卵叶娃儿藤生物碱对宫颈癌细胞株HeLa的体外作用

为了观察卵叶娃儿藤总生物碱[Tylophora ovata(Lindl.)Hook.ex Steud,alkaloids TOHa]体外抑制人宫颈癌细胞株HeLa增殖、诱导细胞凋亡的作用,将不同浓度的TOHa与HeLa细胞在体外培养,用MTT法观察TOHa对HeLa细胞的生长抑制作用,测定其在490nm的OD值;用细胞形态学、AnnexinV/PI双标记检测细胞凋亡。结果表明,TOHa能抑制HeLa细胞的增殖和活力,呈现作用时间和剂量的依赖关系。HeLa细胞经TOHa作用后,Annexin V /PI-表达升高,Giemsa染色后出现凋亡细胞的特征性改变。     

牡蛎活性肽体外诱导HeLa细胞凋亡及其作用机制

采用复合酶法水解制备牡蛎活性肽,并运用Sephadex G-25柱层析法对酶解液中的肽类进行分离纯化与鉴定;以磺基罗丹明B(SRB)比色法,台盼蓝计数法,Hochest/PI双荧光染色法和DNA Ladder等检测牡蛎活性肽诱导HeLa细胞凋亡的方式,并采用流式细胞术和实时定量PCR分析牡蛎抗活性肽诱导HeLa细胞凋亡的作用机制。经分离纯化得到牡蛎活性肽(bioactive peptide of oyster,BPO),并测得其分子质量为751D;BPO能有效抑制HeLa细胞增殖,并阻止HeLa细胞G1期向S期的转换,促使凋亡基因表达上调。BPO的作用机制与诱导凋亡基因表达上调和细胞周期阻滞有关。     

珠母贝糖胺聚糖PG-Ⅱ诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡的研究

目的:探讨珠母贝糖胺聚糖PG-II诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡,从而抑制其增殖。方法:MTT法检测珠母贝糖胺聚糖PG-II对人宫颈癌HeLa细胞生长的抑制作用。倒置显微镜、荧光显微镜观察HeLa细胞凋亡的形态学特征,琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂片段,流式细胞仪定量检测细胞凋亡的百分率及对其细胞周期的影响。结果:MTT法显示PG-II可抑制人宫颈癌HeLa细胞的增殖。倒置显微镜和荧光显微镜形态学观察可见HeLa细胞凋亡的形态明显变化。琼脂糖凝胶电泳显示PG-II作用HeLa细胞24h,出现分子质量为200bp到2000bp不等的细胞凋亡的特征性DNA梯状条带。流式细胞术测试表明:PG-II可使HeLa细胞阻滞于G1期,剂量为100mg/L作用24h阻滞作用最明显,凋亡指数为42.6%。结论:珠母贝糖胺聚糖PG-II可能通过诱导人宫颈癌HeLa细胞凋亡而抑制其增殖。     

凋亡素融合蛋白质高表达菌株的筛选及其产物活性测定

目的筛选凋亡素-HBD融合蛋白质高表达的工程菌株,验证其目标产物具有抑制肿瘤细胞增值的活性。方法在不同大肠杆菌宿主中凋亡素融合蛋白质表达,筛选出高表达工程菌,随后诱导表达和纯化凋亡素融合蛋白质,并通过噻唑蓝法（MTT法）检测目标产物对肿瘤细胞的抑制活性。结果凋亡素-HBD融合蛋白质在SG工程菌的表达量较好。MTT法检测表明,凋亡素融合蛋白质有抑制HeLa细胞增值的活性。结论获得一种凋亡素-HBD融合蛋白质的高表达工程菌株,并证实其产物能够进入HeLa细胞并诱导细胞凋亡。     

茶多酚体外诱导白血病细胞凋亡

目的:为研发天然抗白血病新药,研究茶多酚主要活性成分表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)体外诱导细胞凋亡的作用。方法:采用体视显微镜、DNA凝胶电泳及透射电镜技术,观察EGCG对体外诱导人急性早幼粒白血病细胞(HL-60)凋亡的影响及其诱导凋亡的最佳作用时间和最佳作用浓度。结果:发现EGCG实验组中,HL-60细胞生长被显著抑制,DNA凝胶电泳中可见DNA条带,其细胞超微结构明显改变。当250μg/ml EGCG作用细胞6h时,其诱导细胞凋亡的作用最明显。结论:EGCG可体外诱导HL-60细胞凋亡,可能是抗白血病的侯选药。     

一种红色素对HeLa细胞体外生长的影响

本文研究青霉菌TA150301发酵产物类红曲色素的体外抗肿瘤作用。用倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,荧光显微镜和流式细胞仪检测凋亡细胞,Western-blotting检测Caspase-3的表达。结果表明,HeLa细胞随着红色素浓度的升高,细胞凋亡形态较典型;MTT法显示:当红色素质量浓度为200mg/L时,HeLa细胞凋亡率为75.40%;添加红色素达200 mg/L,流式细胞术检测凋亡率为26.58%;与对照组相比,添加红色素使HeLa细胞Caspase-3表达水平上调。该红色素对HeLa细胞有良好的抑制效果,具有浓度依赖性。     

叶黄素和玉米黄素抑制口腔上皮细胞癌增殖的实验研究

为阐明玉米蛋白粉类胡萝卜素提取物叶黄素和玉米黄素对人口腔上皮癌细胞株KB凋亡的诱导作用,探讨其分子生物学机制。本文采用单细胞凝胶电泳、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测叶黄素和玉米黄素诱导口腔癌细胞凋亡的情况。结果发现:单细胞凝胶电泳显示玉米蛋白粉叶黄素和玉米黄素能造成KB细胞DNA损伤、DNA凝胶电泳显示能使KB细胞DNA发生明显的降解,DNA周期分析主要阻断口腔癌细胞由G1向S期转变;流式细胞仪检测明显抑制人口腔癌细胞株KB中bcl-2基因的蛋白表达,明显升高p53、Bax基因的蛋白表达;说明玉米蛋白粉类胡萝卜素提取物叶黄素和玉米黄素具有明显抑制口腔上皮癌细胞增殖、并诱导其凋亡的作用。     

γ-生育三烯酚对体外培养的人结肠癌HT-29细胞生长的抑制作用

为了探讨γ-生育三烯酚对体外培养的人结肠癌HT-29细胞的生长抑制作用,采用MTT、分裂指数、集落形成、形态学观察法测定细胞活力,Hoechst 33258荧光染色法和DNA ladder法检测检测细胞凋亡。结果表明:γ-生育三烯酚能够显著抑制HT-29细胞的增殖(P0.05),且存在剂量-效应关系,其48 h半数抑制浓度(IC 50)为35.45μmol/L;形态学观察和DNA ladder结果显示受试物能够诱导HT-29细胞凋亡。γ-生育三烯酚对人结肠癌HT-29细胞具有生长抑制作用,此作用可能与其凋亡诱导效应有关。     

银杏中银杏酸诱导人白血病细胞U937凋亡的研究

目的:研究银杏酸体外对U937细胞生长的抑制作用,探讨其作用机理。方法:采用MTT法检测银杏酸对U937细胞增殖的影响,激光共聚焦显微镜观察细胞形态的变化,DNA琼脂糖电泳检测其生化特征的改变,流式细胞仪分析细胞凋亡率。结果:U937细胞经银杏酸作用24～48h,细胞的生长明显被抑制;银杏酸作用28h出现了细胞皱缩、核浓缩、体积缩小等明显的凋亡的形态学特征;细胞DNA经琼脂糖电泳可见典型的梯形条带;10.0μg/ml的银杏酸作用40h后,细胞凋亡率为14%。结论:银杏酸对U937细胞具有明显的抗肿瘤活性,其作用机理与诱导细胞凋亡有关。     

菹草类胡萝卜素提取物诱导人肝癌细胞QGY-7703凋亡的细胞学观察

采食菹草的蛋鸭所产红心蛋蛋黄的类胡萝卜素提取物具有良好的抑制S180肿瘤的作用，为阐明其抗肿瘤作用机制，研究了菹草类胡萝卜素提取物(CEPC)对人肝癌细胞QGY-7703细胞增殖和凋亡的影响，本文报道采用体外培养、细胞增殖实验，然后以可见光、荧光、激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)观察肝癌细胞的形态变化。结果表明：分别用含10、20和40μmol／L的CEPC的培养介质处理QGY-7703细胞24、48和72h，在可见光、荧光显微镜、LSCM下观察细胞形态，分别出现了肝癌细胞数量明显减少、皱缩变形、体积缩小、触角伸长、细胞表面凸起多个小泡，显示亮黄色荧光的细胞核呈现“新月状”、条状甚至碎片状形状，细胞核中呈黄色的DNA面积较明显减小等典型的凋亡细胞形态特征。用荧光显微镜观察计数凋亡细胞的方法测定了CEPC对QGY-7703细胞凋亡指数影响，细胞凋亡指数随CEPC剂量的增加及处理时间的延长而上升。因此CEPC对QGY-7703细胞的增殖具有明显的抑制作用，在较短的时间内及使用较小的CEPC剂量能有效地诱导QGY-7703细胞凋亡。本项研究说明菹草中的类胡萝卜素化合物具有明显的抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡的功能。     

共生食用菌松茸菌丝体液体发酵的研究

目的研究松茸菌丝体液体发酵方法和最佳条件。方法经RAPD-PCR分析确认松茸菌丝体菌种,研究松茸液体深层发酵过程中菌丝体的生物量、残糖浓度和pH随时间变化的过程;比较不同种龄对菌丝体积累的影响,确立最佳接种种龄;比较不同初始糖浓度发酵过程的结果,运用中间补糖的方法,确定最优的补糖时间。结果最佳接种种龄为6d;初始糖浓度较低有利于缩短松茸种子液生长的延迟期,较高则可使菌丝体在较长时间保持生长并获得较高的生物量产出。d12为最优补糖时间,在摇瓶体系中培养24d最终得到12.77g/L的菌丝体生物量。结论最佳培养条件下,采用中间补糖法适合液体发酵过程中松茸菌丝体的积累。     

猴头菌子实体与液态发酵菌丝体活性成分差异及其在改善胃部疾病中的应用进展

猴头菌是传统的食药两用菌,具有猴头菌多糖、猴头菌素、猴头菌酮、麦角甾醇等多种活性成分,对胃炎、胃溃疡、胃癌等胃部疾病具有有益调节作用。猴头菌有子实体和菌丝体两种形态,菌丝体又分为固态发酵菌丝体与液态发酵菌丝体。本文主要对比阐述了猴头菌子实体与液态发酵菌丝体活性成分差异以及它们在改善胃部疾病中相关研究成果,以期为猴头菌液态发酵菌丝体规模化、工业化、自动化生产,以及功能食品和食用菌基天然药物的开发提供依据和参考。     

松茸多糖的体外抗氧化性及对乙醇氧化损伤小鼠作用的研究

本文以超氧阴离子自由基(Superoxide anion radicals,O₂^-·)、2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(2,2’-Azinobis-(3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate),ABTS)自由基清除能力、总还原能力为指标研究松茸多糖(Tricholoma matsutake polysaccharide,TMP)体外抗氧化能力;建立乙醇氧化损伤小鼠模型,通过测定小鼠血清中谷丙转氨酶(Alanine transaminase,ALT)、谷草转氨酶(Aspartate transaminase,AST)和碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,AKP)的活力以及肝脏中过氧化氢酶(Catalase,CAT)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathione peroxidase,GSHPx)的水平研究松茸多糖的体内抗氧化活性。体外抗氧化结果表明,松茸多糖对超...     

桑黄菌丝体与子实体成分的比较分析

为进一步开发和利用桑黄（Phellinus igniarius）,通过发酵获得桑黄菌丝体,并对桑黄子实体和菌丝体的一般营养成分及主要功能成分含量进行分析比较,利用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率和对SW620、HepG2肿瘤细胞的抑制率进行主要成分活性的比较。结果表明,桑黄菌丝体和子实体均含有蛋白质、多糖、氨基酸、脂肪、纤维、矿物元素等多种营养成分,其组成基本一致。主要营养成分中,桑黄菌丝体中水分、灰分含量显著低于桑黄子实体（P＜0.05）,粗纤维含量极显著低于桑黄子实体（P＜0.01）,而粗蛋白、粗脂肪含量极显著高于子实体（P＜0.01）;在所测定的17 种氨基酸中,二者氨基酸种类一致,菌丝体氨基酸总量为25.11%,子实体氨基酸总量为4.69%;多糖、黄酮、三萜3 种活性成分在桑黄子实体中含量极显著高于菌丝体（P＜0.01）,其中子实体多糖、黄酮、三萜DPPH自由基最高清除率分别为77.14%、61.37%、49.97%;桑黄菌丝体、子实体多糖对结肠癌SW620细胞的抑制率最高可达21.45%和32.86%,对肝癌HepG2细胞的抑制率最高可达37.91%和51.29%。这些结果进一步说明桑黄菌丝体和子实体营养成分组成基本一致,含量丰富,液体发酵所得菌丝体可以缓解野生桑黄子实体匮乏的局面,具有同样的应用价值和开发前景。     

十字花科蔬菜提取物抗肿瘤作用的研究

研究了十字花科蔬菜提取物6320（主要含异硫氰酸酯）的抗肿瘤活性。体外实验应用MTT法、观察细胞形态、测定细胞生长曲线、流式细胞仪分析细胞凋亡及细胞周期观察提取物6320对不同肿瘤细胞生长的影响。并通过建立小鼠B16实体瘤模型来考察提取物6320的体内抗肿瘤作用。结果表明提取物6320在体内外均可明显抑制肿瘤的生长及增殖,并诱导细胞凋亡,但有可能对机体的免疫系统造成一定的影响。     

Phenethyl isothiocyanate sensitizes human cervical cancer cells to apoptosis induced by cisplatin

Scope: Naturally‐occurring chemopreventive agent phenethyl isothiocyanate (PEITC), derived primarily from watercress, has been shown to inhibit cell growth and induce apoptosis in cancer cells. In this study, we examined the potential of PEITC in enhancing cisplatin‐induced apoptosis in cervical cancer cells and its mechanisms. Methods and results: HeLa cells were exposed to PEITC, cisplatin or both. Pretreatment of cells with PEITC strongly enhanced cisplatin‐induced cytotoxicity. PEITC activated the mitogen‐activated protein kinases, including c‐Jun N‐terminal kinase (JNK), extracellular signal‐related kinase (ERK), and p38. Caspase‐3 activity assay demonstrated that the synergistic induction of apoptosis was significantly attenuated by MEK1/2 inhibitor U0126, but not by JNK or p38 inhibitor, suggesting that ERK activation is responsible for the synergistic effect. We found that NF‐κB signaling pathway is not involved in the synergistic effect. Sulforaphane and benzyl isothiocyanate, two other members of the isothiocyanate family, also sensitize HeLa cells to apoptosis induced by cisplatin. Furthermore, we found that the synergistic effect was also observed in cervical cancer C33A and breast cancer MCF‐7 cells but not in normal mammary epithelial MCF‐10A cells. Finally, we demonstrated that Noxa induction was associated with apoptosis induced by PEITC plus cisplatin. Conclusion: Taken together, this study shows that PEITC can sensitize cancer cells to apoptosis induced by cisplatin and this effect is mediated through ERK activation, suggesting the potential of PEITC to be used as an adjuvant with cisplatin in combination therapeutic treatments.     

仿刺参卵多糖的分离纯化及体外抗肿瘤活性

目的：探究仿刺参卵多糖的结构及体外抗肿瘤活性。方法：通过酶解醇沉获得仿刺参卵粗多糖（polysaccharides from Apostichopus japonicus spawn,SPS）;通过色谱柱纯化后进行理化性质分析;采用噻唑蓝法研究卵多糖对HeLa、HGC-27细胞的体外增殖抑制作用。结果：获得3 种不同多糖组分SPS-1、SPS-2、SPS-3,对干预的肿瘤细胞均有显著抑制作用。SPS-1抑制作用最强,对HeLa及HGC-27细胞的最高抑制率分别为98.04%、99.4%。结论：从仿刺参卵中分离出3 种多糖组分,均表现出一定的抑制肿瘤细胞增殖活性。     

Residual powders from Shochu distillation remnants induce apoptosis in human hepatoma cells via the caspase-independent pathway

Shochu distillation remnants (SDR) are by-products in the manufacturing process of the Japanese liquor Shochu and include various useful organic compounds derived from the fermentation of grains. We have obtained valuable powder (PSDR) from freeze-dried SDR by the treatment with ethanol. In this study, we examined the anticancer effects of barley-, rice-, and sweet potato-PSDR against HepG2 and HuH-7 cells of human hepatocellular carcinoma (HCC) in?vitro. All PSDR inhibited the growth of both these HCC cells through the induction of apoptosis. Especially, barley-PSDR was the most effective for the growth inhibition and apoptosis induction of HCC cells of all PSDR. We next examined the apoptotic mechanisms induced by barley-PSDR. Decrease in mitochondrial membrane potential and release of cytochrome c from mitochondria were observed in HCC cells after the treatment with barley-PSDR. Furthermore, barley-PSDR induced the nuclear translocation of apoptosis-inducing factor (AIF) from mitochondria, while it did not significantly affect the activities of caspase-3, -8, and -9. The results suggested that barley-PSDR induced apoptosis against HCC cells via the caspase-independent mitochondrial pathway. The findings in this study suggest that PSDR has the possibility of therapeutic and/or preventive agents of HCC.     

Shallot and licorice constituent isoliquiritigenin arrests cell cycle progression and induces apoptosis through the induction of ATM/p53 and initiation of the mitochondrial system in human cervical carcinoma HeLa cells

This study is the first to investigate the anticancer effect of isoliquiritigenin (ISL) in human cervical carcinoma HeLa cells. The results reveal that ISL inhibits HeLa cells by blocking cell cycle progression in the G2/M phase and inducing apoptosis. Blockade of cell cycle is associated with increased activation of ataxia telangiectasia‐mutated (ATM). Activation of ATM by ISL phosphorylated p53 at Serine15, resulting in increased stability of p53 by decreasing p53 and murine double minute‐2 (MDM2) interaction. In addition, ISL‐mediated G2/M phase arrest was also associated with decreases in the amounts of cyclin B, cyclin A, cdc2, and cdc25C, and increases in the phosphorylation of Chk2, cdc25C, and cdc2. The specific ATM inhibitor caffeine significantly decreased ISL‐mediated G2/M arrest by inhibiting the phosphorylation of p53 (Serine15) and Chk2. ISL induced apoptotic cell death is associated with changes in the expression of Bax and Bak, decreasing levels of Bcl‐2 and Bcl‐X_L, and subsequently triggering mitochondrial apoptotic pathway. In addition, pretreatment of cells with caspase‐9 inhibitor blocked ISL‐induced apoptosis, indicating that caspase‐9 activation is involved in ISL‐mediated HeLa cell apoptosis. These findings suggest that ISL may be a promising chemopreventive agent against human uterine cervical cancer.