乳清多肽的分离纯化及体外抗氧化活性研究

采用乳酸菌发酵乳清制备乳清多肽,利用超滤和凝胶Sephadex G-25分离纯化乳清多肽,并研究了超滤后乳清多肽对羟自由基、氧自由基和DPPH自由基的清除作用。结果表明,超滤后乳清多肽主要包含两个级分,分子量分别为2 031 u和328 u,对羟自由基、氧自由基和DPPH自由基具有清除作用。     

脱脂羊脑蛋白水解多肽的分离纯化及抗氧化活性

为制备羊脑蛋白抗氧化肽,本实验对脱脂羊脑蛋白含量及氨基酸组成进行了分析;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）对枯草芽孢杆菌中性蛋白酶不同酶解时间的酶解液分子质量进行了分析;采用交联葡聚糖凝胶Sephadex G-25和Sephadex G-15对羊脑酶解产物进行了逐级分离纯化,以羟自由基（·OH）和亚硝酸根离子清除能力为指标对分离组分进行抗氧活性评价,并对纯化后的组分抗氧化活性进行了测定。结果表明,脱脂羊脑粉中蛋白含量为60.55%,在测定的17 种氨基酸中,谷氨酸和天冬氨酸这两种酸性氨基酸含量最高,且含有7 种必需氨基酸;羊脑蛋白经酶解后,分子质量集中在10 kD以下;经Sephadex G-25纯化后,得到了6 个组分,其中组分F4的抗氧化活性最强,组分F4经SephadexG-15纯化后,得到3 个组分,其中组分F4-2的抗氧化活性最强,组分F4-2对1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基、·OH、超氧阴离子自由基（O2－·）、亚硝酸根离子的半数抑制率IC50分别为1.64、2.47、7.98、5.14 mg/mL。     

鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性

以鳕鱼骨为原料,采用热水提取法提取胶原蛋白,并采用中性蛋白酶、复合蛋白酶、酸性蛋白酶和胃蛋白酶分别进行酶解制备鳕鱼骨胶原蛋白肽。以对.OH、DPPH.和O2-.自由基的清除率作为评价指标,比较4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽的抗氧化活性。结果表明:4种蛋白酶制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基均有一定的清除能力,且其清除能力随样品质量浓度的增大而增强;4种蛋白酶酶解制备的鳕鱼骨胶原蛋白肽对3种自由基的清除能力各不相同,其中对.OH的清除能力最强且有较好的量-效关系;当多肽质量浓度在4～10 mg/mL时,4种蛋白酶酶解胶原蛋白肽对DPPH.的清除能力优于对O2-.的清除能力。     

鲑鱼鱼精蛋白酶解产物中抗氧化活性肽的分离纯化研究

研究发现鲑鱼鱼精多肽具有较强的羟自由基、DPPH(1,1-二苯基-2-苦基肼)和超氧阴离子清除活性.通过凝胶色谱、离子交换色谱和反相高效液相色谱分离方法,最终分离到一系列具有抗氧化性的肽段.     

文蛤多肽组分的分离及其抗氧化活性研究

采用两种蛋白酶水解文蛤,用Sephadex G-50凝胶层析分离文蛤水解液,SDS-PAGE 凝胶电泳系统分析水解液多肽的分子质量范围,并对水解液和分离后的多肽组分进行抗氧化活性研究。结果表明,水解液中主要包括两种组分,组分Ⅰ和组分Ⅱ,其分子质量主要分布在66ku和13ku左右。组分Ⅱ对氧自由基和羟自由基有较高的清除率,分别达56.36%和74.60%。     

绿茶抗氧化肽的分离纯化与抗氧化活性研究

通过饱和硫酸铵盐析的方法从干绿茶中提取得到绿茶粗蛋白,粗蛋白透析除盐后用葡聚糖凝胶Sephadex G-75层析柱进行凝胶色谱法分离纯化,收集具有抗氧化活性的蛋白样品,并冷冻干燥,同时利用SDS-PAGE的方法对凝胶分离后收集的活性样品进行纯度的鉴定及相对分子质量的测定,并采用·OH清除法及O-2·清除法研究绿茶抗氧化多肽纯品的抗氧化活性。结果表明,绿茶抗氧化多肽经葡聚糖凝胶sephadex G-75层析柱后,得到很好的分离和纯化,在SDS-PAGE电泳图谱上只有1条条带,其相对分子质量为2~15ku;绿茶抗氧化多肽对·OH具有很强的清除作用,其半清除浓度(IC50)为0.069μg/mL;对O-2·也具有较强的清除作用,其半清除浓度(IC50)为18.462μg/mL,与VC的清除作用(IC50为11.186μg/mL)相当。     

绿茶抗氧化肽的分离纯化与抗氧化活性研究

通过饱和硫酸铵盐析的方法从干绿茶中提取得到绿茶粗蛋白,粗蛋白透析除盐后用葡聚糖凝胶Sephadex G-75层析柱进行凝胶色谱法分离纯化,收集具有抗氧化活性的蛋白样品,并冷冻干燥,同时利用SDS-PAGE的方法对凝胶分离后收集的活性样品进行纯度的鉴定及相对分子质量的测定,并采用·OH清除法及O-2·清除法研究绿茶抗氧化多肽纯品的抗氧化活性。结果表明,绿茶抗氧化多肽经葡聚糖凝胶sephadex G-75层析柱后,得到很好的分离和纯化,在SDS-PAGE电泳图谱上只有1条条带,其相对分子质量为2¹5ku;绿茶抗氧化多肽对·OH具有很强的清除作用,其半清除浓度（IC50）为0.069μg/mL;对O-2·也具有较强的清除作用,其半清除浓度（IC50）为18.462μg/mL,与VC的清除作用（IC50为11.186μg/mL）相当。      

不同领域的活性多肽及其分离纯化的研究进展

本文简要介绍了活性多肽的生物学效应及不同领域中活性多肽的应用情况,并概述了新型技术分离纯化活性多肽的研究进展。     

大豆多肽的分离纯化与抗氧化活性研究

对Protamex蛋白酶水解制得的大豆多肽进行超滤膜过滤后,对得到的相对分子质量6000以下的多肽用葡聚糖凝胶Sephadex LH-20进行凝胶色谱分离纯化,对超滤膜过滤后得到的多肽样品和凝胶分离得到的样品用Rancimat测定其抗氧化活性,利用高效凝胶色谱测定样品相对分子质量分布。结果表明6000以下大豆多肽具有很好的抗氧化活性,但不同相对分子质量范围的多肽其抗氧活性有一定差异,抗氧化性最好的组分a和组分b的相对分子质量分别约为630和310。     

鲢鱼骨胶原多肽的制备及其抗氧化活性研究

以鲢鱼骨为原料,经蛋白酶酶解、Sephadex G-25凝胶色谱分离纯化制备具有高抗氧化活性的胶原多肽。首先以胶原多肽得率和水解度为评价指标,从中性蛋白酶、碱性蛋白酶、风味蛋白酶、胰蛋白酶和复合蛋白酶中筛选最优酶,并采用单因素实验、响应面优化实验确定鲢鱼骨胶原多肽的最佳制备工艺;然后采用Sephadex G-25凝胶色谱进行分离纯化,得到不同分子质量多肽组分并分析其氨基酸组成;以ABTS⁺·清除能力和还原能力为指标,考察鲢鱼骨胶原多肽各组分的抗氧化活性。结果表明,酶解鲢鱼骨的最优酶为复合蛋白酶,制备胶原多肽的最佳工艺:酶添加量为8 220 U/g、酶解温度为51丈、酶解时间为4.5 h,此时胶原多肽得率为49.00%;经Sephadex G-25分离得到5个组分,其分子质量为14～9 788 Da,氨基酸组成符合胶原蛋白的特征;抗氧化实验表明组分Ⅳ具有最强的ABTS⁺·清除能力和还原能力,其IC₅₀/OD_1.0分别0.02 mg/mL和19.16 mg/mL。该研究为鱼骨资源的开发利用提供了技术参考...     

鹰嘴豆抗氧化肽的分离纯化、鉴定及其抗氧化活性

以发芽鹰嘴豆为原料,制备鹰嘴豆抗氧化肽,采用葡聚糖凝胶对其进行分离纯化,通过测定自由基清除能力、还原力、脂质氧化抑制能力、对自由基诱导的蛋白质和DNA损伤的保护能力评价纯化肽的抗氧化活性。对纯化肽进行鉴定合成以验证其抗氧化活性,并对合成多肽进行安全性预测。结果表明,纯化后的多肽有较好的自由基清除能力、还原力,且对亚油酸自氧化有明显的抑制作用,对自由基诱导的蛋白质和DNA损伤有保护作用。经预测,合成多肽无毒性与致敏性。综上,发芽鹰嘴豆水解物具有抗氧化能力,可用来制备抗氧化肽,从而增加鹰嘴豆的利用价值。     

蟹抗氧化肽的分离纯化及活性研究

酶解梭子蟹下脚料获得抗氧化肽粗品。采用葡聚糖凝胶G-50 与G-25 进行分离纯化,对纯化样品的相对分子质量分布、抗氧化特性和氨基酸组成进行测定。结果表明：经分离得到的组分3 抗氧化性较强,其相对分子质量在1096.5 左右,经HPLC 分析其已基本达到纯化;经氨基酸分析其由11 种氨基酸组成,其中具有抗氧化能力的酪氨酸、半胱氨酸和组氨酸所占比例很高。     

新疆阿魏菇抗氧化肽分离纯化及抗氧化性质

采用超滤法、离子交换层析和凝胶过滤层析分离阿魏菇抗氧化多肽,研究其抗氧化性能。以胃蛋白酶-胰蛋白酶联合酶解阿魏菇多肽水解物为原料,采用超滤法分离阿魏菇水解液,使用10 000的超滤膜,将阿魏菇水解液分离成10 000以下的多肽组分和大于10 000的多肽组分,小于10 000的多肽组分的·OH自由基清除能力和DPPH·自由基清除能力较高。小于10 000的多肽组分经DEAE-32纤维素分离,得到3个洗脱峰,其中P3组分的羟基清除能力较高,达到50.22%。P3组分采用葡聚糖凝胶Sephadex G-25分离,在220 nm处得到5个洗脱峰,组分P3-2的羟自由基清除最高,达到77.23%,具有较高的抗氧化活性,其相对分子质量大约为1 862。     

食源性低聚肽体外抗氧化活性研究

对工业化生产的食源性低聚肽进行了清除DPPH自由基、抑制亚油酸自氧化2种体系下的体外抗氧化活性的研究。结果表明:在清除DPPH自由基体系中,卵白肽和大豆肽的抗氧化活性最高,其IC50分别为5.767,6.268mg/mL。在抑制亚油酸自氧化体系中,大豆肽和海洋胶原肽对于亚油酸自氧化的抑制率分别达到了75.16%和58.69%。几种食源性低聚肽均有不同程度的抗氧化活性。     

中华真地鳖酶解短肽的抗氧化作用

目的：研究中华真地鳖酶解短肽的体内外抗氧化作用。方法：测定中华真地鳖酶解短肽体外对?OH、O2－?和DPPH自由基的清除作用;并将中华真地鳖酶解短肽灌胃,颈背部皮下注射D-半乳糖致衰老模型小鼠,以小鼠血浆和肝脏中丙二醛(MDA)含量、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(T-SOD)及清除?OH活性为指标,研究其体内抗氧化活性。结果：中华真地鳖酶解短肽对?OH、O2－?和DPPH自由基有较强的清除作用,其IC50分别为0.40、8.73、1.32mg/mL;并且与模型组相比,中华真地鳖酶解短肽能显著降低模型小鼠血浆和肝脏中MDA含量(P＜0.01),显著提高其CAT活力(P＜0.05)、GSH-Px活力(P＜0.01)及清除?OH(P＜0.05)能力,显著提高小鼠肝脏T-SOD活力(P＜0.05)。结论：中华真地鳖酶解短肽有较强的体内外抗氧化作用。     

中华绿螂抗氧化肽的提取及其抗氧化性

利用响应面法和超滤法对中华绿螂中抗氧化肽的木瓜蛋白酶水解提取工艺条件进行优化。在单因素试验基础上,利用响应面法分析建立二次回归模型。以酶与底物浓度比值([E]/[S])、酶解温度、酶解p H和酶解时间为自变量,DPPH自由基清除率为响应值,研究各因素及其交互作用对自由基清除率的影响。根据响应曲面图及其等高线图,确认木瓜蛋白酶水解中华绿螂制备抗氧化肽的最优工艺条件:底物浓度6%、pH 4.11、酶解温度40℃、酶解时间3.09 h。在此条件下,中华绿螂抗氧化肽对DPPH自由基清除率为97.64%。所得回归模型高度显著(p<0.0001),与理论预测值基本吻合。根据超滤试验可知,超滤膜截留分子质量3000~1000 Da时抗氧化性最佳,超滤所得可溶性蛋白酶解物的抗氧化性为94.96%。     

小麦多肽酒酿造及其抗氧化性研究

以小麦蛋白粉为原料,用中性蛋白酶酶解、酒精发酵制得小麦多肽酒,并对其抗氧化性进行研究。结果表明：小麦多肽酒的最佳酿造工艺为：多肽含量0.5%、加糖量17%、酵母添加量0.9‰,25℃下发酵9d 后采用3500r/min 离心10min 后得小麦多肽酒为淡黄色,有光泽,澄清透明,无明显沉淀和悬浮物,小麦多肽酒的透光率为95.45%,多肽含量为5.20mg/ml,羟自由基清除率为30.63%,DPPH·清除率为64.47%,总还原力为1.35,超氧阴离子自由基(O2·)清除率为42.13%,溶血抑制率为49.92%。