自然发酵肉制品中乳酸菌的体外降胆固醇特性

为筛选出具有高效降胆固醇作用的乳酸菌,以自然发酵肉制品中分离出的13株乳酸菌为实验对象,采用邻苯二甲醛法对其体外降胆固醇能力进行测定,并对其中2株菌（M12、M23）的作用机理进行初步探讨。结果表明,2株菌均通过同化吸收和共沉淀作用协同降低培养基中的胆固醇;添加0.3 g/100 mL胆盐可极显著增加菌体对胆固醇的去除作用（P＜0.01）,去除率分别为56.05%和58.49%;添加胆固醇和胆盐均可显著提高菌株经超声波处理后的存活率（P＜0.05）,存活率分别为32.09%和37.93%;2株菌的热灭活菌体和休眠菌体也具有一定的胆固醇去除能力,且休眠菌体的去除率高于热灭活菌体。经16S rRNA序列分析,菌株M12为弯曲乳杆菌（Lactobacillus curvatus）,菌株M23为戊糖片球菌（Pediococcus pentosaceus）。     

植物乳杆菌MA2的生物学特性研究

对Kefir源植物乳杆菌MA2的生物学特性进行了研究,结果显示,MA2菌株在MRS培养基初始pH为6.60,接种量为4%,37℃厌氧条件下培养18 h,活菌数可达到1.2×109cfu/mL。乙酸和乳酸为发酵液中的优势有机酸,且厌氧条件下发酵液中的有机酸的含量较高,厌氧发酵液中检测出的6种脂肪酸中C18∶1的含量最高。降胆固醇试验证明,低聚葡萄糖(GOS)可以促进MA2的胆固醇移除能力,移除率可达到70%;菌体细胞脂肪酸的测定结果显示MA2菌株降胆固醇的机理主要是吸附、吸收同化机理。MA2菌株的牛乳发酵试验结果显示其具有良好的产黏特性,在乳清培养基中胞外多糖产量可达380 mg/L。结合其良好的耐酸、耐胆盐特性,植物乳杆菌MA2具有良好的益生菌应用潜力。     

分离自Kefir的植物乳杆菌体外降胆固醇作用的研究

对分离Kefir中的植物乳杆菌体外降胆固醇作用进行了研究。结果表明，植物乳杆菌在含胆盐的培养基中具有良好的降胆固醇能力，24h后培养基中的胆固醇可降低60％(0．18g／L)；该菌体外降胆固醇作用的机理主要是其产生的胆盐水解酶水解胆盐变为游离态的胆酸，与胆固醇形成复合物，在酸性pH值条件下发生共沉淀。同时，也发现该菌产生的胆盐水解酶对反应底物(各种胆盐)的特异性不同，以脱氧牛磺胆酸最佳。     

植物乳杆菌ST-Ⅲ菌株降胆固醇影响因素的研究

研究发现植物乳杆菌ST-Ⅲ菌株降低胆固醇作用受胆盐和胆固醇影响.在培养基中添加不同的胆盐,能增加ST-Ⅲ菌株降胆固醇能力,依次为牛磺胆酸钠>牛胆盐>胆酸,当牛胆盐的添加浓度为3.0g/L时,降胆固醇率达到最高值38.57%;在培养基中添加不同来源和不同浓度的胆固醇,ST-Ⅲ菌株均具有降低作用,但降低能力有差异,依次为羊血清>鸡蛋黄>卵磷脂-胆固醇胶束溶液,且降低能力受胆固醇的浓度影响较大,当浓度低于0.5mg/mL时,降胆固醇率可维持在40%左右,高于0.5mg/mL时,降胆固醇效果则显著降低;降胆固醇量在胆固醇浓度为1.0mg/mL时达到最高值307μg/mL,这可能是高浓度胆固醇抑制ST-Ⅲ菌株的生长所致.     

副干酪乳杆菌NCU622耐酸耐胆盐及其黏附性能

通过体外实验研究副干酪乳杆菌NCU622的耐酸、耐胆盐性能;采用体外细胞模型（人体结肠腺癌细胞系Caco-2细胞）测定副干酪乳杆菌NCU622的黏附性能,考察了菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能的影响,并对该菌株进行细胞毒性检测。结果表明：副干酪乳杆菌NCU622在pH 2.5的MRS液体培养基中作用3 h,存活率为98.21%;在胆盐质量浓度为0.3、0.5 g/100 mL的MRS液体培养基中作用4 h,存活率分别为95.14%和85.07%。副干酪乳杆菌NCU622对Caco-2细胞的黏附能力较强,为（21.19±0.94）CFU/Caco-2细胞,且菌体浓度、作用时间及生长阶段对其黏附性能均有影响。副干酪乳杆菌NCU622与Caco-2单层细胞共培养24 h后,对其无裂解作用。这表明副干酪乳杆菌NCU622具有良好的耐酸耐胆盐能力及较强的黏附性能,且对Caco-2细胞无裂解作用,符合微生态制剂和乳酸菌发酵功能食品的菌种要求。     

植物乳杆菌耐酸耐胆盐的体外试验及其降胆固醇作用

目的:研究产胆盐水解酶植物乳杆菌H13的耐酸、耐胆盐特性,在此基础上对其可能的降胆固醇作用机理进行体外试验研究.方法:采用MRS培养基,模拟人体胃酸环境(pH=3)和胆盐环境(0.3%),测定H13菌株在酸性及高胆盐环境作用后的存活菌数,并在此胆盐浓度下测定植物乳杆菌H13的胆盐水解酶活力、降解胆盐能力和胆固醇沉淀量.结果:菌体能够耐受pH 3的环境和0.3%的胆盐环境;该菌产生的胆盐水解酶在降低胆固醇方面具有重要作用,酶活性与游离胆酸量、胆固醇沉淀量呈正相关,而且胆盐水解酶对反应底物的特异性不同,以甘氨胆酸钠为佳.结论:植物乳杆菌H13体外降胆固醇作用的机理主要是其产生的胆盐水解酶使胆盐失去共轭作用,在酸性(pH<6.0)条件下,解共轭胆盐与胆固醇形成复合物共同沉淀下来.     

酸菜来源植物乳杆菌S4-5的降胆固醇作用

对酸菜来源植物乳杆菌S4-5的体外降胆固醇作用进行研究。采用单因素试验研究胆盐添加量、胆固醇添加量、培养基初始pH值及培养时间对植物乳杆菌S4-5降胆固醇能力的影响,结果表明:在胆盐质量浓度为1.0mg/mL和胆固醇质量浓度为175.7mg/L时,植物乳杆菌S4-5有最高的胆固醇移除率,分别为67.7%和62.2%;植物乳杆菌S4-5在培养基不同初始pH值条件下对胆固醇的移除率均在71.3%～77.2%之间;培养时间对植物乳杆菌S4-5的降胆固醇作用有显著性影响(P<0.01),在培养2h(延滞期结束)、14h(指数期结束)、24h和48h后植物乳杆菌S4-5对胆固醇的移除率分别为4.8%、66.7%、75.3%和84.0%。     

植物乳杆菌NDC 75017的降胆固醇作用

植物乳杆菌NDC 75017分离自中国内蒙古传统发酵乳制品。本实验对其体外环境耐受性及其降胆固醇作用进行研究。采用活菌计数法检测植物乳杆菌NDC 75017在pH 2.0～3.0的酸性环境、胆盐质量浓度0.3g/100mL、NaCl质量浓度0～7g/100mL以及模拟人工消化液环境下的耐受情况;同时以邻苯二甲醛法测定其体外降胆固醇能力。结果表明:植物乳杆菌NDC 75017可耐受pH3.0及0.3g/100mL胆盐环境;在7g/100mL的高盐质量浓度条件活菌数仍可达108CFU/mL;可以通过胃进入肠道而保持活性,在肠道处理8h后存活率为58.73%。体外降胆固醇实验测得细菌发酵上清液、菌体洗涤液和细胞破碎液中的胆固醇脱除率分别为16.43%、26.35%和32.87%。植物乳杆菌NDC 75017环境耐受能力良好,具有体外降胆固醇作用,该菌株可以作为降胆固醇的潜在益生菌。     

植物乳杆菌脂肪酸构成与胆盐耐受性的相关性分析

为分析菌株的脂肪酸构成与胆盐耐受能力的关系,本文对8株分离自发酵乳制品的植物乳杆菌展开研究。以菌体在含有0.3%胆盐的MRS肉汤培养基中的对数存活率作为其胆盐耐受能力评价的指标,并通过气相色谱法分析各菌株的脂肪酸构成。Pearson相关性分析表明,菌体中棕榈酸(C16:0)和19碳环丙烷脂肪酸(cyc C19:0)含量与其胆盐耐受能力呈显著正相关(P0.05),而豆蔻酸(C14:0)和油酸(C18:1)含量与菌体胆盐耐受能力呈显著负相关(P0.05)。细胞完整性评价表明:胆盐敏感型菌株在胆盐环境中具有较弱的细胞完整性,而这一指标受脂肪酸构成影响。本研究结果表明:特定脂肪酸对天然来源的菌体而言,在胆盐环境中维持细胞完整性和提高胆盐耐受性方面扮演着重要角色。     

可降胆固醇的优势乳杆菌筛选

为丰富降胆固醇、降血糖的益生菌资源,以实验室10株潜力益生菌株为实验对象,进行体外降胆固醇能力、胆盐水解酶(BSH)活性及α-葡萄糖苷酶抑制率试验,测定菌株对人工胃液和胆盐的耐受性,评价优势菌株的细胞黏附性能及对抗生素的耐药安全性能。结果表明,植物乳杆菌LH-511、植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌10-4对胆固醇的降解率在50%以上,显著高于商业菌株植物乳杆菌299V(p<0.05)。植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌SD-H9对α-葡萄糖苷酶的抑制率高达41.7%、40.1%。植物乳杆菌LH-511、植物乳杆菌10-12、植物乳杆菌10-4、植物乳杆菌10-14、卷曲乳杆菌OF48-2pH5这5株菌具有较好的BSH活力、α-葡萄糖苷酶抑制性、抗逆性以及对HT-29细胞的黏附能力。但仅植物乳杆菌LH-511和卷曲乳杆菌OF48-2pH5通过了10种抗生素的安全性试验。综上所述,植物乳杆菌LH-511和卷曲乳杆菌OF48-2pH5具有较好的降胆固醇、降血糖潜力,且通过了抗逆性、黏附性、安全性试验,可用于进一步的开发和应用。     

三株植物乳杆菌降胆固醇机理的研究

测定了已筛选出的具有较高胆固醇去除能力和胆盐水解酶活性的3株植物乳杆菌(KLDS6.0330,KLDS6.0333,KLDS6.0335)的胆固醇同化作用,胆汁盐的去结合作用和胆固醇共沉淀作用。这3株植物乳杆菌能够同化较多的胆固醇(﹥43μg/mL);所有的菌株都表现出了对甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠的去结合作用,与牛磺胆酸钠相比,甘氨胆酸钠的去结合能够释放较多的胆酸;所有菌株都表现出了胆固醇与甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠去结合释放胆酸的共沉淀,与牛磺胆酸钠相比,甘氨胆酸钠去结合产生的胆酸表现出了与较多的胆固醇共沉淀;随着pH值的下降,解聚态的胆汁酸与胆固醇的共沉淀量增加,结合态胆盐与胆固醇的共沉淀量较少。结果表明这3株植物乳杆菌在体外可以通过3种机制去除胆固醇。     

母乳婴儿源乳杆菌的筛选及其免疫调节能力研究

以分离自母乳婴儿源的乳杆菌——鼠李糖乳杆菌BF-1、植物乳杆菌BF-15、唾液乳杆菌BF-29、干酪乳杆菌BF-55为对象,研究这些菌株对体外模拟人工胃、肠液及胆盐的耐受性,对Caco-2细胞的黏附能力、安全性和对小鼠脾淋巴细胞增殖活性的影响,探讨菌株的免疫调节活性。试验结果表明:植物乳杆菌BF-15对人工消化液和胆盐有较强的耐受性,对Caco-2细胞黏附能力[(7.10±0.30)CFU/cell]显著高于阳性对照菌株LGG[(3.90±0.30)CFU/cell](P<0.05);BF-15除对氨基糖苷类、糖肽类抗生素的固有耐药性外,对苯唑西林、头孢噻吩也有耐药性,无抗性质粒;BF-15和LGG的活性和热致死菌在一定的菌浓范围(1×10^6~10^7CFU/mL)均促进体外小鼠淋巴细胞增殖,表现出剂量依赖关系,同时活性菌株作用效果明显优于热致死菌株。在相同菌浓条件下,两株菌体外免疫调节能力没有显著性差异(P>0.05)。母乳婴儿源乳杆菌——植物乳杆菌BF-15具有较强的抗逆性,较高的黏附性和一定的免疫调节能力。     

添加植物乳杆菌的低脂干酪降胆固醇作用

为研究益生菌在干酪中应用的降胆固醇活性,以菌株胆固醇降解率、胆盐水解酶活力及模拟胃肠道耐受性为评价指标,筛选出具有降胆固醇活性的益生菌,并添加到低脂干酪(脂肪含量为1.0%)中,灌胃小鼠35 d,测定小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量、动脉硬化指数(AI)及肝脏、粪便中TC、TG含量。结果表明,植物乳杆菌KLDS 1.0320降胆固醇特性优于其他菌株,胆固醇降解率达到63.72%,模拟胃肠道消化后存活率为82.21%,胆盐水解酶活力为0.71 U/mL。与高脂模型组相比,灌胃添加植物乳杆菌KLDS 1.0320干酪小鼠的TC、TG、LDL-C及AI分别下降21.23%、19.30%、31.73%和35.05%,肝脏中TC、TG显著降低,粪便中TC、TG显著升高(p<0.05)。实验获得了1株具有降胆固醇能力的植物乳杆菌KLDS 1.0320,以干酪为载体在动物体内仍具有降低血清胆固醇的作用,说明其具有应用于干酪发挥降胆固醇活性的潜力。     

来宾酒糟酸菜中降胆固醇乳酸菌的筛选鉴定及发酵工艺研究

该研究采用钙溶圈法及MRS-胆固醇培养基从来宾酒糟酸菜汁中分离筛选具有降胆固醇能力的乳酸菌,通过形态观察及分子生物学技术对其进行菌种鉴定,同时对其耐酸性、耐胆盐性能进行研究,并以胆固醇去除率为考察指标,通过单因素试验及正交试验对其发酵条件进行优化。结果表明,筛选得1株具有去除胆固醇能力的乳酸菌,编号为XL-02,经鉴定,菌株XL-02为植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）,其具有较好的耐酸能力和胆盐耐受性。在pH2.0的酸性环境下培养24 h,菌株存活率为3.14%;在胆盐含量为0.3%条件下培养24 h,菌株存活率为12.17%。菌株XL-02去除胆固醇的最优发酵条件为以MRS液体培养基为发酵培养基,初始pH值6.0,接种量4%,发酵温度39 ℃,发酵时间72 h。在此优化条件下,胆固醇去除率为（61.56±0.08）%。     

东北传统发酵食品中高抗氧化活性植物乳杆菌的筛选及体外耐受性分析

为了获得高抗氧化活性植物乳杆菌,从东北传统发酵食品辣椒酱、臭豆腐、粘面子中筛选出75株植物乳杆菌。将75株植物乳杆菌分为无细胞上清液、完整细胞、无细胞提取物三个组分,以DPPH和ABTS+自由基清除率为指标对菌株进行筛选,分析不同指标间的相关性,并评价菌株耐酸、耐胆盐能力及对抗生素的敏感性。结果表明,23株菌株表现出较好的抗氧化活性,无细胞上清液对DPPH和ABTS自由基清除率均大于90%,完整细胞和无细胞提取物对这两种自由基清除率均大于30%。植物乳杆菌的三个组分在清除DPPH自由基中存在相关性,无细胞上清液在DPPH和ABTS+两种评价方法上存在极显著相关性。其中有5株植物乳杆菌(D2、H8、L20、L11和A2)在pH2.0环境中存活率均大于59%,在0.3%胆盐中的存活率均大于93%,对7种抗生素敏感性较强。因此,这5株植物乳杆菌对于开发抗氧化作用的功能食品具有潜在的应用价值。     

Characterization of Lactobacillus plantarum PH04, a potential probiotic bacterium with cholesterol-lowering effects

The bacterium Lactobacillus plantarum PH04 was isolated from infant feces and tested positive for bile/acid tolerance and bile salt hydrolase activity. It was evaluated as a potential probiotic with cholesterol-lowering effect. Bile salt hydrolase activity was nine times greater in stationary phase than in exponential phase cells and increased when the cells were exposed to conjugated bile salts. L. plantarum PH04 was resistant to seven of nine antibiotics tested and did not produce beta-glucuronidase. L. plantarum PH04 was fed to hypercholesterolemic mice at numbers of 10(7) CFU per mouse per day for 14 days. Compared with a control group, the serum cholesterol and triglycerides were respectively 7 and 10% lower in the group fed L. plantarum PH04, and fecal lactic acid bacteria increased while no any significant differences (P<0.05) in body weight, visceral weigh index or bacteria translocation between two groups were observed. The results indicated that L. plantarum PH04 might be effective as a probiotic with cholesterol-lowering activities.     

植物乳杆菌KFY02发酵柠檬汁对高脂饮食小鼠肥胖的抑制作用及肠道菌群调节作用

本研究旨在观察植物乳杆菌KFY02发酵柠檬汁的减脂的作用及其对肠道菌群调节作用。本研究通过高脂饮食引起小鼠肥胖,将实验小鼠分为正常组、模型组、植物乳杆菌KFY02组、未发酵柠檬汁组和发酵柠檬汁组,采用生化试剂盒、切片观察和定量PCR实验检测小鼠血清、组织相关指标并通过检测粪便中微生物的表达观察肠道微生物组成。实验结果显示,植物乳杆菌KFY02、未发酵柠檬汁和发酵柠檬汁均能够有效减轻肥胖小鼠体重,降低肝脏和附睾脂肪组织的器官指数,降低血清和肝脏组织的丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）、碱性磷酸酶（AKP）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平和提高高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平,增加小鼠粪便中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）和总蛋白（TP）的含量。H&E病理学观察发现,植物乳杆菌KFY02、未发酵柠檬汁和发酵柠檬汁还能够减轻肥胖造成的肝组织病变和脂肪细胞增大和堆积。qPCR实验结果显示,植物乳杆菌KFY02、未发酵柠檬汁和发酵柠檬汁能够上调高脂饮食引起的肥胖小鼠肝组织的PPAR-α、CPT-1、LPL、CYP7A1的mRNA表达和下调C/EBPα、PPAR-γ表达;同时还可以上调拟杆菌门、乳酸杆菌、双歧杆菌微生物的表达和下调厚壁菌门表达。这些结果表明,植物乳杆菌KFY02、未发酵柠檬汁和发酵柠檬汁均能够起到对小鼠的减脂作用,且发酵柠檬汁的效果最好,发酵柠檬汁对小鼠的减脂作用与其调节小鼠肠道功能和微生物组成有直接关系。由此可以看出,植物乳杆菌KFY02发酵柠檬汁对肥胖小鼠具有良好的减脂作用和肠道调节作用。