东宝药业启动基因重组人胰岛素二期工程

通化东宝药业日前进行了基因重组人胰岛素及制剂二期工程建设，这个扩产项目已通过国家发展和改革委员会批准立项。     

重组人胰岛素样生长因子-1工程菌发酵培养基的优化

在摇瓶条件下,以M9培养基为基础,采用单因素实验和正交实验,对适合于表达重组人胰岛素样生长因子-1工程菌生长的高密度发酵培养基进行了优化。确定最佳培养基配方为：葡萄糖0．4％、甘油1．5％、酵母粉3％、胰蛋白胨3％、Na2HPO4 1．2％、KH2PO4 0．6％、NH4Cl0．1％、NaCl0．20％、MgSO4 0．048％,在此优化培养基中培养14h,工程菌菌体密度0D600达7．5。     

重组赖脯胰岛素中四环素残留量微生物学检测方法的建立

目的建立重组赖脯胰岛素中四环素残留量微生物学定量检测方法。方法采用管碟法对重组赖脯胰岛素中四环素含量进行测定,以四环素浓度对数为纵坐标,抑菌圈半径平方值为横坐标绘制标准直线。同时验证方法的同质性、最低检出限及准确性。采用建立的方法检测3批重组赖脯胰岛素原料中四环素的残留量。结果重组赖脯胰岛素为4 mg/mL时,其作为基质不影响方法的准确性;浓度为10 mg/m L时,存在基质效应,影响检测的准确性。该方法的最低检出限为0. 12μg/mL,最低定量限为0. 24μg/mL。基质浓度为4 mg/mL时,0. 60、0. 84和0. 96μg/mL四环素标准品溶液的四环素回收率分别为95. 59%、98. 78%和96. 17%;基质浓度为10 mg/mL时,回收率分别为82. 55%、89. 38%和82. 30%。3批重组赖脯胰岛素原料中均未检出四环素的残留。结论成功建立了一种适用于定量检测重组赖脯胰岛素中四环素残留量的微生物学检测方法,且具有良好的准确性。     

重组赖脯胰岛素中四环素残留量微生物学定量检测方法

目的 建立重组赖脯胰岛素中四环素残留量微生物学定量检测方法。方法 以管蝶法为依据,在开展测定工作时,使用标准直线完成相关的任务,在36℃的环境中培养20～22 h,在开展测量工作时,使用的主要设备为CAM-ⅢB智能型抑菌圈测量仪,横坐标为四环素浓度的对数,纵坐标为抑菌圈半径的平方,实现对标准直线的有效绘制。结果 在使用相关的方法时,四环素的最低检出限和最低定量限分别为0.12μg/mL和0.24μg/mL。在基质浓度达到4 mg/mL以后,对0.96μg/mL、0.84μg/mL和0.60μg/mL四环素标准品溶液而言,四环素回收率能达到96.17%、98.78%和95.59%;在基质浓度达到10 mg/mL以后,对0.96μg/mL、0.84μg/mL和0.60μg/mL四环素标准品溶液而言,四环素的回收率则达到了82.30%、89.38%和82.55%。3批重组赖脯胰岛素原料中均未检出四环素的残留。结论 当重组赖脯胰岛素溶液的浓度标准达到4 mg/mL左右时,在使用该方法以后,能够准确地获取四环素含量的定量信息。     

强化胰岛素对脓毒症患者治疗的临床观察

目的探讨脓毒症患者应用强化胰岛素治疗的效果。方法收集140例脓毒症患者,分为观察组与对照组,观察组(80例)应用常规治疗及强化胰岛素治疗,对照组(60例)应用常规治疗。结果观察组患者呼吸机支持时间及住院时间明显短于对照组,观察组患者死亡率明显低于对照组。结论脓毒症患者及早应用强化胰岛素治疗,疗效明显,适合临床应用。     

污水毒性检测技术的研究进展

文章主要介绍目前用于污水毒性检测的几种技术方法,通过分析各检测方法的优缺点,了解其各自目前的发展现状,最后提出改进建议与未来技术的发展趋势,为提高污水处理能力提供有利的技术支持。     

低温干燥过程中LEA-motif对热敏性药物胰岛素的活性保护研究

用LEA蛋白特征重复片段作为干燥活性保护剂,研究其对热敏性胰岛素的干燥保护效果和作用机理。结果表明,LEA-motif保护的胰岛素的三维活性结构保持良好,并且氨基酸残基振动明显减弱,LEA-motif保护的胰岛素六聚体冻干后的效价稳定,说明LEA蛋白特征重复片段对热敏性蛋白药物有良好的干燥活性保护效果。     

水质的生物毒性检测方法

水质生物毒性检测是水环境质量评价的重要内容。生物检测技术随着各学科间交叉发展的深入而产生了新的活力。该文综述了当前生物毒性检测技术的主要类型以及应用现状,并对未来的重点研究方向提出了一些建议,以期为水毒理学的持续发展提供科学参考。     

发现抑制胰岛素分泌的蛋白质

日本群马大学生物研究所日前宣布，他们与该国理化研究所进行的联合研究发现，存在于胰腺β细胞内的一种蛋白质能抑制胰岛素的分泌。专家认为，今后若进一步探明其中的机制，或许能从这种蛋白质人手开发出治疗糖尿病的新方法。     

垃圾渗滤液生物毒性检测技术的应用与展望

垃圾渗滤液对周边地表水、地下水及土壤会产生较大的环境隐患。渗滤液排放标准中主要考察COD、BOD5、重金属等理化指标。但通过经济高效的生物毒性检测技术更能体现出渗滤液对环境的威胁程度。目前渗滤液生物毒性检测技术种类繁多,但缺乏系统的总结与对比。介绍了不同营养级生物作为垃圾渗滤液生物毒性检测受试生物的应用情况,分析了不同生物毒性检测技术的利弊,展望了垃圾渗滤液生物毒性检测技术的发展方向。     

rhGM-CSF喷雾剂的制备及其药效学分析

目的制备重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)喷雾剂,并分析其药效性能。方法以复合稳定剂维持主药生物稳定性,加入吸收促进剂,以5种配方制备rhGM-CSF液体喷雾剂,并对其进行主要质量指标、稳定性检测及动物药效学试验。结果以优选的制剂配方配制的rhGM-CSF喷雾剂各项主要质量指标均合格,且稳定性良好。动物药效学试验结果显示,此喷雾剂与抗病毒药物联合使用,抵抗流感病毒感染的效果更好,且具有抗单纯疱疹病毒感染和抗白色念珠菌感染的作用。结论所制备的rhGM-CSF喷雾剂药效良好,具有临床应用价值。     

重组人干扰素γ的分子结构及其生物活性

目的 了解重组人干扰素γ的分子结构及其生物活性。方法 采用细胞病变抑制法，以日本干扰素γ参考品为标准，计算国际单位。以4种不同方法检测相对分子质量。结果 比活性≥3．0×107 IU/mg蛋白，相对分子质量低于理论值16900。氨基酸分析结果只有129个氨基酸，少于应有数目。N端氨基酸序列分析结果，15－19个氨基酸与理论序列相符。结论 重组人干扰素γ C末端氨基酸有缺失，但不影响其生物活性。     

重组人干扰素α2b喷雾剂的研制

目的重组人干扰素α2b(以下简称为rIFNα2b)喷雾剂的试制及临床前实验。方法将重组人干扰素α2b原液进行稀释,调整pH和渗透压,加入适宜稳定剂,除菌过滤后分装于带有定量喷雾装置的棕色玻璃瓶。对配制好的制品分别进行理化和生物学试验、稳定性试验、鼻腔局部刺激性试验、急性毒性试验、长期毒性试验和动物体内抗病毒试验等。结果连续3批制品经检定各项指标均合格,2～8℃保存24个月后生物学活性无明显下降,使用安全,无不良反应。其他各项检定指标均符合现行《中国药典》的要求。结论研制的rIFNα2b喷雾剂安全、稳定,具有一定的抗病毒作用和潜在的临床应用价值。     

重组水蛭素生物学活性检测参考品的制备和标定

目的制备重组水蛭素(Hirudin)生物学活性检测参考品,并标定其生物学活性。方法按照WHO相关规定制备、分装和冻干参考品,经全面检测合格,用TH生色底物法进行体外生物学活性检测。结果外观、无菌试验合格,水分含量为0.8%。经过10次标定,平均生物学活性为12 701 ATU/支,标准差为2 226 ATU/支,变异系数为17.5%。在-20℃、4℃和25℃条件下,生物学活性可以稳定保持9个月。结论该批重组水蛭素各项指标均符合要求,性质稳定,可作为国家参考品,用于重组水蛭素的生物学活性检测。     

重组人肝再生增强因子的纯化及生物学活性分析

目的对在大肠杆菌中表达的重组人肝再生增强因子(rhALR)进行分离纯化及生物学活性分析。方法以大肠杆菌DH5α发酵表达重组人肝再生增强因子,经包涵体洗涤、变性、目的蛋白复性,以离子交换、分子筛等技术纯化,并进行一系列检定。结果目的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性及柱层析纯化,纯度大于98%,SDS-PAGE测定相对分子质量为30000,MOLDI-TOF-MS测定其相对分子质量为30780·522,N-末端15个氨基酸与理论序列一致。Western blot证实rhALR正确表达,等电点5·85~6·85,氨基酸含量与理论值基本符合。动物实验证实rhALR具有明显的促进CCl4毒性肝损伤小鼠肝细胞修复活性。结论经柱层析纯化的rhALR具有促进小鼠CCl4肝损伤肝细胞修复的活性。     

重组人干扰素βSer~(17)的结构及活性分析

目的分析大肠杆菌表达的重组人干扰素βSer17(rhIFN-Ser17)的分子结构及其生物学活性。方法通过West-ernblot、氨基酸末端测序、质谱及生物学活性分析等,对大肠杆菌表达的rhIFN-Ser17分子进行鉴定。结果大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17的N末端20个氨基酸及C端2个氨基酸序列与文献报道一致,产物的相对分子质量为19877·9,比活性超过2×107IU/mg蛋白。结论大肠杆菌表达的rhIFN-βSer17分子结构与理论推测值完全一致。     

重组人红细胞生成素质量控制体系研究

目的研究重组人红细胞生成素(rHuEPO)质量控制体系。方法用网织红细胞分析仪测活法测定rHuEPO体内生物学活性。比较不同的等电聚焦电泳条件、蛋白含量测定方法和牛血清白蛋白检测方法。按rHuEPO特点进行其他项目的检测。结果采用全自动网织红细胞计数仪检测rHuEPO体内生物学活性方法简便可靠;电泳时添加尿素可增加区带清晰度和条带清晰度;采用BSAELISA检测牛血清白蛋白含量可准确定量;免疫印迹试验可有效地检测rHuEPO成品质量。结论本研究建立了一套完善的rHuEPO质量控制体系。     

重组人干扰素α2b内毒素检查法的研究

目的研究鲎试剂法与家兔法检测重组人干扰素α2b内毒素结果的相关性,并参照家兔热原试验的阈值量,来确定本制品质量标准中内毒素的限量标准。方法分别用不同浓度的内毒素溶液和含不同浓度内毒素的供试品溶液进行家兔热原质试验,确定供试品内毒素限值,并在此限值下进行内毒素检测,方法均参照2000年版《中国药典》和2000年版《中国生物制品规程》进行。结果在含不同浓度内毒素溶液的家兔热原质试验中,致热阈值小于5.0EUml。在含不同浓度内毒素供试品溶液的家兔热原质试验中,致热阈值小于1.25EUml。以此确定本品内毒素限值,检测该制品的内毒素含量,结果均符合规定。结论本品在内毒素含量小于3.5EU500万单位dose的范围内,根据具体的对照实验及制品的用途来规定细菌内毒素限值,可用鲎试剂法代替家兔法检测注射用重组人干扰素α2b冻干制剂的热原质。     

人肝细胞生长因子β链在E.coli中的表达、纯化及活性测定

目的 为获得重组人肝细胞生长因子β(rhHGF-β)的高效表达体系,分离纯化rhHGF-β,以期研究其在生物学和医学中的作用。方法 从人胎肝组织中提取总RNA,采用RT-PCR技术,对HGF-β基因加工修饰,与载体PBV220重组,构建rhHGF-β的表达载体,转化大肠杆菌,筛选rhHGF-β的高效表达菌株。对rhHGF-β进行粗纯化,透析复性后MTT法检测生物活性。结果 获得了rhHGF-β完整的cDNA序列,重组克隆的酶切结果与设计一致。目的 蛋白的表达量占全菌蛋白的30％,粗纯化后纯度达90％,复性产物能刺激大鼠肝细胞的增殖。结论 建立了rhHGF-β的表达体系,获得了具有生物活性的rhHGF-β,为进一步大量制备和研究HGF的生物学功能提供了重要的实验数据。