实时荧光定量技术在食品微生物检测和研究中的应用

实时荧光定量PCR技术是通过检测PCR产物中荧光讯号强度来达到定量的目的,不仅实现了对核酸信息量的分析比较,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、能有效解决PCR污染问题、自动化程度高等特点。文章概述了实时荧光定量PCR技术的原理、优缺点及其在食品微生物检测中的应用与研究进展,并探讨了它的技术发展和应用前景。     

实时荧光定量PCR技术在乳酸菌定量检测中的应用

与传统的菌落计数、杂交技术及PCR技术等相比,实时荧光定量PCR技术作为一种检测和定量微生物的方法,具有较高的灵敏度及可重复性,而且反应过程快速,污染较小.作者综述了实时荧光定量PCR技术的定量原理,荧光检测物质,目的基因序列以及其特点,并且列举了在乳酸菌定量检测中的应用,同时对其应用前景进行了展望.     

荧光定量PCR技术在食品快速检测中的应用

荧光定量聚合酶链式反应（real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR）是一种将聚合酶链式反应（polymerase chain reaction,PCR）扩增与实时检测相结合的技术,也是近年来食品快速检测技术的研究热点之一。与传统PCR技术相比,它具有耗时短、操作简单、灵敏度高、特异性强等优势。本文简要概述了荧光定量PCR技术的基本原理、发展历程、分类及特点,综述了荧光定量PCR技术在食源性致病菌、掺杂掺假、转基因食品、过敏原、食源性寄生虫、可食用昆虫等食品检测中的应用,并对荧光定量PCR技术及其在食品快速检测中应用的前景进行了展望。     

实时荧光定量PCR技术在食源性致病菌检测中的应用

实时荧光定量PCR技术作为一种高效的微生物定量检测法,在食品工业中具有广泛的应用前景。本文综述了实时荧光定量PCR技术检测原理,及其在食源性致病菌如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、沙门氏菌和副溶血性弧菌检测中的应用。     

实时荧光定量PCR在食品检测领域中应用

实时荧光定量PCR是在定性PCR技术基础上发展起来的核酸定量技术;该技术不仅实现对DNA模板定量,且具有灵敏度高、特异性强、无污染性、及实时性和准确性等特点。该文主要介绍实时荧光定量PCR原理和在食品检测中应用,及其在食品领域发展前景。     

实时荧光定量PCR技术原理及在食品检测中的应用

实时荧光定量PCR技术是一种新兴的核酸定量分析技术,与普通PCR定性分析相比,具有简单高效、准确灵敏、实时分析等更多的优势,是一项实用性很强的技术方法。文中主要对实时荧光定量PCR技术的操作原理、荧光类型及其在食品检测和科学研究领域中的应用进行综述。     

实时荧光定量PCR在食品致病菌检测中的应用

随着各项技术的不断发展与完善,PCR检测也越来越成熟,逐渐被广泛应用于微生物检测当中。实时荧光定量PCR属于其中的一种检测方法,其具有很强的灵敏度与特异性,整个检查过程不仅快速,而且准确性也非常高,在食品微生物检测中具有显著的优势。文章对实时荧光定量PCR技术在常见食源性致病菌检测中的具体应用进行了分析与探讨,希望可以为相关从业人员提供些许借鉴。     

Taqman荧光探针技术在食源性致病菌检测中的应用

Taqman荧光探针技术作为定量PCR的代表性方法,综合了PCR技术及荧光标记技术,由引物和探针双重控制靶基因的选择,具有很好的特异性和灵敏度.近年来该技术逐步应用于食品中致病微生物的检测.本文概述了Taqman荧光探针技术的原理、优缺点及其在食源性致病菌检测中的应用与研究进展,并对其应用前景进行了探讨.     

荧光定量PCR在预测微生物学中的应用

食品微生物是影响食品安全的重要因素之一,快速准确预测食品加工和贮存过程中的微生物变化对食品风险评估具有重要意义。本文首先介绍了荧光定量PCR技术的历史及其发展,着重介绍了荧光染料法和水解探针法的基本原理,讨论了其优缺点并对其应用进行总结和展望。然后介绍了预测微生物学的历史及其发展,同时对一二三级模型进行了归纳和分类,并讨论预测模型的意义及在食品领域研究所需要注意的问题。最后介绍了荧光定量PCR技术在预测微生物学中的应用,归纳了当前国内外研究的现状,并指出发展缓慢的可能原因,提出荧光定量PCR技术只停留在检测层面并没有很好用于预测微生物学模型的构建。通过本综述以期推动荧光定量PCR技术在预测微生物学领域的全面应用,进而推动预测微生物学的进一步发展。     

实时荧光定量PCR技术在白酒酿造过程中微生物数量检测的应用展望

实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction)是将普通PCR和光谱分析、实时检测等手段巧妙结合应用的一项技术。具有特异性强、灵敏度高、重复性好、定量准确、自动化程度高等优点,已成为分子生物学领域的重要技术工具。尤其是在微生物检测方面得到极大的推广应用。白酒酿造过程中微生物种类复杂、数量在不断变化,可培养方法的局限性很大,但是采用荧光定量PCR的方法有较理想的效果。本文对荧光定量PCR的原理、扩增序列的选择、基因组提取方法等方面做一综述。     

沙门氏致病菌标准阳性模板的构建及实时荧光定量聚合酶链式反应检测

目的:构建重组质粒作为标准阳性模板,建立食品中沙门氏致病菌实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法。方法:以致病性沙门氏菌inv A基因上特异性片段为目标,设计并合成引物和Taq Man探针,将目标片段连接到PGM-T载体上构建重组质粒,建立实时荧光定量检测体系,并考察方法的灵敏性、特异性、重复性和准确性。结果:构建出致病性沙门氏菌特异性基因片段的重组质粒,能够作为实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法的标准阳性模板,标准曲线方程为Y=-3.151 lg X+42.86(R2=0.999),灵敏度80拷贝反应体系,能特异区分沙门氏菌与类型的细菌,同时,批内和批间的变异系数均小于5%,具有良好的重复性。结论:本方法能够实现对食品中致病性沙门氏菌进行定性定量检测。     

食源性单增李斯特菌的实时定量PCR检测

根据GenBank数据库单增李斯特菌的O基因序列(AF253320)设计引物,建立单增李斯特菌实时荧光定量PCR检测方法。标准曲线的相关系数为0.996,检出底限约8个细菌/反应,而常规PCR检出底限约60个细菌/反应。比较常规PCR和实时荧光定量PCR对人工污染样品检测,发现实时定量PCR也具有较高的灵敏度;对40份牛奶和40份火腿样品进行检测,阳性率分别为12.5%和10%,与传统细菌分离检测结果完全相符。因此,实时定量PCR检测单增李斯特菌具有快速、灵敏的优点,适宜于食品中单增李斯特菌污染的调查及监测。     

通用型酵母菌实时荧光PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测鉴定食品中酵母污染菌实时荧光PCR法,根据酵母基因序列设计出通用型探针和引物,建立了运用实时荧光PCR法检测酵母的反应体系和反应条件,进而对该方法进行特异性验证,灵敏度分析及稳定性评价,并应用于产品样本的检测。特异性试验表明,酵母菌检测结果均为阳性,而细菌、霉菌均为阴性,荧光PCR检测结果的特异性为100%。灵敏度试验表明,酵母菌检出限在760 cfu/m L。稳定性试验表明,酵母菌组内实验CV在0.62~0.81%之间波动,而组间实验在0.43~0.77%之间波动。通过样品增菌检测发现在培养12 h后能检出阳性。本研究所建立的实时荧光PCR法特异性好、灵敏度高、稳定性好,具有快速、简便的特点,为快速检测食品中酵母污染提供新的方法和途径,具有很好的研究价值和应用前景。     

应用实时荧光PCR技术量化检测羊肉中猪源性和鸡源性成份

目的建立羊肉中猪源性成份和鸡源性成份的定量检测方法。方法以新鲜羊、猪和鸡瘦肉为样本提取DNA分子作为检测模板,针对基因组中单拷贝基因设计特异性的引物和探针,应用荧光实时定量PCR技术对模板DNA进行扩增。通过绘制扩增标准曲线和确定羊、猪和鸡的质量与DNA比值常数,对4种不同掺混比例的混合肉样进行定量分析。结果检测质量百分比的绝对误差可以控制在7%以内,量化结果基本准确。结论对于组织成份单一的样品,可以通过在基因组单拷贝基因上设计特异性的引物,利用PCR技术实现在质量水平上对食品中动物源性成份的量化分析,该技术方法的建立可以为肉类掺假的监管工作提供有力的技术支撑。     

PCR技术在食品动物源性检测中的应用

简述了PCR技术检测食品动物源性的基本原理和方法,并对近年来国内外专门用来检测食品动物源性的PCR技术作了简介,主要包括常规PCR、多重PCR、实时荧光定量PCR、定量竞争PCR和RAPD-PCR等。     

分子生物学技术在一起食物中毒检测中的应用

应用分子生物学技术对一起食物中毒样品进行检测,提高实验室应对食物中毒快速检测和溯源分析能力。方法 应用实时荧光PCR技术对一起食物中毒10份患者粪便和6份可疑食品进行快速检测,并对39份粪便和8份食品进行病原培养分离鉴定,应用PCR技术对分离菌株进行invA毒力基因检测,PFGE及MLST基因分型技术对分离菌株进行同源性分析,并与其他地区菌株进行遗传学差异对比。结果 10份患者粪便和6份可疑食物经实时荧光PCR检测均为沙门菌阳性,从39份粪便和8份食品中共分离到31株肠炎沙门菌。PFGE及MLST分析显示31株菌具同源性,表明食物和患者分离菌株基因型别一致,MLST分型显示本次分离株与其他地区优势克隆有同源性,31株肠炎沙门菌均具有invA毒力基因。结论 实时荧光PCR技术应用于食物中毒病原检测,缩短了病原检测周期,提高了检测的准确性,PFGE及MLST两种基因分型技术可对病原菌进行溯源分析,对于掌握病原菌流行规律具有重要意义。     

多重荧光定量PCR快速鉴定转基因玉米品系

采用多重实时荧光 PCR技术的高通量特征,对转基因玉米MIR604、GA21、DAS-40278-9和98140的特异性靶标序列设计TaqMan-MGB荧光探针,通过退火温度和引物探针浓度梯度优化建立了四重实时荧光PCR检测方法,经特异性,重复性和灵敏性等方法学验证确认了方法的可靠性。MIR604、GA21、DAS-40278-9、98140四个特异性基因的标准曲线回归方程分别为y=-3.263x+36.632,y=-3.422x+36.384,y=-3.294x+38.978和y=-3.278x+37.514;Ct值变化范围分别在23.556～37.524,22.893～37.412,25.304～39.110和24.501～37.618之间;标准偏差分别在0.078～0.476,0.085～0.463,0.120～0.487和0.148～0.353之间;相关系数R2分别为0.997,0.996,0.995和0.993;检出限可达10个拷贝,扩增效率满足欧盟等国际要求。该方法一管多检,操作简便,成本较低,适用于大批次样本的高效分析检测,为转基因产品合规使用和进出口食品安全监测提供方法参考。     

多重荧光聚合酶链反应对转基因能力验证样品的检测和验证

目的利用多重实时荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)对转基因能力验证样品进行检测和验证。方法通过筛选出合适的多重引物和探针、核酸提取及多重扩增和分析方法,分别对9个转基因标准品和11个来自于中国合格评定国家认可委员会(China National Accreditation Service for Conformity Assessment,CNAS)和食品分析水平测试计划(food analysis performance assessment scheme,FAPAS)的能力验证样品进行多重荧光PCR检测,通过SPSS统计软件比较二重、三重实时荧光PCR的循环阈值(cycle threshold,Ct)与单重实时荧光PCR结果的差异性。结果二重实时荧光PCR可同时检测Ca MV35s和NOS 2个基因,三重实时荧光PCR可同时检测Ca MV35s,NOS和NPTII 3个外源基因,各基因之间无信号的交叉干扰。经统计分析,二重和三重实时荧光PCR相对于单重实时荧光PCR的结果无显著性差异。结论建立的二重和三重实时荧光PCR技术可用于能力验证和实验室间比对实验,简单快速,节约试剂成本,且结果准确度可满足日常检测需求。