细胞融合构建枸杞酒专用酵母的研究

选择6株酵母在枸杞汁中发酵,分别测定产酒与产香能力,从中选择产香好与产酒好的2株菌作出发菌,通过原始质体融合法获得适合在枸杞中发酵产香产酒好的新菌种,并通过实验确定了最佳发酵工艺条件,发酵前3d温度为25℃,接着转为15℃至发酵结束。     

利用细胞融合技术选育生产燃料乙醇的耐高温酵母

0前言 通常情况下,酵母的最佳发酵温度介于25-30℃之间.在高温状态下,酵母生长所需的酶活性降低,从而降低生长率.在南方省区,夏季温度通常会超过35℃,在无冷却系统情况下,由于代谢过程的放热反应可导致温度上升,发酵罐温度可能超过40℃,严重影响酒精产率.在一些酒精生产企业,喷淋冷水于发酵罐可以部分克服高温问题,但是会增加生产成本[1],选育耐热性菌株可以解决这一问题[2].另外,利用耐热菌株高温条件下发酵还可以降低染菌的机会.     

重组酵母产中性米曲蛋白酶的工艺研究

通过单因素试验探索重组酵母产中性米曲蛋白酶的最佳条件。结果显示,重组酵母菌产蛋白酶的最佳表达条件是:诱导时间132 h,诱导温度26℃,诱导接种量为OD600值6.0,诱导培养振荡速度为240 r/min,诱导剂(甲醇)添加量0.8%(体积比),YNB添加量7 g/L,pH 7.0。在最佳培养条件下,发酵液中的最高酶活达到538 u/mL。与初始的发酵条件相比,中性米曲蛋白酶的产量提高1倍。     

重组毕赤酵母产植酸酶的性质初步研究

对基因工程重组酵母的植酸酶进行分离和纯化,并考察纯化酶的酶学性质。结果表明,该植酸酶酶蛋白分子量为60ku;有2个pH值活力峰:pH值为3.5和pH值为5.5;最适反应温度为60℃;在37℃下以植酸钠为底物的反应初速度为128μmol/(L·min),米氏常数为228μmol/L;Cu2+对此酶有较强的抑制作用;Mg2+,Ca2+,Al3+,Fe2+,Co2+,Zn2+和EDTA等对酶活性影响不大。     

酵母分泌表达重组人神经生长因子

目的研究人神经生长因子基因工程制备工艺。方法构建了表达质粒pPIC9K/rhNGF,转化毕赤酵母,筛选多拷贝转化子,进行摇瓶表达,正交试验选择表达条件。结果得到高表达高外泌的工程菌,并确定了纯化步骤,经疏水层析和阳离子交换层析纯化后,取得高活性高纯度的rhNGF。结论为该药的规模生产奠定了基础。     

产谷胱甘肽重组巴斯德毕赤氏酵母发酵条件的研究

考察了培养基组成及培养条件对重组巴斯德毕赤氏酵母(Pichia pastoris)x-33(pGAPZA-gsh 1)合成谷胱甘肽(GSH)的影响。优化后的培养基组成为:甘油30g/L、蛋白胨40g/L、酵母膏9g/L、半胱氨酸0.36 g/L、KH_2PO_4 3g/L;培养条件为:自然pH、摇床转速200r/min、装液量为30mL/250mL、接种量为10%。在此优化条件下重组酵母的GSH产量是98.5mg/L,为优化前的2.33倍,生物量最大值达到19.6g/L。在5L发酵罐上进行放大实验,发酵结束后GSH产量、重组菌的生物量分别为97.9mg/L,18.7g/L与摇瓶发酵结果基本吻合。     

酵母融合子抗原性质表达的研究

通过动物免疫方法制备了啤酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)和毕赤氏酵母(Pichia pastoris)的免疫血清，再通过原生质体融合技术得到酵母融合子，经血清学检测发现，单倍体融合子可稳定表达亲代两种抗原，而二倍体融合子亲代两种抗原表达不稳定。     

电融合法构建黑曲霉与K氏酵母融合子的研究

对黑曲霉原生质体进行紫外单亲灭活与K氏酵母原生质体在交变电场频率1MHz,交变电场强度700V/cm,脉冲电场强度10kV/cm,脉冲个数10个,脉宽50μS,电极时间5s条件下进行电融合,得到2株遗传性能稳定的融合子AKU-1与AKU-4,其耐酒精度分别为15%、16%(v/v),且2融合子在以料液比为1:3的生料中,35℃静态发酵4d,产酒精量分别为11.2%、12.1%(v/v),残糖量分别为1.07%、1.06%。     

重组毕赤酵母发酵产纤维二糖酶

采用含黑曲霉(Aspergillus niger)纤维二糖酶基因的重组毕赤酵母发酵生产纤维二糖酶,对重组酵母的基因表达调控及发酵性能进行了研究。摇瓶试验结果表明:产酶培养基中甘油和玉米浆粉的适宜浓度分别为2.0%和3.0%,培养基最适pH值为6.0。甲醇作为碳源和基因表达的诱导物,对重组毕赤酵母的发酵结果有重要影响。发酵过程中每24h加入体积分数为1.0%的甲醇、质量浓度为0.2%的甘油及质量浓度为0.3%的玉米浆粉,有利于重组毕赤酵母持续合成纤维二糖酶。摇瓶发酵8d,发酵液中纤维二糖酶活力可达到9.01 IU/mL。     

甲基营养酵母在生产重组蛋白中的应用

对真核表达系统Hansenula，Candida，Torulopsis和Pichia甲基营养酵母的生理特性、基因整合、糖基化、载体设计及其在生产与研究中的应用进行了综述，表明该系统表达外源基因具有经济合理、安全可靠、表达蛋白可以翻译后修饰等优点，是一类极具发展潜力和广泛应用的真核表达系统．     

原生质体融合构建耐高温高产酒精酵母

选择化学药物和紫外灭活单亲原生质体为遗传标记,以0．01%的三唑酮和紫外照射h-1原生质体2min为遗传标记,采用四因素三水平正交试验确定了融合子LZ-3的浓醪酒精发酵工艺。浓醪发酵的最佳工艺条件是:料水比为1:2,糖化酶用量为400U/g原料,接种量为9%(V/V),初始pH值为5．5,在此条件下,以玉米粉的糖化醪为培养基,发酵72h,LZ-3的酒精产率为9．0%。     

青岛啤酒酵母和高浓酵母原生质体融合选育高浓酿造菌株

以青岛啤酒酵母和高浓酵母为供试菌株,通过原生质体融合得到融合子。对融合子利用铜抗性初筛,利用耐压和发酵性能为指标进行实验室和100 L发酵复筛,并对融合子进行鉴定及遗传稳定性实验。结果表明：通过原生质体融合选育出的高浓菌株与青岛啤酒酵母菌株相比,表现出酵母数峰值高、降糖和还原双乙酰快的优势,且代谢风味物质组成与青岛啤酒酵母接近;经过连续使用8 代后,其总染色体DNA指纹图谱保持一致,证明该菌株的遗传稳定性高。     

超高压均质参数对酵母破壁率的影响

利用超高压均质设备进行酵母破壁实验研究,考察酵母溶液浓度、均质压力和均质时间3个因素对酵母破壁率的影响。通过研究可知:酵母的破壁率随着溶液浓度的增加先增大后减小,浓度在10%左右达到最佳;破壁率随着均质压力的升高而增大,但上升梯度逐渐减小;破壁率随着均质时间的延长而增大并逐渐趋于水平,在超高压操作工况下,短时破壁即可达到较理想的效果。在实验范围内,酵母浓度10%、均质压力172 MPa和均质时间17 min为最佳工艺条件。实验研究为废酵母的加工和利用提供了参考依据。     

固定化酵母用于食醋发酵的技术研究

文中主要针对固定化酵母在食醋发酵中应用的有关工艺条件、使用效果、停产期贮存以及杂菌污染等问题进行了试验总结，为固定化酵母在食醋行业中的应用提供了一定的工艺技术借鉴作用。     

啤酒废酵母综合破壁法提取酵母味素技术

研究了高压均质、酶法溶胞、温差破壁3种细胞壁破碎法对啤酒废酵母抽提物(酵母味素)的得率、蛋白质的转化率及氨基氮溶出率的影响.结果表明,在适宜的自溶条件下,利用综合破壁法可使酵母抽提物中酵母味素得率、蛋白质的转化率及氨基氮溶出率显著提高.     

固定化酵母-膜生物反应器连续发酵生产乙醇的研究

对固定化酿酒活性干酵母-硅橡胶膜生物反应器连续发酵生产乙醇进行了实验研究。对固定化酵母和游离酵母的发酵能力进行了比较,实验研究了系统在长期运行过程中的发酵反应动力学参数和膜传质动力学参数等基本性能。结果表明,酵母细胞固定化后,其发酵速度有明显提高;膜渗透汽化分离产物乙醇使发酵反应能够长时间连续稳定地进行,葡萄糖消耗率和乙醇体积产率都较间歇发酵有明显的提高;在连续运行中,发酵液中葡萄糖浓度控制在20～50g/L的范围内,乙醇体积产率为4.0g/（L·h）,罐内乙醇浓度基本保持在45g/L左右,固定化酵母浓度维持在1.05×10^10～2.15×10^10个/克胶,发酵液中游离酵母浓度维持在0.02×10^10～0.098×10^10个/mL,膜的渗透通量和分离因子分别为300～500g/（m^2·h）和3.6～7.2;实验系统连续运行了294h,收得渗透冷凝液4841.7g,平均质量分数为21.3%。     

啤酒酵母胞壁多糖抑制肿瘤作用的实验研究

目的:通过动物实验探讨啤酒酵母胞壁多糖对肿瘤的抑制作用。方法:采用现代分离提取技术从啤酒废酵母中分离纯化出酵母胞壁多糖;通过小鼠移植性肿瘤试验探讨酵母胞壁多糖在体内的抑瘤作用,并对其进行半致死量测定。结果:酵母胞壁多糖能显著抑制HCa-F25/A16肝癌和Lewis肺癌的瘤重(在剂量为0～200mg/kg·d范围内抑制率随剂量增加而增加,当剂量超过200mg/kg·d时,抑制率反而下降);该多糖小鼠口服时的半致死量LD_(50)为3077.86(mg/kg)。结论:使用本工艺获得的样品,其酵母胞壁多糖的含量为86.5％;酵母胞壁多糖对Hca-F25/A16肝癌和Lewis肺癌具有显著的抑制作用;急性毒理实验说明酵母胞壁多糖是一种安全低毒、值得开发的保健食品的原料资源。     

原生质体融合构建耐高温酵母菌株

通过原生质体融合选育耐高温的酵母 ,以解决在纤维素类物质同步发酵过程中酵母发酵温度同纤维素酶酶解温度不一致的问题。利用电场诱导原生质体融合技术对产酒率高的菌株Sb1和产酒率低但耐高温的菌株No 30进行融合。经过融合条件的选择 ,分别对 2亲株进行遗传标记 ,3 5 %蜗牛酶处理原生质体 ,在脉冲强度为 11kV、宽度 10 μS、次数为 2次时进行融合 ,得到数株融合子。鉴定得知 ,融合子 2是所需要的融合子 ,其在固态发酵 45℃时产酒精能力达到体积分数 7 2 8%。