阿托伐他汀对缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的保护作用

目的:探索阿托伐他汀对缺血再灌注损伤大鼠血脑屏障的作用。方法:制备脑缺血再灌注模型,用阿托伐他汀规律治疗,观察脑组织的通透性改变以及脑组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达情况。湿重-干重法测量脑含水量的变化。结果:脑缺血再灌注提高了大鼠血脑屏障的通透性,用阿托伐他汀治疗后大鼠脑含水量明显降低,同时MMP-9表达减少。阿托伐他汀对血脑屏障具有保护作用。     

血清中IL-8对大鼠心肌缺血再灌注组织中p53、Bcl-2基因的影响及意义

目的：探讨血清中IL-8对心肌缺血再灌注（MlR）组织中p53、Bcl-2基因的影响。方法建立大鼠心肌缺血再灌注模型,分为对照组和实验组,缺血30min后,再灌注2、4、8、12、24、48h．各时间点分别处死动物,取血备用。采用双抗体夹心酶联免疫吸附（ELISAj法,原位杂交法,原位末端标记染色等,检测IL-8,p53mRNA,bcl-2mRNA,和细胞凋亡。结果：血清中IL-8在IR2h即开始升高,12h达高峰。组织中p53在4h开始升高,24h达高峰。BU-2在8h开始升高-直持续到48h达高峰。血清JL-8早于组织p53表达,Bcl-2晚于p53表达,心肌细胞凋亡和p53mRNA表达时间相-致。结论：血清中IL-8增高介导了组织中p53的高表达,抑制了Bcr-2的作用,在MIR损伤中扮演了-个重要角色。     

多排CT灌注及血管成像对蛛网膜下腔出血后脑血流动力学改变的研究及临床应用

目的:探讨CT脑血流灌注(CTP)联合CT脑血管成像(CTA)在判断蛛网膜下腔出血患者脑血流动力学的改变及迟发性脑缺血诊断中的价值。方法:收集蛛网膜下腔出血患者31例,通过多排螺旋CTA及CTP检查,检出脑动脉瘤,同时以灌注参数评估蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛及脑血流动力学改变。结果:31例蛛网膜下腔出血患者,CTA检出动脉瘤29例32个,CTP联合CTA检查,共检出血管痉挛19例,出血后急性期(3天),检出血管痉挛4例,其余为出血后4-10天检出,轻度脑血管痉挛5例,中度脑血管痉挛8例,重度脑血管痉挛6例,未检出血管痉挛12例中,发生局部脑低灌注者5例。结论:CTA联合CTP检查不仅能够诊断SAH原因,并能同时显示SAH后CVS的情况,有助于对SAH患者预后的判断,同时给临床治疗提供指导。     

透明质酸-MMP敏感肽仿生杂化水凝胶的制备及其对骨髓间充质干细胞分化调控的影响

设计合成了3种不同序列的基质金属蛋白酶(MMP)敏感肽,与活性基团马来酰亚胺修饰后的透明质酸进行共价交联,制备一类对MMP具有响应性的透明质酸仿生杂化水凝胶,并研究其对诱导兔骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨方向分化的影响。以N-羟基硫代琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)与1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC·HCl)为催化剂,活化透明质酸羧基后,与N-(2-氨基乙基)马来酰亚胺三氟乙酸盐(AEM)常温搅拌反应,得到接枝马来酰亚胺基团的透明质酸(HA-MAL),马来酰亚胺基团与MMP敏感肽上的巯基在常温下即可发生加成反应。共价交联MMP敏感肽的水凝胶具有良好的机械性能,能够包埋细胞3D培养达4周以上。对水凝胶3D及孔板2D培养的BMSCs进行实时荧光定量PCR测定软骨方向分化的特征性基因Marker表达,结果显示,3种水凝胶对COL1A2、COL2A1、ACAN、SOX9 4种基因表达具有不同程度的上调作用,可促进BMSCs的软骨分化。     

短暂性脑缺血发作时应用CT灌注成像诊断对患者脑血流动力学改变的评价作用

目的:探讨CT灌注成像(SCTP)对于短暂性脑缺血发作(TIA)时脑血流动力学变化监测的意义。方法:收集2013年1月-12月,我院收治的确诊为TIA的患者24例,均接受SCTP检查以及头颈部CT血管造影(SCTA)检查,测量局部脑血容量(r CBV)、局部脑血流量(RCBF)、平均通过时间(MTT)以及达峰时间(TTP),以此评价脑血流动力学变化。结果:本组患者经头颅CT平扫均未见与临床表现相应的病灶,CTP显示17例患者的CT脑灌注成像存在与临床表现相应异常灌注区,包括13例前循环TIA以及4例后循环TIA;CTP脑灌注成像异常的前循环TIA患者中,MTT、r CBF及TTP均显著高于健侧对照区(P0.05),而r CBV无明显差异(P0.05);SCTA检查显示13例前循环血管病变,8例后循环血管病变,4例阴性。结论:SCTP检查能够准确评价TIA患者的血流动力学变化情况,结合颈部SCTA检查对于TIA的病因诊断以及病情评估等具有重要意义。     

基于W/O/W溶剂挥发复乳法的载药纳米微球合成及其作用研究

以乳酸-羟基乙酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)、聚乙二醇(PEG)和乳铁蛋白(lactoferrin,Lf)为原料,采用复乳法制备荷载JNK3-shRNA表达质粒的纳米微球,同时制备空载纳米微球作为对照,将它们分别通过尾静脉注射至大鼠体内,采用HE染色法检测其对脑缺血再灌...     

大鼠皮肤成纤维细胞在低密度培养条件下基质金属蛋白酶9和13基因表达的抑制

为探索体外促进原代皮肤成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞的培养条件及原代皮肤成纤维细胞转分化前后两种状态下经肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)刺激,其MMP基因的表达情况。利用Wistar大鼠真皮分离出的原代成纤维细胞为模型,分别以高密度与低密度将细胞培养于塑料界面,通过Western Blot和q RT-PCR检测肌成纤维细胞的标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达量;同时经TNF-α刺激后,利用q RT-PCR和明胶酶谱检测高密度与低密度两种状态下MMP-9和MMP-13的表达及两种状态下MMP-9的活性。发现大鼠真皮中分离出的原代成纤维细胞在低密度培养条件下,可以有效地转分化为肌成纤维细胞,其标志物α-SMA显著上调;经肿瘤坏死因子刺激,成纤维细胞在低密度培养条件下MMP-9和MMP-13对TNF-α刺激的响应程度较高密度培养时显著降低。初步表明在大鼠真皮(dermis)中,原代成纤维细胞体外转分化为肌成纤维细胞且MMP-9和MMP-13在肌成纤维细胞中下调的现象是细胞密度依赖型。     

低温处理对桦木抗弯性能的影响

以桦木(Betula platyphylla)饱水材和生材为研究对象,分别测试了试样经-20,-70,-100,-160和-196℃低温处理48h,之后取出置于室温24h后的抗弯弹性模量(MOE)和抗弯强度(MOR)。研究结果表明,经低温处理后,试样MOE和MOR与未处理材相比均有所增加,饱水材和生材MOE的最大增加量分别为7.4%和4.6%,MOR的最大增加量分别为7.4%和6.8%,但在任一温度水平上,低温处理对MOE和MOR的增加均不显著,同时,不同低温处理温度之间力学性能无显著差异;经过低温处理后,试样延性系数增加,变形能力提高;与混凝土经低温作用后强度下降相比,木材抗低温性能优于混凝土。     

3.0T磁共振血管成像与3D-ASL脑灌注成像技术在诊断缺血性脑血管疾病中的应用价值

目的:分析3.0T磁共振血管成像与3D-ASL脑灌注成像技术在诊断缺血性脑血管疾病中的应用效果及临床价值。方法:将我院2017年8月至2019年3月收治的66例缺血性脑血管疾病患者,分别对其进行3.0T磁共振血管成像与3D-ASL脑灌注成像技术检测,对比两种检查的效果。结果:MRA血管成像的诊断符合率为63.64%,明显低于3D-ASL脑灌注成像的86.36%(P0.05)。结论:3D-ASL脑灌注成像技术对于诊断缺血性脑血管疾病的准确率较高,且完全无创具有可操作性,值得推广。     

香烟凝集物诱导大鼠肺巨噬细胞细胞因子释放及调控研究

目的：观察香烟凝集物（CSC）对大鼠肺巨噬细胞分泌细胞因子的影响及MAPK、NF—κB信号通路的调控作用。方法：CSC染毒原代大鼠肺巨噬细胞,蛋白液体悬浮芯片检测细胞因子的表达,westernblot检测ERK1／2、p38和IKBα磷酸化水平。结果：CSC诱发IL-1β、TNFα、IL一6、MCP-1、IL-18、GRO等细胞因子表达量明显增高,MIP1α与IL-10水平下降,ERK1／2、p38及IKBd磷酸化水平上调;制剂ERK1／2,p38和NF—κB可显著下调TNF一α、MIP-1α及GRO表达。结论：MAPK和NF-κB通路参与肺巨噬细胞多种细胞因子表达的改变。     

水热反应时间对Co_3O_4电化学性能的影响

以硝酸钴、尿素、氟化铵、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)为原料,泡沫镍为基底,通过水热-热分解法在不同水热反应时间(10、12、14和16h)下制备了花瓣状组织与花状结构的Co_3O_4,通过X射线衍射(XRD)与扫描电子显微镜(SEM)分析了Co_3O_4的组成及形貌,并测试了Co_3O_4的电化学性能。结果表明,不同水热时间下制得的Co_3O_4均表现出明显的赝电容特性,随着水热反应时间由10h延长至16h,Co_3O_4的比电容先升高后降低,且在14h达到最高值267.1F/g。     

短发夹RNA介导RNA干涉的实验学控制研究

采用载体介导的RNA干涉(RNA interference,RNAi)技术抑制HEK293H细胞中外源报告基因的表达,并设置一系列的实验学控制以探讨其在RN加应用研究中的价值及意义。运用pAVU6 27,构建了针对增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的一系列短发夹RNA表达载体,并用脂质体法转染于．HEK293H细胞中,检测EGFPmRNA及蛋白表达水平。瞬时转染48h后,RT-PCR及Western blot结果表明,针对EGFP三个靶点的干涉质粒均不同程度地抑制细胞内EGFP的表达,但仅转录正反义链、链内1—2个碱基错配的干涉载体不能介导特异的RNAi效应。此外,共转染实验结果表明干涉质粒两两间无相互增强或抑制的RNAi效应。在此基础上,通过G418筛选生成了HEK293H EGFP稳定表达株,在转染后不同时间点检测EGFPmRNA及蛋白表达变化,发现RNAi效应在一定时间范围内呈现明显的时间依赖性。这些结果表明,有效的实验控制在RNAi研究中十分必要,具有重要的参考价值。基于载体表达的RNAi作用呈现明显的时间依赖性效应,为RNAi应用研究提供了一定的参考及借鉴价值。     

致密Y型分子筛膜的制备及其影响因素分析

采用无模板剂二次水热合成方法在多孔Al2O3陶瓷环表面制备了Y型分子筛膜,考察了低温等离子体处理预植晶种载体、预植方式、陈化时间、晶化时间和水含量等因素对成膜的影响.XRD和SEM表征结果显示,等离子体处理载体有助于获得致密的分子筛膜.另外,采用打磨方式预植晶种,反应液适当的水含量,陈化9 h及反应9 h有利于提高膜的质量.     

颅脑火器伤后犬颈内动脉血流动力学改变的初步观察

初步探讨颅脑火器伤后颈内动脉血流动力学变化及其临床意义。17只杂种犬,滑膛枪近距离由左额部射入钢珠建立犬颅脑枪弹伤模型。于伤前、伤后30min、2h、4h、6h检测右侧颈内动脉血流动力学参数:峰值流速(Vp)、舒张期末血流速度(Vd)、平均血流速度(Vm)、阻力指数(RI)和搏动指数(PI)。其间动态观测颅内压及动脉压。所有实验犬伤后30min颅内压较伤前已明显升高(P<0.01),动脉压降低(P<0.05),颈内动脉Vp、Vm、Vd明显降低(P<0.05)。其中4只颅内压升高最为显著的犬RI和PI明显增高,甚至在舒张早期出现负向频谱;另13只犬RI和PI较伤前改变不明显。伤后其余各时间点如内生命体征维持较平稳,血流动力学参数均稳定在伤后第一次检查水平。颅脑火器伤后颈内动脉Vp、Vm、Vd明显降低,但伤犬的血流动力学参数由于同时受颅内压升高、动脉压降低双重影响,难以准确判定其颅内压升高程度;部分伤犬RI和PI明显增大,提示颅内压升高到一定程度、动脉压又显著降低,导致脑灌注压低于某一域值,此现象的出现可能存在潜在临床意义。     

重组质粒pcFlaA在青石斑鱼肌肉中的表达研究

在哈维氏弧菌TS-628菌株鞭毛丝蛋白FlaA基因末端加上一段编码Flag短肽的核苷酸序列作为检测标记后,将该基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1( ),酶切、PCR扩增及重组质粒测序证实基因片段插入正确,将该重组质粒命名为pcFlaA.将pcFlaA以肌肉注射方式免疫青石斑鱼.免疫后第7天开始检测鞭毛丝蛋白在石斑鱼肌肉中的表达状况,之后每隔1周检测1次,共检测4次.首先采用PCR技术在DNA水平检测重组质粒转染石斑鱼肌肉细胞的情况,再以RT-PCR法在mRNA水平上检测转染质粒在鱼肌肉中的转录,最后以免疫组化染色技术在蛋白质水平上检测目的蛋白的表达.结果在DNA及mRNA水平上均可检测到目的条带,在蛋白质水平上可检测到明显阳性位点,由此证实pcFlaA可以转染石斑鱼肌肉细胞并可在其中进行表达,而且质粒在鱼体内持续表达的时间至少1个月.     

HIV-1核心蛋白的表达与纯化

将编码人I型免疫缺陷病毒(HIV1)核心蛋白p24gag的基因序列克隆到原核表达载体pET28(b)中,高效表达了N,C端融合His·Tagp24蛋白,所表达的重组p24蛋白占菌体总蛋白的46%。在变性条件下,使用NiNTA亲和层析法纯化了p24蛋白,纯度为94%。菌体中及纯化、复性后的目的蛋白均能与抗HIV1p24单克隆抗体发生特异性反应。用纯化的p24蛋白免疫小鼠,4周时小鼠血清抗p24抗体效价达1∶400。实验结果表明:大肠杆菌表达的HIV1p24蛋白纯化后可用作HIV1检测试剂的原料。     

低温暴露对碳纤维/环氧树脂复合材料拉伸力学性能的影响

针对低温暴露对碳纤维/环氧树脂(CF/EP)复合材料力学性能影响进行研究,对低温0℃、?20℃、?40℃、?60℃暴露100 h、200 h、300 h、400 h、500 h后,对CF/EP的复合材料拉伸力学性能影响展开研究,利用SEM电镜扫描分析损伤机制,根据试验结果提出了一种预测CF/EP复合材料低温暴露后剩余强度的预测公式。试验结果表明,在长时间低温暴露后,CF/EP复合材料拉伸强度随低温暴露时间的增长呈现出先增后降的趋势;低温暴露时间低于300 h时,CF/EP复合材料拉伸强度随温度下降先增后降,暴露时间高于300 h后,拉伸强度随温度下降逐渐降低;CF/EP复合材料拉伸弹性模量随低温暴露时间的增长呈现逐渐上升趋势,温度越低,上升趋势越明显。SEM结果表明,低温暴露后,纤维与环氧树脂黏结程度增强,有利于荷载传递,CF/EP复合材料拉伸强度增大,破坏形貌上表现为纤维上包裹更多树脂;长时低温暴露后,由于纤维与基体收缩系数不同导致微裂纹产生,在受到荷载时裂纹进一步扩散,不利于荷载传递,使拉伸强度下降,破坏形貌上表现为纤维成束凝集,纤维束间距增大。基于初始试验,本文提出了一种基于初始试验的CF/EP复合材料低温暴露后剩余强度预测模型,试验与预测结果吻合较好,由于考虑了同种材料在不同低温和暴露时间耦合作用下的等效作用,可减少相同材料在不同低温与暴露时间下的试验次数,因此具备一定参考价值。      

牙鲆生长激素基因的克隆及其在大肠杆菌中的融合表达

采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从牙鲆(Paralichthys olivaceus)脑垂体总RNA中扩增出编码牙鲆生长素(GH)成熟肽基因序列。重组至融合表达载体pGEX-4T-3中,构建成牙鲆GH基因融合表达载体pGEX-gh,转化大肠杆菌BL21(DF3),筛选阳性克隆,IVIG诱导表达。经SDS-PAGE电泳显示在45kD处有特异的蛋白条带出现,该蛋白的表达量随诱导时间的延长而增加,3h达最高值,达到细胞总蛋白的18．3％。该融合蛋白在胞内主要以包涵体状态存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后用Western-blotting检测表明其为牙鲆生长激素,并通过酶联免疫吸附受体法证实其具有生物学活性。     

铸锻复合成形AZ91D摩托车发动机壳体热处理工艺研究

采用不同固溶和时效热处理工艺对液态铸锻双控成形AZ91D摩托车发动机壳体进行了热处理实验。结果表明:样品经过T4(415℃×9h,60℃水淬)处理后,合金的抗拉强度和延伸率最大,其值分别为239.7MPa,1.58%,较未热处理提高幅度分别为41.6%,79.9%。经T6(415℃×9h,60℃水淬+205℃×16h,空冷)处理后,样品显微组织中的第二相得到均化,在一定程度上强化了合金。未处理态、T4、T6状态下的拉伸试样断口形貌中均存在较多的韧窝,表明铸锻双控成形制件的塑性较好。T6(415℃×9h,60℃水淬)热处理后的拉伸试样断口形貌中韧窝最多,塑性最好。     

鲮生长激素cDNA的克隆及其重组表达产物的促生长活性

利用RT PCR技术从鲮脑垂体组织中克隆出生长激素cDNA片段 ,克隆的mcGH全长 5 6 7bp ,编码由 188个氨基酸残基组成的GH成熟肽。构建了表达载体pQE30 mcGH ,转化大肠杆菌M15 (pREP4 ) ,在初步优化发酵条件的基础上实现了鲮mcGH在大肠杆菌中的高效表达 ,表达的重组蛋白占菌体总蛋白的 32 13% ,经westernblotting分析证实所表达的重组蛋白是mcGH。表达产物主要以包涵体的形式存在。重组蛋白变性、复性后 ,经Ni chelatingSepharose亲和层析纯化 ,SDS PAGE显示 ,纯化的mcGH纯度约为 94 %。纯化的mcGH腹腔注射莫桑比克罗非鱼 (Oreochromismossambicus) ,经 4周处理后 ,实验组 1和 2的体长增长率分别比对照组快 9 38%和 9 75 % ,体重增长率分别快 2 3 4 2 %和 6 2 4 8%。经t检验统计分析表明 ,表达的重组mcGH具有显著的促罗非鱼生长作用 (P <0 0 5 )。