肝素亲和柱在乳铁蛋白检测中的应用优化

乳铁蛋白是一种极具营养价值的活性糖蛋白,广泛应用到婴幼儿乳粉中,目前国内外未建立乳铁蛋白测定相关的标准。将肝素亲和柱(HiTrap TM Heparin HP柱)或相当者应用到乳铁蛋白检测前处理的净化过程中,建立一种高效、便捷的食品中乳铁蛋白测定的分析方法。试样中的乳铁蛋白经磷酸氢二钠溶液(0.20 mol/L,p H=8.00±0.5)提取,提取液经肝素亲和柱净化后,用磷酸氢二钠溶液淋洗,磷酸氢二钠-氯化钠溶液洗脱,并定容至3.0 mL。采用反相高效液相色谱柱分离,以紫外或者二极管阵列检测器于280 nm处检测,外标法定量。该方法系首次提出将肝素亲和柱应用到乳铁蛋白检测前处理过程中。该检测方法适合检测机构或乳品企业日常样品中乳铁蛋白的检测。     

乳铁蛋白

本文概述了乳铁蛋白的基本性质、分离方法和生物活性．并对其开发利用提出展望。乳铁蛋白是一种铁结合糖蛋白，它能调节动物体的多种生理功能和影响铁的代谢，这些生物活性和铁量、盐类、ＰＨ、抗体、介质密切相关；色谱法被认为是生产高纯乳铁蛋白的有效方法．超滤法可用于食品级乳铁蛋白的分离。     

乳铁蛋白的生理功能

叙述了乳铁蛋白具有促铁吸收,调节免疫,抑菌,抗病毒,阻断氧自由基,避免刺激肠胃和促进双歧杆菌生长等功能,上述功能在乳品（特别是婴幼儿食品）加工中具有广泛的应用。     

一种检测乳铁蛋白的方法——放射免疫扩散法

介绍了一种检测乳铁蛋白的方法－－放射免疫扩散法。乳铁蛋白与抗血清具有特异的免疫反应,经过一系列染色、脱色和清洗后可以测量到反应沉淀带,该沉淀带的直径与参与反应的抗原、抗体浓度成正比,利用该特性可检测乳铁蛋白的含量。     

乳铁蛋白分离纯化研究进展

乳铁蛋白是一种非血红素转铁蛋白,与血清转铁蛋白、卵转铁蛋白和黑素转铁蛋白共同组成转铁蛋白家族。乳铁蛋白是一种多功能性的糖蛋白,具有很多的活性,被广泛应用于保健食品、配方奶粉、医药等领域中。归纳传统的与新开发的乳铁蛋白的回收方法,比较每种方法在提取回收乳铁蛋白中的优势与不足,对今后开发出更佳具有优势的乳铁蛋白的回收方法提供一些思路。     

牛乳中乳铁蛋白的分离纯化研究

牛乳经酸沉淀除酪蛋白后,通过超滤、离子交换法分离纯化得到乳铁蛋白,利用考马斯亮蓝、SDS-PAGE电泳定性定量检测。结果表明:每毫升牛乳能提取乳铁蛋白0.22mg,纯度为95%。     

乳铁蛋白的分离及纯化

乳铁蛋白 (Lactoferrin ,简称Lf)作为一种糖蛋白 ,主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中 ,如乳汁、眼泪等 ,乳汁尤其是初乳中Lf的含量很高[1] 。Lf是一种多功能蛋白质 ,不仅具有广谱的抗菌作用 ,而且还能够增强机体的抗病毒、抗感染、抗肿瘤的能力和免疫能力。因此 ,从来源丰富的牛初乳中提取出Lf,把它作为功能性成分应用于食品行业 ,具有广阔的应用和开发前景。本文通过盐析法和层析法从牛初乳中分离出乳铁蛋白 ,并应用酶联免疫法 (ELISA)检测不同分离纯化方法所获得的乳铁蛋白的含量 ,并用电泳分析其纯度。所获得的乳铁蛋白的分子质量为 780 0 0u ,其纯度大约为 92 %。     

利用毛细管电泳法测定乳品中乳铁蛋白方法的研究

将样品经样品缓冲液处理,毛细管柱选择为直径50μm、有效长度400mm的涂层中性毛细管柱;柱温为40℃;缓冲溶液为柠檬酸缓冲液(pH为3.0±0.2);工作电压为21kV;检测波长为214nm;进样时间为5s,进行检测。结果乳铁蛋白平均回收率为75%～91%;相对标准偏差(RSD)为1.1%～2.8%;最低检出限为0.003mg/mL。该方法简便,准确,灵敏度高,是快速检测乳品中乳铁蛋白含量的最适合的分析方法。      

干酪乳清中乳铁蛋白分离纯化的研究

采用超滤、阳离子交换层析方法从热钙法处理过的干酪乳清中分离纯化乳铁蛋白。结果表明,经预处理后的干酪乳清加入经过磷酸盐缓冲液(pH值为8.0)平衡的树脂中,分别用浓度为0.3 mol/L和0.8 mol/L的NaCl进行阶跃洗脱,所得乳铁蛋白经SDS-PAGE和免疫印迹法(Western Blotting)检测,纯度达93.6%。     

牛乳中乳铁蛋白的纯化和抗菌活性研究

采用凝胶过滤层析和离子交换法层析分离纯化乳铁蛋白,通过SDS-PAGE和IEF-PAGE鉴定所得样品;同时利用抗菌实验(滤纸片法)进行样品的抗菌活性研究,并研究了乳铁蛋白分离纯化过程中抗菌活性的变化。结果表明,离子交换层析纯化乳铁蛋白的效果优于凝胶过滤层析,抗菌活性证实乳铁蛋白样品具有广谱抗菌作用,以蜡状芽孢杆菌为指示菌时,比活为3077.3AU/mg(试管法),纯化倍数提高了20.2倍。     

牛初乳中乳铁蛋白的分离和纯化

利用超滤、盐析和层析三种方法,采用单因素实验和正交实验对酸牛乳清中的乳铁蛋白进行分离和纯化,得到盐析的最佳条件为:先以50%硫酸铵除去杂蛋白,然后在30°C,pH8.5,80%硫酸铵进行盐析。用CM-SephadexC-100进行层析,进样量为2mL,洗脱液pH为7.4时可以得到乳铁蛋白纯品。SDS-PAGE凝胶电泳结果表明,牛初乳中乳铁蛋白的纯度为92%,分子量大约为78000±2000Da。     

Comparison of two treatment methods on the purification of shrimp polyphenol oxidase

The effects of different stirring time and two treatment methods (salt and organic solvent) on the recovery of shrimp polyphenol oxidase (PPO) were investigated. Stirring for 30 min yielded maximal PPO recovery. With respect to PPO specific activity, yield and purification fold enhancement, the use of butanol treatment followed by Phenyl Sepharose CL-4B chromatography was shown to be better than ammonium sulphate fractionation and then Phenyl Sepharose chromatography. White shrimp PPO was more susceptible than pink shrimp PPO to inactivation during purification. © 1997 SCI.     

响应面法优化去内毒素乳铁蛋白纯化工艺的研究

通过采用离子交换色谱法来去除乳铁蛋白中的内毒素,通过鲎试剂来检测内毒素的含量,并使用响应面法优化了乳铁蛋白的纯化工艺.结果表明:去内毒素后乳铁蛋白中内毒素从原来的18.26 EU/mL降低为0.77 EU/mL,在洗脱剂pH值为4.83,洗脱速度1.21 bV/h,洗脱剂浓度0.05 mol/L醋酸钠缓冲溶液条件下,蛋白得率可达到最大值62.87％.     

Expression and purification of goat lactoferrin from Pichia pastoris expression system

ABSTRACT:  The recombinant goat lactoferrin (rGLF) was expressed in the methylotropic yeast Pichia pastoris using pGAPZαC vector, GAP as promoter, and Zeocin as the selective marker. After transformation of the GLF-pGAPZαC into Pichia pastoris X-33 expression host, the GLF-pGAPZαC vector was integrated into the GAP promoter locus of Pichia pastoris X-33 chromosome. The rGLF was expressed and secreted into the broth using α-factor preprosequence. SDS-PAGE and PAS staining analysis indicated that the rGLF could be purified to electrophoretic homogeneity by heparin-Sepharose 6 Fast Flow affinity chromatography and glycosylated by the expression host. The yield of purified rGLF was approximately 2.0 mg/L of culture broth. The N-terminal sequence was identical to the native goat lactoferrin (nGLF). The iron-binding behavior, papain-inhibiting property, and thermal stability of the purified rGLF were comparable to nGLF. This is the 1st report of intact goat lactoferrin expression using the P. pastoris system.     

卵转铁蛋白和乳铁蛋白的热处理稳定性的比较研究

卵转铁蛋白（Ovotransferrin,OVT）和乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）经不同温度（50⁹0℃）处理后,通过圆二色性分析比较其二级结构的变化,紫外吸收和表面疏水性分析比较其空间构象的变化,SDS-PAGE分析比较其分子的聚集,溶解度分析比较其功能的变化。结果表明,50⁶0℃时,OVT和LF的理化特性均无明显变化。70℃时,OVT和LF的紫外吸光值均明显增大;80⁹0℃时,OVT的紫外吸光值不再进一步增大,而LF的进一步逐渐增大。70⁹0℃时,OVT和LF的表面疏水性指数均明显增大;LF的表面疏水性指数远大于OVT的,但OVT的增大程度较LF的更大。70⁹0℃时,OVT和LF的α-螺旋含量均明显降低,β-折叠和无规卷曲含量均明显升高,且OVT的二级结构组分的变化程度较LF的更大。70⁹0℃时,OVT和LF的SDS-PAGE图谱中的主要蛋白条带密度均明显降低;相同温度下,OVT的降低程度较LF的更大。70⁹0℃时,OVT和LF的溶解度均明显降低;相同温度下,OVT的降低程度较LF的更大。总之,OVT和LF的结构和功能在加热时均发生改变,但OVT的变化程度较LF的更大。      

卵转铁蛋白和乳铁蛋白的氧化稳定性的比较研究

分析比较了卵转铁蛋白（Ovotransferrin,OVT）和乳铁蛋白（Lactoferrin,LF）的氧化稳定性。采用SDS-PAGE、蛋白溶解度、总巯基含量及羰基含量等检测方法,研究了OVT和LF在AAPH（2,2’-azobis（2-amidinopropane）hydrochloride）作用下的结构变化,以及其对ABTS和DPPH自由基的清除率。SDS-PAGE的结果表明:当AAPH浓度为5 mmol/L时,LF在较高分子量区域开始出现新条带;当AAPH浓度为20 mmol/L时,OVT在较低分子量区域（31⁴3 ku）才出现新条带;随着AAPH浓度进一步增大,OVT和LF主要条带密度明显降低,经AAPH作用后出现的新条带的密度都逐渐增高。当AAPH（20 mmol/L）作用1 h时,LF即在较高分子量区域出现新条带;在4 h时,OVT才在较低分子量区域出现新条带。当OVT和LF的浓度为2 mg/m L时,AAPH（20 mmol/L）可致OVT和LF同时出现新条带;LF随其浓度增大,在较高分子量区域出现的新条带的密度逐渐降低;OVT在4 mg/m L以上时,在较低分子量区域的新长带已不可见。随着AAPH（20 mmol/L）的作用时间延长（1⁸ h）,OVT和LF的溶解度、总巯基含量均逐渐下降,羰基含量均逐渐升高（p<0.05）。OVT和LF对ABTS和DPPH自由基清除率随着蛋白浓度增大而逐渐增大（p<0.05）。综上所述,LF较OVT更容易被AAPH氧化导致结构改变。      

两种不同离子层析法分离鸡蛋溶菌酶的比较研究

以鸡蛋溶菌酶的主要分离方法—阳离子交换法与阴离子交换法为对象,从分离的回收率、鸡蛋溶菌酶纯度以及样品处理周期等方面进行比较研究。研究结果显示,两种方法均能较好地分离鸡蛋溶菌酶。阴离子交换法分离出的鸡蛋溶菌酶纯度更高,纯度>90%,并且分离周期短,操作更方便,但其回收率为20·7%,而阳离子交换法的为31·1%,阴离子交换法更适合于制备高纯度的蛋清溶菌酶。      

海洋金属蛋白酶MP仿生亲和材料纯化条件的优化

目的:建立一种高效的海洋金属蛋白酶MP仿生亲和纯化方法。方法:采用硼酸仿生亲和材料,利用单因素实验,Plackett-Burman实验设计、Box-Behnken实验等响应面优化法,对纯化条件进行优化,利用SDS-PAGE及HPLC分析纯化后样品纯度。结果:利用单因素法和响应面法对纯化条件进行优化和分析,获得硼酸琼脂糖凝胶亲和柱的最佳纯化条件为:粗酶液浓度在100 mg/m L,上样缓冲液为p H8.6的甘氨酸-氢氧化钠,上样速度1 m L/min,洗脱缓冲液为p H5.2的磷酸氢二钠-柠檬酸,洗脱速度2 m L/min,洗脱缓冲液加入75 mmol/L的甘露醇时纯化效果最好,纯化效率提高了11倍,纯化后的样品纯度达到98.8%。