国内外卡介菌亚株抗生素敏感特性分析

目的分析国内外不同卡介菌亚株的抗生素敏感特性。方法对国内外不同卡介菌亚株采用比例法进行一线抗结核药物[异烟肼(isoniazid,INH)、利福平(rifampicin,RFP)、链霉素(streptomycin,SM)及乙胺丁醇(ethambutol,EMB)]、二线抗结核药物[左旋氧氟沙星(levofloxacin,LFX)、丁胺卡那霉素(amikacin,AK)、卷曲霉素(capreomycin,CPM)、乙硫异烟胺(ethionamide,TH)及对氨基水杨酸(p-aminosalicylic acid,PAS)]敏感性分析,采用BACTEC MGIT960培养系统进行一线抗结核药物及吡嗪酰胺(pyrazinamide,PZA)抗生素敏感性分析。结果经比例法分析,不同卡介菌亚株均对一线抗结核药物敏感,除对TH耐药外,对其他二线抗结核药物均敏感;经BACTEC MGIT960系统分析,不同卡介菌亚株对RFP、SM、EMB均敏感,对PZA均耐药;卡介菌亚株BCG Pasteur 1173及BCG Tokyo172对INH敏感,而BCG Danish 1331菌株及中国卡介菌菌种BCG D2 PB302、BCG NIFDC 945 SⅢ均对INH耐药。结论中国生产用卡介菌菌种BCG D2 PB302及BCG NIFDC 945 SⅢ在抗生素敏感性方面与BCG Danish1331菌株一致,与其他亚株有差异。     

卡介菌基因组DNA制备工艺研究

目的　摸索制备高纯度卡介菌 (MycobacteriumbovisBacillusCalmette Gu啨ｒｉｎ ,BCG)基因组DNA(BCG -DNA)的制备工艺。方法　采用超声破碎结核杆菌 ,加热使蛋白变性初步去除菌体蛋白 ,进一步经蛋白酶消化 ,乙醇沉淀DNA组分 ,再经离子交换和凝胶过滤层析 ,去除残余菌体蛋白和多糖 ,精制DNA ,并进行质量检测。结果　所制备的BCG -DNA片段大小介于 2 0 0～ 2 5 0bp之间 ,纯度大于 95 % ,蛋白含量占 0 . 1% ,多糖残留占 3 .5 %。结论此方法制备的BCG- DNA纯度较高 ,且无有机溶剂残留 ,适用于BCG DNA制备。     

国内外卡介菌的分子遗传学特性

目的比较我国生产用卡介菌上海菌株与国际常用卡介菌亚株(巴斯德1173P2株、法国F6株、丹麦1331株、丹麦2株、日本172株、Connaught)在分子遗传学上的差异。方法应用PCR和多重PCR方法,对国内外不同卡介菌的各缺失区(RD1、RD2、RD8、RD14、RD16、nRD18、RDDenmark/Glaxo)、插入序列IS6110拷贝数及基因座SenX3-Regx3串联重复序列拷贝数进行检测。结果我国生产用卡介菌上海菌株(BCG Chinese)缺失RD1和RD2,不缺失RD8、RD14、RD16、nRD18及RDDen-mark/Glaxo,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有3个串联重复序列,PCR产物为353bp;巴斯德1173P2株缺失RD1、RD2、RD14和nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;法国F6株缺失RD1、RD2和nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;丹麦1331株缺失RD1、RD2及RDDenmark/Glaxo,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列;丹麦2株与丹麦1331株相似,只是SenX3-Regx3基因座有2个串联重复序列和3个串联重复序列并存的现象;日本172株只缺失RD1,RD16只显示401bp的产物,含有2个IS6110插入序列;Connaught株缺失RD1、RD2、RD8及nRD18,含有1个IS6110插入序列,SenX3-Regx3基因座有1个串联重复序列。结论我国生产用卡介菌上海菌株与国外其他卡介菌亚株在分子遗传学特性上有一定的差异。     

我国生产用卡介菌的传代稳定性

目的研究我国生产用卡介菌上海株在传代过程中分子遗传学特性的稳定性。方法应用多重PCR法,对我国生产用卡介菌上海株工作种子批及其不同代次菌的各缺失区、插入序列IS6110及基因座SenX3-RenX3串联重复序列拷贝数进行检测。结果我国生产用卡介菌上海株的工作种子批及其第6、9、12代菌均缺失RD1、RD2,未缺失RD8、RD14、RD16、nRD18及RDDenmark/Glaxo;含有1个IS6110插入序列和3个SenX3-RenX3基因座串联重复序列。结论我国生产用卡介菌上海株在传12代以内,其分子遗传学特性是稳定的。     

卡介苗及卡介菌多糖核酸提取物的免疫调节作用及临床应用

目的卡介苗及卡介菌多糖核酸提取物具有免疫调节及抗炎作用,临床应用广泛,可用于多种免疫失调或免疫水平下降疾病的治疗。本文就卡介苗及卡介菌多糖核酸提取物的免疫调节作用及临床应用效果作一综述。     

卡介菌多糖核酸相对分子质量分布及其热稳定性

目的 测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,并观察其热稳定性。方法 采用高效液相分子筛凝胶色谱法测定相对分子质量,并用煮沸或高压强热处理。结果 用该法测定卡介菌多糖核酸相对分子质量分布,有2个色谱峰,第1峰峰值相对分子质量为783 000,第 2峰为 3 200,面积分别为 21％和 79％。热处理后,其第 1峰相对分子质量大约有8％解聚合成第2峰。结论 卡介菌多糖核酸相对分子质量分布集中在3200,约占80％,对热较为稳定。     

卡介菌多糖核酸注射液对继发性暂时性免疫功能低下儿童的调节作用

目的观察卡介菌多糖核酸注射液对继发性暂时性免疫功能低下儿童的调节作用。方法选择临床上反复呼吸道感染的儿童,检测T细胞亚群和免疫球蛋白,以其中至少一项指标低于同年龄段正常值最低限的52名为观察对象,给予卡介菌多糖核酸注射液治疗,疗程3个月。3个月后复查T细胞亚群和免疫球蛋白。结果治疗后细胞免疫和体液免疫均得到不同程度的改善,治疗前后各项指标相比,差异均有非常显著或显著意义。结论卡介菌多糖核酸注射液对反复呼吸道感染所致免疫功能低下儿童疗效确切。     

卡介菌不同代次制备的疫苗质量分析

目的分析由卡介菌上海D2株工作种子批连续传代至不同代次的菌种制备的疫苗的质量差异。方法选取自工作种子批(11-007)传代至6、9、12代的单批培养物制备的皮内注射用卡介苗,采用多重PCR法鉴定特异性缺失区RD1;对原液的单位产能、半成品的沉降率、成品的效力及热稳定性进行测定,并对结果进行统计学分析。结果6、9、12代菌种培养物制备的卡介苗成品缺失RD1区,具有卡介菌特征;各代次制备的疫苗单位产能、沉降率、动物效力、热稳定性检测结果差异均无统计学意义(P>0.05),且疫苗动物效力、热稳定性检测结果均符合《中国药典》三部(2010)版及国家药监局批准的企业注册标准。结论工作种子批连续传代至不同代次的卡介菌制备的皮内注射用卡介苗均缺失RD1区,具有卡介菌的特征,关键质量指标安全、有效、一致。     

耻垢分枝杆菌与卡介苗作为载体在鼠结核病治疗中的作用比较

目的比较耻垢分枝杆菌(MS)与卡介苗(BCG)作为载体在鼠结核病治疗中的作用。方法分别以不同剂量的MS和BCG免疫BALB/c小鼠,观察二者的致病作用。以结核分枝杆菌H37Rv感染BALB/c小鼠4周后,分别用生理盐水、MS、GLS/IL-12、重组MS、BCG及GLS/IL-12重组BCG治疗6次,于第6次治疗后7d处死小鼠,检测肺、脾荷菌量、血清IL-12和IFN-γ水平、脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平及肺、脾组织中颗粒溶素表达,并观察小鼠肺组织病理改变。结果重组MS和重组BCG组器官荷菌量明显低于MS和BCG组;重组MS和重组BCG组血清IL-12和IFN-γ水平明显高于MS和BCG组,MS和BCG组明显高于生理盐水组;重组MS和重组BCG组脾淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的水平明显高于其他组;MS与BCG组比较,重组MS与重组BCG比较,荷菌量、病理变化、肺、脾中的IL-12和IFN-γ水平差异均无显著意义;淋巴细胞中的IFN-γ和TNF-α水平,MS与BCG组差异有显著意义,而重组MS与重组BCG组差异无显著意义;重组MS和重组BCG组在肺、脾中均有颗粒溶素表达;MS所致病变比相同剂量BCG轻。结论MS与BCG一样,可将要表达的基因靶向递送到相应的组织,并诱导特异性细胞免疫,同时其在体内的副作用低于BCG,因此可作为良好的有机载体。     

卡介菌多糖核酸治疗过敏性鼻炎合并哮喘的临床疗效

目的观察卡介菌多糖核酸对过敏性鼻炎合并哮喘的临床治疗效果。方法将98例2001年初～2009年初在吉林市中心医院耳鼻喉科就诊的过敏性鼻炎合并哮喘患者随机分为治疗1组、治疗2组及对照组,3组均给予相同的过敏哮喘基础治疗,治疗1组再经肌肉注射卡介菌多糖核酸(BCG polysaccharide and nucleic acid,BCG-PSN)注射液,疗程3个月;治疗2组再经肌肉注射BCG-PSN,疗程6个月;对照组只进行基础治疗,不给予BCG-PSN。观察疗程结束后1年内3组患者过敏性鼻炎及哮喘的发作情况,根据哮喘的发作次数及程度判断疗效。结果疗程结束后0～6个月内,治疗1组和治疗2组的过敏性鼻炎及哮喘的临床症状明显好转,显效率和总有效率均明显高于对照组(P<0.05或P<0.01);疗程结束后7～12个月,治疗2组的显效率和总有效率均明显高于对照组(P均<0.05)。BCG-PSN治疗中未见明显不良反应。结论BCG-PSN治疗过敏性鼻炎合并哮喘疗效确切,安全可靠,远期疗效与疗程有关。     

不同菌种卡介苗人体免疫应答比较

我们于1983～1991年,分别用六株菌种制备的六种试制苗和全国五个生物制品研究所生产的5种成品苗,在杭州市、大连市和辽宁省3个点,对17524名新生儿接种,分别于接种后不同时间用PPD作皮肤试验进行免疫反应观察。结果表明,试制苗大连点12周的阳性率以上海株苗、巴西株苗为高,北京株苗为低;5年持续阳性率以上海株苗为最高,北京株苗为最低。在杭州点,以上海株苗和日本株苗为最高,亦以北京苗为低。成品苗杭州点和辽宁点12周的阳性率以上海所苗为最高,兰州所苗为最低。综合评议均以上海所苗为优。其淋巴结化脓仅出现在活菌数较高的制品中,发生率不超过1‰。     

乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗细胞免疫的研究

目的评价乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗对小鼠细胞免疫的影响。方法采用BALB/c小鼠,试验组分为联合疫苗组、卡介苗组、乙肝疫苗组,对照组分为空白组和保护剂组,各组小鼠分别于接种后1个月及2个月,取脾进行淋巴细胞转化试验以及细胞因子和T淋巴细胞表面标记检测。结果联合疫苗组淋巴细胞转化刺激指数、IL-2含量均明显高于卡介苗组和乙肝疫苗组;CD4+/CD8+值高于单价乙肝疫苗组,而与卡介苗组差异无显著意义。结论乙型肝炎疫苗-卡介苗联合疫苗能有效地诱导细胞免疫。     

冻干卡介苗免疫持久性观察

笔者曾于1985年以效果肯定的液体卡介苗为对照,对冻干卡介苗进行了接种效果与接种反应的观察。在此基础上,4年后,剔除各种因素所致的失访者,又对现存的361名观察对象进行了免疫持久性观察,结果,179名冻干苗接种者阳转率为59.22%,182名液体苗接种者阳转率为64.29%,两者无显著性差异(X~2=0.9815);两苗阳转情况与4年前相比,X~2值分别为0.1119和0.2543,P 均大于0.05,显示两苗的免疫持久性相似,至少在4年中可维持可靠的免疫力。进一步分析其反应强度,可见两者硬结平均直径分别有97.17%和96.58%集中在5～14mm之间,似可说明,卡介苗初免成功后,由于自然感染的作用可加强卡介苗诱导的免疫,所以,在免疫持久性方面,不同的卡介苗剂型均无差异。     

钩端螺旋体外膜蛋白基因重组载体构建及在卡介菌中的表达

目的　研制一种高效广谱的新型钩体疫苗。方法　用PCR方法扩增致病性钩端螺旋体赖型 0 17株外膜蛋白OmpL1基因 ,将其克隆入大肠杆菌—分枝杆菌穿梭质粒载体pMV2 6 1和pMV36 1中。结果　筛选到两个重组载体pBQ1和pBQ2 ,通过电穿孔导入卡介菌 ,重组体经诱导表达了相对分子质量约为 35 0 0 0的融合蛋白。结论　卡介菌能有效表达钩体抗原蛋白     

卡介苗加α-干扰素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的疗效

目的　探讨卡介苗 (BCG)加α 干扰素 (α IFN)膀胱灌注预防膀胱癌术后复发的疗效。方法　对 66例经病理证实为膀胱癌的患者分为BCG组与BCG加α IFN组 ,分别进行疗效对比观察。结果　BCG组复发率为2 6.7% ,BCG加α IFN组复发率为 8.3 % ,两组比较差异有显著性意义 ,(χ2 =3 .96,P <0 .0 5 )。结论　BCG加α IFN联合用药能明显降低膀胱癌的复发率     

新生儿不同时期接种卡介苗的反应

作者观察了出生后不同时期的婴儿,接种卡介苗后12周的卡痕和结素反应,以及接种后一年内淋巴结反应。发现出生后3～6个月的婴儿,接种后其结素反应平均直径明显大于出生后3天内和1～3个月的婴儿(P<0.01)。而卡痕大小和淋巴结化脓反应率相似。说明出生后3～6个月的婴儿对卡介苗的免疫应答能力高于3个月内的婴儿。     

皮内注射用卡介苗特异性鉴别试验多重PCR检测方法的建立及验证

目的建立皮内注射用卡介苗(Bacillus Calmette Guerin vaccine,BCG)特异性鉴别试验的多重PCR法,并进行验证。方法根据GenBank登录的Pasteur 1173P2株序列(AM408590. 1)设计并合成引物,以制备的BCG特异性鉴别试验国家参考品(简称BCG鉴别参考品)DNA为模板,多重PCR法扩增其特异性缺失区RD1,产物经3%琼脂糖凝胶电泳鉴定,验证方法的重复性、中间精密度、特异性、耐用性及灵敏度;采用该方法检测8批皮内注射用BCG供试品。结果 BCG鉴别参考品在重复检测6次、2名检测人员分别重复检测3 d、不同PCR退火温度及不同DNA聚合酶加量时均扩增出约200 bp的核酸片段;最低可检10 pg/mL的目的基因,仅对结核分枝杆菌H37Rv及皮内注射用BCG样品DNA扩增出特异性条带。经该方法检测,8批供试品PCR产物电泳均可见单一的目的条带,无RD1序列存在,大小与BCG鉴别参考品一致。结论多重PCR法的重复性、中间精密度、特异性、耐用性及灵敏度良好,可应用于皮内注射用BCG特异性鉴别试验。     

乙型肝炎疫苗和卡介苗同时或分别接种的免疫应答

作者应用乙肝疫苗和卡介苗同时或分别接种不同月龄婴儿,结果表明,同时与分别接种的免疫应答类似,临床反应均轻微。但接种儿童月龄较大 PPD 阳转率较高,平均硬结直径较大,抗-HBs 的 GMT 较高。