烟草根际土壤浸出液刺激烟草疫霉产孢和接种研究

通过烟草疫霉游动孢子接种处理,研究了烟草黑胫病菌的产孢条件和人工接种方法。结果表明:根际草炭土和田间肥沃土浸出液均能刺激黑茎病菌产生孢子囊和游动孢子,施加40μL烟草根际草碳土浸出液和60μL田间肥沃土浸出液,两种处理的孢子囊最高产量分别为1.43×104个/mL和1.06×104个/mL;2种土壤浸出液均在40μL处理时游动孢子的产量最高,分别为3.12×106个/mL和2.30×106个/mL。烟草黑胫病菌接种方法的比较结果表明,茎基部注射接种致病效果要明显优于灌根接种。     

黄皮叶提取物对食品中常见致病菌抑菌作用研究

研究黄皮叶化学成分和抑菌作用.采用纸片扩散法对黄皮叶不同溶剂提取物进行初步抑菌试验,在此基础上采用纸片扩散法和稀释法对乙醇提取物进行抑菌试验.并对乙醇、石油醚提取物进行化学成分的预试验.结果显示,乙醇提取物中含有较多的生物碱、有机酸、香豆素、黄酮和酚类等;石油醚提取物中主要含有挥发油、甾体和萜类等物质.不同溶剂提取物对常见病原菌的抑菌效果为乙醇>石油醚,而水提物则无抑菌效果.黄皮叶乙醇提取物对食品中常见致病菌均有较强的抑菌效果.其最低抑菌浓度分别是:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌均为<4 mg/mL、啤酒酵母<8 mg/mL.表明乙醇提取物对4种常见病原菌的抑菌效果显著.     

千里香杜鹃提取物对赤拟谷盗、烟草甲和马铃薯茎线虫的防治作用

本文以千里香杜鹃枝、叶为实验材料，石油醚、甲醇、95%乙醇为提取剂，采用热浸法得到提取物，测试提取物对赤拟谷盗和烟草甲的触杀、熏蒸和拒食活性以及其对马铃薯茎线虫的毒杀活性，以此初步筛选出对赤拟谷盗、烟草甲和马铃薯茎线虫具有较好抗虫活性的提取物。结果表明：千里香杜鹃叶95%乙醇提取物对赤拟谷盗、烟草甲和马铃薯茎线虫具有明显杀虫活性(LD50分别为15.32、16.18 μg/头；LC50=0.78 mg/mL)；对赤拟谷盗具有明显拒食活性，在质量浓度（2 mg/mL）测试条件下，拒食率为78.17%。各提取物对赤拟谷盗和烟草甲无明显熏蒸活性。综上，千里香杜鹃叶95%乙醇提取物对赤拟谷盗、烟草甲和马铃薯茎线虫具有一定防治作用。     

生防菌株LB-1对烟草白粉病的抑制效果及对病菌孢子萌发的影响

  目的  为检测近缘毛壳菌（Chaetomium subaffine）LB-1对烟草白粉病的抑制效果。  方法  以中烟90为供试烟草品种,分析了LB-1对烟草白粉病的抑制效果及对病菌分生孢子萌发的影响。  结果  LB-1菌悬液叶面处理对供试烟草盆栽苗和离体叶段白粉病的发生无明显影响,但LB-1发酵液叶面喷施盆栽苗和浸蘸处理离体叶段均能显著抑制烟草白粉病的发生,防效和抑制率分别为44.90%和53.11%;显微镜检发现,LB-1发酵液能够引起白粉病菌孢子的皱缩和畸形。  结论  近缘毛壳菌株LB-1可用于防治烟草白粉病。      

大蒜粗提物对烟草黑胫病菌的室内抑制作用

采用平板抑菌法测定了大蒜乙醇和水提取物对烟草黑胫病菌的抑菌效果.结果表明:大蒜提取物对烟草黑胫病菌有显著抑制作用,且随大蒜提取物浓度的增大而增强;大蒜乙醇提取物对烟草黑胫病菌的抑制作用优于水提取物.0.2 g/mL和0.3 g/mL浓度大蒜乙醇提取物对烟草黑胫病菌的抑制率均为100.00%;而0.3 g/mL浓度的大蒜水提取物的抑制率亦为100.00%;大蒜水提取物与乙醇提取物的有效抑制中浓度分别为0.04 g/mL和0.03 g/mL.因此,可尝试以大蒜为原料研制植物保护剂来防治烟草黑胫病.     

核桃青皮提取物对几种采后病原真菌抑制作用的研究

采用生长速率法和孢子萌发法,研究了核桃青皮乙醇提取物对几种主要的采后致病真菌青霉菌(Penicillium citrinu)、匍枝根霉(Rhizopus stolonifer)、灰葡萄孢(Botryis cinerea)、镰刀菌(Fusarium oxysporum)和交链孢属(Alternaria)的抑制效应,确定其最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。结果表明,核桃青皮提取物对供试菌种均有明显的抑制效果,提取物浓度为20mg/mL时,对5种供试菌种菌丝生长和孢子萌发的抑制率均达到88%以上。不同浓度提取物对相同病原菌的抑制效果差异显著(p0.05),且随着浓度的增加抑制作用增强;提取物对5种孢子萌发的EC50值分别为:4.6384、10.2419、11.7834、8.3486和9.4516mg/mL,供试菌种菌丝的EC50值分别为:9.8142、11.6084、17.2737、10.1965和8.2892mg/mL。     

假升麻根乙醇提取物抑菌活性、抗氧化作用及其根中微量元素测定

目的：对假升麻根乙醇提取物的抑菌活性、抗氧化作用进行研究,并测定假升麻根中微量元素的含量。方法：以假升麻根80%乙醇提取物为材料,采用滤纸片法对5种常见细菌的生长抑制活性、最低抑菌浓度(MIC)进行测定,并讨论温度、压力、pH值及紫外线对提取物抑菌效果的影响。采用DPPH法测定其抗氧化作用;采用原子吸收分光光度法测定其微量元素铁、锰、锌、铜的含量;采用SPSS16.0统计分析软件对实验结果进行统计分析。结果：假升麻根80%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的MIC为3.125mg/mL,对沙门氏菌的MIC为6.25mg/mL,对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和链球菌的MIC均为50mg/mL。热处理、酸性环境等对抑菌作用均无明显影响。假升麻根乙醇提取物对DPPH自由基清除的最低质量浓度为0.0025mg/mL,最高质量浓度为0.32mg/mL,其清除率达85.5%,对DPPH自由基50%抑制质量浓度为0.009mg/mL。假升麻根中微量元素Fe含量为1538.3μg/g,Mn为149.8μg/g,Zn为54.98μg/g,Cu为9.625μg/g。结论：假升麻根有着良好的抑菌效果及较强的抗氧化作用,其微量元素含量较高,具有很好的开发价值。     

申嗪霉素对烟草黑胫病的毒力及防治效果

为探明申嗪霉素防治烟草黑胫病的潜力,在室内离体条件下测定其对烟草黑胫病菌菌丝生长、孢子囊形成和游动孢子释放的毒力,并通过温室盆栽和大田药效试验明确其对烟草黑胫病菌的防效及对烟草生长的影响。结果表明,申嗪霉素对沂水烟区黑胫病菌孢子囊的形成和游动孢子的释放抑制效果最好,EC₅₀值分别为0.31和0.35 μg/mL。室内防效结果表明,1%申嗪霉素悬浮剂（15 g a.i./hm²）对烟草黑胫病的防效为84.37%,显著高于25%甲霜灵可湿性粉剂（56.33%）和50%烯酰吗啉可湿性粉剂（80.55%）,而田间药效试验结果与室内防效基本一致,在冕宁和诸城两地1%申嗪霉素田间防效分别为90.49%和82.93%,显著高于对照药剂甲霜灵（71.89%,38.87%）和烯酰吗啉（78.42%,69.01%）。除此之外,申嗪霉素较甲霜灵和烯酰吗啉在提高株高、茎粗、有效叶片数及光合速率等指标效果更好。可见,申嗪霉素是防治烟草黑胫病的有效制剂,可作为甲霜灵和烯酰吗啉的轮换药剂使用。     

3株拮抗烟草尖孢镰刀菌的木霉菌筛选鉴定及促生防病效果评价

  目的  为筛选对烟草镰刀菌根腐病菌具有较好拮抗效果的菌株。  方法  从河南省主要烟叶产区健康烟株根际土壤中,分离纯化对尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）具有一定拮抗作用的真菌菌株,对筛选出的拮抗菌株进行形态学和分子生物学鉴定,并测定促生作用和防治效果。  结果  分离纯化得到的3株木霉菌分别为棘孢木霉（Trichoderma asperellum）Ta-0101、哈茨木霉（Trichoderma harzianum）Th-0201和毛簇木霉（Trichoderma velutinum）Tv-0207,具有较强的抑菌能力,对尖孢镰刀菌的抑菌率分别为91.24%、84.71%和82.48%。3株木霉菌对烟草种子根长和总长均有显著的促生效果,根长增长率分别为28.89%、25.92%和22.22%,根系活力也显著提高;对烟株最大叶面积和鲜重的促生作用明显,其中棘孢木霉Ta-0101促生效果最显著。3株木霉菌对尖孢镰刀菌的相对盆栽防效分别为78.95%、69.73%和69.73%,均高于70%甲基硫菌灵1000倍液处理的防效。  结论  3株拮抗木霉菌具有较好的抑菌效能和促生防病效果,应用前景良好。      

抗生素对根癌农杆菌的抑菌效果及对烟草叶片分化的影响

研究了卡那霉素和6种头孢霉素(头孢曲松钠、头孢噻肟钠、头孢哌酮钠、头孢唑啉钠,头孢拉定和头孢他啶)对烟草叶片分化及对根癌农杆菌LBA4404和烟草转化植株的抑制效果。结果发现:不同烟草品种对卡那霉素的耐受性差异较大,品种CV为受体材料时,叶分化和茎段根再生的适宜浓度为50 mg/L。品种T12为受体材料时,叶分化的适宜浓度为100 mg/L,而茎段根再生则为200 mg/L;头孢曲松钠和头孢噻肟钠对根癌农杆菌LBA4404的抑制效果好,并可使继代3次(60 d)的烟草转化植株脱菌;不同浓度的6种头孢类抗生素对烟草叶片的分化影响不大。从头孢类抗生素对农杆菌和烟草转化植株的抑制作用、外植体的分化影响来考虑,在用农杆菌LBA4404作为介导菌株时,可选用200 mg/L的头孢曲松钠或头孢噻肟钠来抑菌。      

烟草黑胫病菌0号生理小种不同条件下培养特性的研究

研究了烟草黑胫病菌0号生理小种的若干培养性状,为进一步展开与之相关的研究和综合防治提供理论基础。用培养基、光照、菌龄、诱导剂和诱导时间等不同因素研究了对烟草黑胫病菌0号生理小种的生长速度、产孢量和游动孢子释放量等方面的影响。结果表明,燕麦培养基较适于其生长和产生孢子囊,光照限制其生长;在本实验周期内,培养21 d的菌丝较适宜诱导,0.1%KNO3溶液浸泡菌丝有助于孢子囊的产生;经26℃培养72 h后,突降12℃处理0.5 h,结合1%葡萄糖溶液可促使孢子囊释放游动孢子,并延长后者的活动时间。     

拟氨基多糖抑菌剂K1、K2对烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑制效果研究

采用生长速率法测定了拟氨基多糖类抑菌剂K1、K2对烟草黑胫病原菌(Phytophthora parasitica var.nicotianae)的抑菌效果。结果表明:K1、K2对烟草黑胫病原菌均有显著的抑制作用,且抑制效果随K1、K2浓度的增大而增强;20 mL/L的K1、K2对烟草黑胫病原菌的抑制率分别为50.58%、84.68%,EC50分别为26.15、4.87 mL/L。     

巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium，Bm）的抑菌活性及定殖规律分析

为进一步明确巨大芽胞杆菌（Bacillus megaterium,Bm）菌株对烟草主要病害的抑制效果,利用半叶法、对峙平板法和抑菌圈法研究了Bm对烟草花叶病毒（TMV）、黑胫病菌和青枯病菌的抑制作用;利用抗生素诱导筛选抗药性标记菌株,研究其在烟草根际土壤和叶面上的定殖规律;同时制备了生防菌发酵液制剂,测定其田间防治效果。结果表明:Bm发酵液和发酵上清液对烟草花叶病毒的抑制率分别为88.4%和74.3%;Bm无菌发酵上清液对黑胫病菌菌丝生长的抑制率为67.5%,对青枯病菌的抑菌圈直径为10.03 mm。抗药性菌株Bm-rif生长性状与野生型无差异。室内定殖试验结果显示,Bm-rif稳定定殖菌量在非灭菌土壤中为0.04×105 cfu/g,在灭菌土壤中为0.47×105 cfu/g,均显著高于叶面定殖菌量;接种TMV-GFP前24 h叶面喷施发酵液对TMV初侵染的抑制率为44.04%。菌株发酵液稀释后喷淋烟株茎基部,对烟草黑胫病和青枯病的田间防治效果分别为68.09%和51.02%。因此,Bm具有抑菌活性且能在烟草根际土壤中有效定殖,具有开发为生防菌剂的潜力。      

基于锁核苷酸(LNA)增敏的植烟土壤中烟草黑胫病菌定量PCR检测方法

为了快速有效地检测植烟土壤中的烟草黑胫病菌的定殖数量,以一种锁核苷酸(LNA)引物为基础,进行了植烟土壤中烟草黑胫病菌数量的定量PCR 检测方法研究。结果表明:①与普通DNA引物相比,LNA 引物提高了PCR 反应的退火温度,减少了引物二聚体和非特异性产物的形成,提高了烟草黑胫病菌分子检测的灵敏度与特异性;②定量分析检测出14 个烟草-大蒜轮作土样中烟草黑胫病菌的定殖数量为2.76×103～5.20×104个/g,且在4～5 h 内完成检测,具有较高的灵敏度和检测效率。      

湖北省烟草黑胫病菌生理小种研究初报

在湖北省襄樊、恩施等主要烟区采集烟草黑胫病病株样本111个,分离纯化出30个烟草黑胫病菌株。采用游动孢子悬浮液注射接种鉴别寄主和TTZ(2,3,5-氯化三苯基四氮唑)颜色反应两种方法鉴定其生理小种类型。结果表明,供试的30个菌株在TTZ培养基中的反应皆为红色,有24个菌株在鉴别寄主反应中对L8和NC1071有较强致病力,而对N.nesophila无致病力,应为1号生理小种,占供试菌系的80%,为湖北省优势生理小种;其他6个菌株中有4个菌株对NC1071有较强致病力,但对L8致病力较弱,有1个菌株对L8和NC1071致病力较弱;1个菌株对NC1071致病力较弱,但对L8有较强致病力;6个菌株对N.nesophila无致病力,是否为2号生理小种还是其他致病型,尚待进一步研究确定。     

产几丁质酶菌的分离、筛选及其对烟草病原真菌的抑制作用

从福建、河南、安徽、云南、湖北采集了烟草根际土样100份,用几丁质选择培养基法共分离出产几丁质酶菌株62株,其中真菌32株、细菌22株、放线菌8株。通过透明圈法和还原糖法对分离的菌株进行了筛选,结果表明链霉菌属(Streplomycessp)产几丁质酶活性最高。并测定了几丁质酶活性较高的菌株对烟草赤星病菌和黑胫病菌的抑制效果,其中菌株9-1-1、9-2-1和19-2-1对黑胫病菌均有不同程度的抑制作用,以菌株9-1-1的抑菌效果最好,而这3种菌株对赤星病菌的抑制效果不明显。因此,菌株9-1-1有开发成为生防制剂用于防治烟草黑胫病的潜力。     

芫荽提取物对秀丽隐杆线虫体内抗氧化活性的初步探究

以南京高淳产芫荽为实验材料,研究其籽和成熟茎叶水提物对秀丽隐杆线虫体内活性氧的清除作用及对百草枯诱导秀丽隐杆线虫氧化应激损伤的保护作用,并揭示其作用机制。结果表明两种水提物均能够显著降低秀丽隐杆线虫体内活性氧水平(P<0.05),呈现剂量-效应关系;在百草枯引起的急性氧化测定中,两种水提物均可显著提高秀丽隐杆线虫氧应激状态下的生存率,但芫荽茎叶水提物的最低有效浓度为1 mg/mL,而芫荽籽水提物的最低有效浓度为0.1 mg/mL;实时荧光定量PCR结果说明,两种水提物可显著影响氧化衰老有关的ⅡS信号通路上daf-2和daf-16的基因表达量。因此,芫荽提取物对秀丽隐杆线虫起到了较好的体内抗氧化效果。     

短小芽孢杆菌AR03对烟草黑胫病菌的拮抗活性及其田间防效

为测定短小芽孢杆菌AR03对烟草黑胫病菌的拮抗作用及其发酵菌剂的田间防效,通过对峙培养法、固态发酵及田间小区试验的方法发现,AR03菌体和发酵液对烟草黑胫病菌具有很强的拮抗活性,而其除菌上清无拮抗活性,初步说明AR03分泌的抗菌物为胞内物质。AR03经固态发酵后的活菌数为3.82×1011cfu/g。该菌剂的田间小区试验结果显示,对混合有青枯病发生的烟草黑胫病的防治效果明显好于对照药剂,且与72%甲霜灵•锰锌可湿性粉剂协同防治效果最好。因此,AR03对烟草黑胫病和青枯病具有可持续控病作用,是一株极具开发潜力的生防菌株。      

套种大蒜对烟田土壤微生物群落及烟叶品质的影响

为探明烟田套种大蒜后土壤微生物群落变化,特别是烟田土壤中烟草根茎病菌的数量及对烟叶内在品质影响,在龙岩烟区开展了套种大蒜对烟田土壤微生物及烟叶品质影响试验。结果表明,烟田套种大蒜能明显减少烟田土壤中细菌、真菌数量,特别是减少烟草青枯菌和黑胫病菌数量,而增加烟田放线菌数量。套种大蒜对烟叶内在化学成分及烟叶评吸质量无明显负面影响。在烟草根茎病严重的局部烟田可通过套种大蒜控制该类病害的发生与危害,从而减少化学农药的使用,提高烟叶安全性,减少环境污染。     

裂叶荨麻体外降糖活性化学成分

目的:研究裂叶荨麻体外降糖活性及化学成分。方法:利用活性追踪法,通过α-葡萄糖苷酶抑制作用比较裂叶荨麻根、茎、叶体外降糖活性,比较根不同极性溶剂萃取相的体外活性。通过硅胶色谱、重结晶进行分离纯化,根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构,再评价其体外活性成分。结果:裂叶荨麻根乙醇提取物的乙酸乙酯相体外降糖活性最强,IC₅₀值为8.499 mg/mL,从中分离出6个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇、对羟基肉桂酸甲酯、正十六烷酸、对甲氧基苯甲醛、反式-对羟基肉桂酸、胡萝卜苷。化合物反式-对羟基肉桂酸和胡萝卜苷对α-葡萄糖苷酶的抑制活性较强,其IC₅₀值分别为5.234、1.693 mg/mL。结论:裂叶荨麻根乙醇提取物的乙酸乙酯相中的化学成分体外降糖活性较为明显。