化合成GABA关键酶谷氨酸脱羧酶的分子改造、基因工程菌构建等研究进展。     

纯种乳酸菌接种发酵辣椒综合品质特性研究

为了获得高产γ-氨基丁酸（GABA）且综合性能优良的乳酸菌,以10株乳酸菌作为出发菌株对发酵辣椒进行纯种接种发酵,采用逼近理想解排序（TOPSIS）法分别从发酵产酸、抑菌性、亚硝酸盐积累以及生成γ-氨基丁酸能力等方面进行多因素综合评价。结果表明,发酵乳杆菌与食果糖乳杆菌的产酸速度较好,最终产酸量分别为0.020 8 g/100 g、0.020 3 g/100 g;乳链球菌和戊糖乳杆菌对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌作用最明显,其抑菌圈直径d=11 mm;乳酸片球菌产亚硝酸盐能力最弱,最终含量为1.7 mg/kg;食果糖乳杆菌与乳酸片球菌产GABA能力强,分别为1.97 mmol/L、1.86 mmol/L。采用TOPSIS法对10株菌种进行多因素综合评价,最终得到发酵乳杆菌与食果糖乳杆菌为综合品质特性较好的发酵优良菌株。     

分离自藏灵菇的乳酸菌的益生特性

从藏灵菇中分离纯化5株乳酸菌,初步鉴定2株为嗜酸乳杆菌,3株为乳酸乳球菌。选取其中2株菌研究其益生特性。结果表明,从藏灵菇中分离出的乳酸菌具有良好的益生特性,2株乳酸菌在pH值为4～6可生长良好;耐热范围为30～60℃;胆盐耐受性为0.1%～0.5%;发酵液对金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌等肠道病原菌有抑制作用;对抗生素有不同程度的耐药性。     

Antioxidant properties of different milk fermented with lactic acid bacteria and yeast

The antioxidant properties of nine different samples of freshly drawn, pasteurised and UHT milk were examined before and after fermentation with several lactobacilli, individually and in combination with the yeast Saccharomyces boulardii. The results showed no statistical differences for the content in proteins, fats and carbohydrates of the different milk. The antioxidant properties of the unfermented milk were positively affected by the thermal treatment. All samples of fermented milk had a greater antioxidant activity than unfermented but only for the freshly drawn milk that increase was significantly different. The co‐incubation of lactobacilli with the yeast determined a stronger antioxidant activity especially for the freshly drawn milk. The stability of the tested strains during storage in standard conditions was determined in UHT fermented milk to enable a possible use in probiotic food production. The results showed that the yeast incubated with lactobacilli determined an improvement of the viability of bacteria.     

Functional milk beverage fortified with phenolic compounds extracted from olive vegetation water, and fermented with functional lactic acid bacteria

Functional milk beverages (FMB100 and FMB200) fortified with phenolic compounds (100 and 200 mg/l) extracted from olive vegetable water, and fermented with γ-amino butyric acid (GABA)-producing (Lactobacillus plantarum C48) and autochthonous human gastro-intestinal (Lactobacillus paracasei 15N) lactic acid bacteria were manufactured. A milk beverage (MB), without addition of phenolic compounds, was used as the control. Except for a longer latency phase of FMB200, the three beverages showed an almost similar kinetic of acidification, consumption of lactose and synthesis of lactic acid. Apart from the beverage, Lb. plantarum C48 showed a decrease of ca. Log 2.52-2.24 cfu/ml during storage. The cell density of functional Lb. paracasei 15N remained always above the value of Log 8.0 cfu/ml. During fermentation, the total concentration of free amino acids markedly increased without significant (P > 0.05) differences between beverages. The concentration of GABA increased during fermentation and further storage (63.0 ± 0.6-67.0 ± 2.1 mg/l) without significant (P > 0.05) differences between beverages. After fermentation, FMB100 and FMB200 showed the same phenolic composition of the phenol extract from olive vegetable water but a different ratio between 3,4-DHPEA and 3,4-DHPEA-EDA. During storage, the concentrations of 3,4-DHPEA-EDA, p-HPEA and verbascoside of both FMB100 and FMB200 decreased. Only the concentration of 3,4-DHPEA increased. As shown by SPME-GC-MS analysis, diactetyl, acetoin and, especially, acetaldehyde were the main volatile compounds found. The concentration of phenolic compounds does not interfere with the volatile composition. Sensory analyses based on triangle and paired comparison tests showed that phenolic compounds at the concentrations of 100 or 200 mg/l were suitable for addition to functional milk beverages.     

从酸菜液中筛选产γ-氨基丁酸的菌株

从腌制的酸菜液中,采用乳酸菌分离纯化法,经初筛、复筛得到一株产γ-氨基丁酸的菌株,编号为LpL-0212,对菌株进行形态学观察和生理生化实验及16S rDNA、atpA基因序列分析鉴定,鉴定该菌株为Enterococcus faecium。在含2%谷氨酸钠的TYG发酵培养基中静置培养24h,经薄层层析定性、高效液相色谱法测定,发酵液中的γ-氨基丁酸含量可达到102.37μmol/L。     

不同乳酸菌发酵对菠萝浆品质的影响

以菠萝浆为原料,添加干酪乳杆菌、植物乳杆菌和肠膜状明串珠菌单一或复配发酵,测定发酵24 h后的蛋白酶酶活、超氧化物歧化酶（SOD）酶活、总酚含量、DPPH自由基清除能力、挥发性物质及冻干成粉后的维生素C含量。结果表明,乳酸菌单一发酵效果整体上要好于复配发酵,干酪乳杆菌单独发酵可使菠萝浆的SOD酶活保持在97.70 U/g,总酚含量达到最高（0.51 mg没食子酸当量（GAE）/g）;植物乳杆菌单独发酵菠萝浆时蛋白酶活性最好（821.00 U/mL）,同时DPPH自由基清除能力最高,达到5.37 μmol Trolox当量（TE）/g;肠膜状明串珠菌单独发酵组的维生素C含量最高,为4.73 mg/g;菠萝浆经干酪乳酸菌和植物乳杆菌单独发酵后,鉴定出的挥发性成分分别达到29和28种。综上,选择干酪乳杆菌或植物乳杆菌单独发酵菠萝浆能获得较好的品质。     

锦州虾油小黄瓜中耐盐乳酸菌的生物性能研究

对从锦州虾油小黄瓜中分离筛选的6株耐盐乳酸菌进行抗氧化和形成风味物质等生物性能研究,结果表明菌株L7对羟自由基、DPPH自由基、超氧阴离子自由基清除作用明显,清除率均分别为38.56％、33.65％、36.65％;对Fe3+有较强的还原能力,与还原能力成正比的吸光度值为0.875;在发酵过程中,形成风味物质乙醛和双乙酰分别为5.02μg/mL和3.65μg/mL.通过特征性耐盐性乳酸菌的生物性能分析,获得高活性的菌株L7,对改善锦州虾油黄瓜产品品质具有一定的应用前景.     

不同乳酸菌发酵豆乳的研究进展

发酵豆乳是利用单一或复合乳酸菌发酵制成的一种类似于酸奶的健康饮品。乳酸菌发酵豆乳可以极大程度的降低豆腥味,延长保藏期,还可以保留豆乳的营养价值,同时乳酸菌还可以调节人体肠道的微生态平衡,是一种价格低廉,功能丰富的健康饮品。该文对发酵豆乳的营养保健功能及发酵菌株形式进行了综述。     

乳酸菌在青方腐乳中的应用研究

对从青方腐乳中分离的植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）、短小奇异菌（Atopobium parvulus）和片球菌（Pediococcus）在青方腐乳中的应用进行了研究。结果表明，这3株乳酸菌对青方腐乳的成熟和风味均有一定的促进作用，其中，片球菌对青方腐乳风味的作用效果最好，改变了腐乳中游离氨基酸的含量和呈味特点，并促进大豆蛋白质的水解，降低了腐乳的硬度、坚实性、粘度和黏附性，使腐乳的感官品质得到改善，是改进青方腐乳风味的协同菌株。     

乳酸菌的生物拮抗作用

论述了乳酸菌的生物拮抗作用,包括对致病菌和乳酸菌之间的拮抗。并简要论述了产生拮抗作用的可能因素或机理,为乳酸菌进一步开发提供一种理论依据。