克隆法研究辐射诱发人外周血淋巴细胞HPRT基因突变

本文目的是用克隆法研究γ射线诱发人外周血淋巴细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸抗糖转移酶(HPRT)基因突变的量效关系。从健康成年人外周血分离淋巴细胞 ,每份分成两等份 ,其中一份加滋养细胞 ,另一份不加滋养细胞 ,种于 96孔板 ,进行淋巴细胞的克隆和突变细胞的筛选 ,比较二者结果 ;剂量效应关系实验为取一健康成年男子外周血 2 5mL分成 5等份 ,分别用 0、1、2、4和 6Gy照射 ,分离淋巴细胞 ,种于 96孔板 ,不加滋养细胞条件下观察淋巴细胞的克隆效率和HPRT基因突变频率的变化。结果表明加滋养细胞组的克隆效率高于不加滋养细胞组 (p <0 0 1 ) ,但二者HPRT基因突变频率无差别 (p >0 0 5 )。在一定剂量范围内 ,人外周血淋巴细胞克隆效率与照射剂量呈负相关 ,HPRT基因突变频率与照射剂量呈正相关     

^60Coγ射线照射淋巴细胞诱导PIG3和GADD45基因mRNA变化

用60Coγ射线照射正常人外周血永生化淋巴细胞系后,初步分析受照细胞中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平的改变状况,并探讨上述基因作为辐射生物剂量计的可能性及意义.用60Coγ射线照射淋巴细胞,采用不同剂量(0～10Gy)照射和照射后不同时间点(0～72h)收集细胞,抽提mRNA,用Real-time PCR检测细胞中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平的变化.结果表明,正常人外周血永生化淋巴细胞系中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平随照射剂量的增高而增加,并呈现出剂量效应关系.5Gy剂量60Coγ射线照射后,淋巴细胞中PIG3和GADD45基因mRNA表达水平随时间的推移不断增高,在8h时均达到最高,随后开始降低.PIG3和GADD45基因对辐射均较敏感,其表达具有良好的剂量效应和时间效应关系,但相比而言,PIG3的表达随照射剂量和照射后时间的变化更加显著,更有潜力作为生物剂量计以满足实际需要.     

荧光原位杂交技术在剂量重建中的应用

采用不同剂量60Coγ射线照射两名正常人外周血淋巴细胞后,应用荧光原位杂交（FISH）技术检测染色体易位率,并拟合出剂量效应关系曲线为：Y=0.01316＋0.07569D＋0.01583D2。通过盲法对实验结果验证,验证结果表明拟合的曲线可用于剂量重建。FISH技术用来检测染色体稳定性畸变,既快速又准确,适合于染色体易位的检测,有望成为剂量重建的理想技术方法。     

单细胞凝胶电泳检测外照射诱导DNA单链断裂和双链断裂

分别应用中性单细胞凝胶电泳、碱性单细胞凝胶电泳技术检测了不同剂量γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA的损伤。结果表明，γ射线外照射对小鼠外周血淋巴细胞DNA具有明显的损伤作用，彗星细胞百分率显增加，DNA电泳迁移，且迁移的距离与照射剂量之间呈良好的线性关系。     

体细胞HPRT基因突变检测用于辐射剂量估算的可行性研究

用多核细胞法研究了^60Coγ射线0－4.0Gy照射诱发的体细胞HPRT基因突变,探讨了其在辐射剂量估算中的适用范围和存在的问题。结果表明,HPRT基因突变频率Y随照射剂量D（Gy)的增加而增加,在0-4.0Gy剂量范围内可拟合为Y＝0.4022 0.2710D-0.0460D^2,在0－1.0Gy低剂量范围内,更适于拟合直线模型Y＝0.3827 0.2948D;HPRT基因突变频率与染色体畸变、微核具有良好的相关性,说明HPRT基因突变可以用于低LET辐射剂量估算,尤其适用于低剂量照射引起的单基因突变检测和辐射危害评价。     

~(60)Coγ射线照射人血淋巴细胞诱导p53相关基因mRNA表达水平的变化

采用不同剂量(0~10 Gy)60Coγ射线照射人外周血淋巴细胞,通过抽提mRNA,采用real-timePCR检测不同剂量照射后淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。筛选出最佳照射剂量(5 Gy)后,用该最佳照射剂量照射淋巴细胞,检测不同时间点(0~72 h)淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA表达水平的变化。结果表明,淋巴细胞中GADD45和CDKN1A基因mRNA的表达水平随照射剂量的增加而增加,并呈现出剂量效应关系。在5 Gy最佳剂量照射后,淋巴细胞GADD45基因mRNA表达水平随时间的推移不断增高,在8 h时达到最高,随后开始逐渐降低;淋巴细胞CDKN1A基因mRNA表达水平随时间的推移未见明显变化趋势。淋巴细胞系中GADD45和CDKN1A基因mRNA的表达水平与照射剂量均有较好的剂量效应关系,两者均有可能作为电离辐射的生物剂量计来估算受照剂量水平。     

体细胞HPRT基因位点突变检测技术及其在电离辐射研究中的应用

次黄嘌呤磷酸核糖转移酶（HPRT）基因在单基因突变的研究中是一个经黄的基因位点。本文概述了HPRT基因位点突变检测的原理，列出了几种检测方法，并讨论了影响HPRT基因突变频率测定的几个因素以及HPRT基因突变在生物剂量估算中的应用，最后与其它辐射生物剂量计进行了比较。     

X射线诱导人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达上调

应用实时荧光逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,定量分析不同剂量X射线体外照射对人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因表达的影响,探讨了运用mRNA水平变化作为电离辐射生物剂量计的可能性。结果表明:经1、2、3、5Gy X射线照射后24h,GADD45和p21基因表达均明显上调。GADD45基因表达在1-5Gy照射剂量范围内呈指数相关。p21基因表达在1-3Gy照射剂量范围内呈线性剂量效应关系,但5.0Gy照射后,其表达不再继续增加。结果表明,X射线照射后人外周血淋巴细胞GADD45和p21基因的表达在一定剂量范围内呈剂量依赖性上调,GADD45更适合发展为核事故受照射人员的分子生物剂量计。     

60Co γ射线诱发CHL细胞基因组不稳定性的研究

本研究采用60Coγ射线照射中国仓鼠肺成纤维细胞（CHL），利用单细胞凝胶电泳技术和检测克隆形成率对辐射诱发的基因组不稳定性进行了探讨，将对数生长期的细胞分成不同剂量组，60Coγ射线照射后传代培养，在33代后各剂量组再次统一照射2Gy，进行辐射损伤的检测，结果表明，首次照射剂量与子代二次照射后的损伤程度存在剂量效应关系，本次实验结果说明，60Coγ射线不仅在CHL细胞中产生直接的生物效应，而且可以在子代中诱发产生基因组不稳定性。     

HPRT基因用于γ射线和苯并芘鉴别诊断的初步研究

为了解γ射线和苯并芘对细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶(hypoxanthine guanine phosphoribosyl transferase,HPRT)基因突变的影响,探索一种用于鉴别诊断γ射线和苯并芘引起的细胞损伤的早期检测敏感指标,采集了3名健康人血液,每人16 mL,分为16组,其中,10个组分别进行⁶⁰Co γ射线照射(0～5 Gy),另外6个组分别进行苯并芘染毒(0～10 μg/mL),使用荧光定量聚合酶链式反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)方法分析γ射线和苯并芘对细胞HPRT基因突变位点频率的变化情况,从而筛选γ射线和苯并芘对细胞损伤的HPRT差异突变位点。结果表明,0～5 Gy剂量范围内,HPRT的外显子2和外显子5突变频率随照射剂量增加而上调,通过拟合建立了突变频率与照射剂量间的剂量-效应直线方程,外显子2:y=0.360 3+0.110 68x,R²=0.99,p<0.01,外显子5:y=0.429 8+0.082 3x,R²=0.93,p<0.01;而0～10 μg/mL苯并芘染毒后,HPRT基因的外显子2和外显子5突变频率随染毒浓度增加没有发生明显改变。γ射线所引起的外显子5突变频率与苯并芘相比有显著性差异(p<0.05),HPRT基因外显子5有望成为一种γ射线和苯并芘的鉴别点。     

用CB微核法研究离体血辐射剂量与微核率的量效关系

应用胞质分裂阻滞微核技术（简称CB微核法），探讨了X射线与60Coγ射线，以及不同剂量率的60Coγ射线诱发微核率与辐射剂量的量效关系。结果表明，剂量率相同，照射剂量相同，60Coγ射线辐照所得微核频率明显高于X射线照射所得微核频率。不同剂量率的60Coγ射线照射，高剂量率所得微核产率高。剂量效应曲线不仅与不同的辐射种类有关，而且同一种性质的射线在不同剂量率情况下，刻度曲线不一样，因而应选用不同剂量率作刻度曲线。在发生辐射事故时，应选用剂量率刻度曲线接近的一种。     

低剂量氚β射线和~(60)Coγ射线诱发人淋巴细胞染色体畸变及相对生物效应的研究

介绍了用氚β射线和~(60)COγ射线离体照射G_0期人淋巴细胞诱发染色体畸变的剂量效应关系(剂量范围为0-0.5Gy)。实验表明:无论是氚β射线还是~(60)Coγ射线所诱发的淋巴细胞染色体畸变均以染色体型畸变为主,诱发的双着丝粒体与剂量的关系均适合以Y=a+bD模式来表示。以~(60)Coγ射线为参考辐射,以淋巴细胞染色体畸变为生物终点,测得氚的RBE值为2。     

TCR分析技术作为辐射生物剂量计的可行性研究

以T淋巴细胞受体(TCR)为研究对象,探讨其作为辐射损伤生物剂量计的可行性.采集2名正常人外周静脉血,用不同剂量60Co γ射线照射,分离淋巴细胞,用流式细胞仪检测TCR突变频率,建立剂量效应回归方程.结果表明,受到60Co γ射线照射后,T淋巴细胞表面CD3、CD4表达情况发生改变,TCR突变频率在0～3 Gy剂量效应关系良好.     

氚β射线和~(60)COγ射线诱发小鼠外周血淋巴细胞微核细胞率及相对生物效应的研究

本文报道了雄性小鼠连续接受氚水或~(60)Coγ射线照射10天后,外周血淋巴细胞微核细胞率与累积吸收剂量的关系。各实验小鼠接受氚β射线内照射的累积吸收剂量分别为5.6、9.9、15.3、45.8、68.1拉德,~(60)Coγ射线外照射的累积吸收剂量分别为43、54、106、150、204和258拉德。结果表明,无论氚β射线还是~(60)Coγ射线,诱发的淋巴细胞微核细胞率随剂量增大而增加,关系式中含二次项。当氚的剂量为50拉德时,氚的 RBE 值为4.8。     

应用单细胞微凝胶电泳技术对辐射诱发人血淋巴细胞DNA损伤的研究

应用单细胞微凝胶电泳（SCGE）技术对γ射线照射诱发人血淋巴细胞DNA损伤的效应进行了研究。结果表明，γ射线照射以剂量依赖方式引起人血淋巴细胞DNA迁移长度的增加，DNA迁移长度随照射剂量（0～3．0Gy）的增加而增加。     

用荧光原位杂交技术观察^60Coγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的

研究不同剂量＾６０Ｃｏγ射线诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变率的观察值和预期值间的关系及其易位的类型和易位在细胞中的分布，为用易位率进行早先照射和慢性小剂量长期照射进行回顾性剂量估算提供必要的理论依据。用４号和７号全染色体探针，采用荧光原位杂交技术和连接ＨＧｉｅｍｓａ染色法分析不同剂量点＾６０Ｃｏγ射线离体照射诱发人外周血淋巴细胞染色体畸变。对比观察发生于４号和７号染色体的畸变数和根据其物理相对长度计算的预期值，发现４号和７号染色体的畸变观察值和预期值非常吻合；除０．２５Ｇｙ剂量点易位在细胞中的分布不符合泊松分布，为过离散分布外，其余各剂量点易位在细胞中的分布服从或接近泊松分布；各剂量点观察到的易位中，经５２ｈ培养后，不完全易位较完全易位为多。其中，又以荧光部分不带着丝粒的易位（Ｔ（Ａｂ））占多数。４号和７号的畸     

应用单细胞微凝胶电泳技术对辐射诱发人血淋巴细胞DNA …

应用单细胞微凝胶电泳（ＳＧＣＥ）技术对γ射线照射诱发人血淋巴细胞ＤＮＡ损伤的效应进行了研究。结果表明，γ射线照射以剂量依赖方式引起人血淋巴细胞ＤＮＡ迁移和蔗的增加，ＤＮＡ迁移长度随照射剂量的增加而增加     

电离辐射对淋巴细胞DNA修复合成的影响

本文用液体闪烁测量法和放射自显影法,测定小鼠及人淋巴细胞在紫外线诱发下的DNA周期外合成(UDS),发现小鼠经γ射线照射后3-4d,其淋巴结和血液的淋巴细胞在UV照射后的UDS明显下降,抑制程度随γ照射剂量增加而加重,二者呈线性依赖关系。两例中度放射病人的外周血淋巴细胞的UDS水平也低于正常。研究结果说明γ射线对细胞修复功能的影响值得重视,UDS测定也可作为辐射敏感指标使用。     

电离辐射致人外周血有核细胞mtDNA 4977bp缺失水平分析

采集6名正常人外周血,体外进行60Coγ射线单次照射,剂量分别为0、1、2、3、4和5 Gy。照射后2小时采用实时定量PCR方法检测60Coγ射线诱发的人外周血有核细胞mtDNA 4977bp缺失(ΔmtDNA4977)和mtDNA总拷贝数(mtDNAtotal),探讨用ΔmtDNA4977为指标进行辐射事故生物剂量估算的可能性。结果表明,在0～5 Gy照射剂量范围内,6名健康人mtDNA样品中的mtDNAtotal拷贝数、ΔmtDNA4977拷贝数和ΔmtDNA4977缺失率在照射后明显高于未照射(0 Gy)的mtDNA样品(p0.05),但各照射剂量组间未见明显差异(p0.05)。提示电离辐射能够诱发人外周血mtDNA样品中4977bp缺失的累积和mtDNA总拷贝数的增加,但ΔmtDNA4977水平与受照剂量间未见明显的剂量-效应关系。     

低水平电离辐射对人外周血淋巴细胞DNA修复功能的影响——试论UDS测定做为电离辐射生物剂量计的意义

近十多年来,核能的和平利用及放射性同位素在各个领域的广泛使用,使人类可能受到的小剂量电离辐射的潜在危险不断增加,因此,小剂量电离辐射的潜在效应不容忽视。有关小剂量电离辐射细胞遗传效应的研究表明,外周血淋巴细胞染色体畸变率能较好的反映剂量效应关系,但也有报告认为,当γ射线照射剂量低于5rad,中子照射剂量低于2rad时,用此指标外推剂量是没有价值的,因此有必要对其它生物学指标进行