琼胶寡糖对脂多糖诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用

目的:研究琼胶寡糖对脂多糖(LPS)诱导巨噬细胞RAW264.7炎症反应的抑制作用。方法:采用傅里叶红外光谱法、核磁共振和高效液相色谱法解析琼胶寡糖的分子结构;采用LPS诱导巨噬细胞RAW264.7建立炎症反应模型,测定琼胶寡糖对RAW264.7细胞活力、细胞内一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子(TNF-α)和活性氧簇(ROS)水平的影响;采用Western blot分析丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路中c-Jun氨基末端激酶(JNK)、细胞外信号调节激酶(ERK)和蛋白激酶p38的表达和磷酸化水平。结果:分子结构鉴定结果显示琼胶寡糖具有β构型半乳糖糖环结构,分子质量范围为1 065.5~1 308.2 u。琼胶寡糖可以提高LPS诱导巨噬细胞系RAW264.7炎症反应后的细胞活力,在0~250 μg/mL剂量下呈浓度依赖性地降低细胞内NO、TNF-α和ROS水平,对LPS诱导MAPK家族激酶JNK、ERK、p38磷酸化水平的升高具有抑制作用。结论:琼胶寡糖能够抑制LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7炎症反应,可能与阻碍MAPK信号转导有关。     

铁观音茶提取物对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制

研究铁观音茶提取物对脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及机制。用脂多糖作用于RAW264.7细胞,建立炎症模型,并用吲哚美辛和不同浓度铁观音提取物处理,检测NO和IL-6的分泌情况,qPCR检测一氧化氮合酶(iNOS)、环氧合酶2(COX-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)mRNA相对表达,Western Blot检测炎症相关蛋白激酶(IKKβ),核转录因子κB抑制因子(IκB)、核转录因子κB p65(NF κB p65)及其磷酸化产物的相对表达。结果显示,铁观音茶提取物能显著抑制炎症介质NO分泌和IL-6蛋白表达量(p<0.05),抑制炎症相关基因iNOS、COX-2、TNF-α和MCP-1等表达,并极显著抑制NF-κB信号通路相关蛋白IKKβ、IkB和p65的磷酸化(p<0.01)。以上结果表明,铁观音茶提取物可明显抑制LPS诱导的RAW264.7细胞炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

红松松仁多糖对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

目的:探讨红松松仁多糖PNP40c-1对脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及可能机制。方法:以LPS刺激RAW264.7细胞诱导炎症模型,分别采用MTT法、比色法、酶联免疫法、RT-PCR和Western Blot等方法,比较LPS诱导前后巨噬细胞的细胞活力、吞噬能力、一氧化氮(nitric oxide,NO)/一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,iNOS)和细胞因子表达的变化;同时对Nrf2/HO-1信号通路中关键蛋白核因子E2相关因子2(nuclear factor(erythroid-derived 2)-like 2 protein,Nrf2)和血红素氧化酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的mRNA和蛋白表达水平进行研究,以探讨PNP40c-1的具体作用机制。结果:在LPS诱导RAW264.7细胞的炎症反应中,PNP40c-1以剂量依赖性显著提高巨噬细胞的吞噬能力(P<0.05),抑制LPS诱导的NO和iNOS过量表达;PNP40c-1还可通过Nrf2/HO-1信号通路调节炎症因子如肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α),白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(IL-6)的分泌,缓解炎症反应。结论:红松松仁多糖PNP40c-1对LPS诱导的炎症反应具有一定的抑制作用,其作用机制与调节Nrf2/HO-1信号通路有关。     

南极磷虾油对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用

为研究南极磷虾油的抗炎作用,以脂多糖(LPS)诱导的RAW264.7细胞为炎症模型,通过细胞形态、细胞吞噬能力、髓过氧化物酶(MPO)活力、促炎细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)等指标,评价南极磷虾油的抗炎能力,并通过炎症因子及炎症关键酶(iNOS和COX-2)基因的表达,研究其抗炎机理。结果表明,南极磷虾油可以显著缓解LPS引起的细胞分化,抑制细胞吞噬能力和MPO活力的增强,以及炎症因子分泌量的升高(尤其是TNF-α)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)的检测结果表明,南极磷虾油可以显著平息LPS引发的炎症关键酶和炎症因子基因的活化。结论:南极磷虾油具备抗炎活性,该活性与其对iNOS和COX-2的调控作用相关。     

洋葱槲皮素对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应抑制作用

为探讨洋葱槲皮素的抗炎作用,本研究以小鼠腹腔巨噬细胞为模型,采用MTT法检测洋葱槲皮素单药组、洋葱槲皮素与LPS复合药组对巨噬细胞吞噬功能的影响;采用ELISA法检测洋葱槲皮素单药组、洋葱槲皮素与LPS复合药组对小鼠腹腔巨噬细胞分泌细胞因子和炎症介质的影响。结果显示,洋葱槲皮素能够提高巨噬细胞的吞噬功能;洋葱槲皮素单药、洋葱槲皮素与LPS复合药组刺激巨噬细胞,均能够抑制巨噬细胞IL-1β和COX-2的产生。结论:洋葱槲皮素可能通过提高巨噬细胞的吞噬功能、影响细胞因子和炎症介质的分泌,而发挥抗炎作用。      

大蒜素对脂多糖诱导腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制

目的:探讨大蒜素对脂多糖(LPS)诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应的抑制作用及机制。方法:建立LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞炎症反应细胞模型,并用地塞米松和不同浓度大蒜素处理,MTT法检测细胞活力,中性红吞噬实验检测吞噬能力,Griess法检测一氧化氮(NO)及ELISA法检测COX-2酶活性和IL-6的分泌,qPCR检测环氧合酶2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)和IL-6的mRNA表达水平,Western Blot检测COX-2、iNOS和IL-6的蛋白表达以及核转录因子NF-κB p65及其磷酸化产物的相对表达。结果:大蒜素浓度在40~160 μg/mL范围内对腹腔巨噬细胞均无细胞毒性;与LPS组比较,大蒜素处理组能促进腹腔巨噬细胞的吞噬能力,能显著(P<0.05)抑制炎症因子COX-2酶活性、NO和IL-6的分泌,能显著(P<0.05)抑制基因COX-2、iNOS和IL-6 mRNA和蛋白的相对表达,并极显著(P<0.01)抑制NF-κB p65信号通路的磷酸化。结论:大蒜素能显著抑制LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞的炎症反应,其机制可能与抑制NF-κB信号通路激活有关。     

γ-谷维素对脂多糖诱导巨噬细胞RAW264.7炎症因子表达的影响

利用细菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激巨噬细胞RAW264.7形成炎症模型,评价γ-谷维素对巨噬细胞炎症因子表达的影响。在LPS刺激的RAW264.7细胞培养基中,添加不同浓度的γ-谷维素,分析培养基中炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的含量,以及NO_2~-/NO_3~-含量,发现γ-谷维素能抑制炎症因子的分泌;利用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)分析mRNA表达水平,确定γ-谷维素能抑制炎症因子的基因表达;采用Western blotting分析进一步确定γ-谷维素能抑制炎症因子的蛋白表达。综上所述,γ-谷维素能明显抑制炎症因子IL-1β、TNF-α、IL-6、NO等分泌和表达。     

鹿胎肽对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用

本实验从鹿胎中提取鹿胎肽（DFP）,通过体外实验研究其对巨噬细胞RAW264.7的免疫调节作用。采用噻唑蓝（MTT）实验检测超滤组分各肽段的增殖活性,筛选增殖活性高的组分。选用中性红吞噬实验、酶联免疫吸附检测法测定DFP对RAW264.7细胞吞噬指数、一氧化氮（NO）浓度及细胞因子如白介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6和肿瘤坏死因子子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）的分泌能力,同时还研究了DFP对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于1 kDa的DFP-5对巨噬细胞RAW264.7作用后,可显著（P<0.05）提高巨噬细胞的增殖活性、吞噬活性、NO释放量以及细胞因子的分泌水平,并且在DFP-5质量浓度为25 μg/mL时效果最好。细胞周期结果表明,DFP-5能够促进RAW264.7细胞的生长,且主要作用在G0/G1期。以上结果表明,鹿胎肽具有增强免疫能力的潜在作用。     

新型麦胚活性肽对脂多糖诱导RAW264.7细胞的抗炎作用

研究从小麦胚芽蛋白中筛选出具有抗炎作用的活性肽。采用碱溶酸沉法从小麦胚芽中提取麦胚蛋白,采用体外模拟胃肠道消化法,利用胃蛋白酶、胰蛋白酶和 α-糜蛋白酶对麦胚蛋白进行酶解得到酶解产物;采用超滤膜进行分离,得到不同分子量的活性组分：Ⅰ（>3 Ku）、Ⅱ（1～3 Ku）和Ⅲ（<1 Ku）。通过建立脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）诱导的RAW 264.7细胞炎症模型筛选出抗炎活性最强的组分为Ⅲ（<1 Ku）。进一步利用液相色谱-串联质谱法鉴定出Ⅲ组分含14条多肽,结合PeptideRanker数据库预测结果,最终筛选出P1（APEPEPAF）、P2（MDTSAPSPF）、P3（IDIPNGR）和P4（VDPAVPPK）四条活性多肽,其中P1可显著抑制LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞NO及IL-6、TNF-α和IL-1β的分泌,促进IL-10的分泌。     

草苁蓉多糖对脂多糖诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞炎症反应的抑制作用

该文探讨草苁蓉多糖(Boschnikia rossica polysaccharides, BRPS)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠J774A.1巨噬细胞炎症反应的抑制作用。将小鼠J774A.1巨噬细胞随机分为正常组、模型组、BRPS组(剂量分别为25、50、100 mg/L),用细胞增殖毒性试剂盒检测J774A.1巨噬细胞存活率,酶联免疫吸附法检测细胞培养液中的肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平。用免疫印迹法测定环氧合酶-2(COX-2)、Toll样受体4(TLR4)、白介素-1受体相关激酶4(IRAK4)、髓样分化因子88(MyD88)以及核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达情况。结果表明,LPS在100～2 000μg/L浓度范围时对J774A.1巨噬细胞存活率无影响,但能够上调小鼠J774A.1巨噬细胞炎症因子TNF-α和IL-6的分泌,此结果提示J774A.1细胞炎症模型构建成功。BRPS对LPS诱导的J774A.1细胞存活率无影响;但是能抑制LPS诱导的J774A.1巨噬细胞...     

青蛤酶解多肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

研究酶解法制备的青蛤多肽（Cyclina sinensis peptides,CSP）对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用。以RAW264.7巨噬细胞相对增殖率为指标,选用胃蛋白酶对青蛤肉进行酶解,酶解液经超滤、冷冻干燥后,采用噻唑蓝（methyl thiazolyltetrazolium,MTT）法筛选出增殖活性最高的组分进行免疫调节作用研究。采用MTT细胞增殖实验、倒置显微镜观察、中性红吞噬实验、硝酸根还原酶法及酶联免疫吸附检测法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）测定CSP-5对RAW264.7巨噬细胞的生长与增殖、细胞形态、吞噬能力、一氧化氮（nitric oxide,NO）分泌能力及细胞因子白介素（interleukin,IL）-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）分泌能力的影响;同时还研究了CSP-5对巨噬细胞各周期分布的影响。结果表明,分子质量小于3 kDa的CSP-5对RAW264.7细胞的生长与增殖具有明显的促进作用,且主要作用于G0/G1期,对细胞吞噬能力、NO分泌能力和细胞因子分泌能力的提高具有显著的促进效果;形态学观察结果显示经CSP-5作用后巨噬细胞体积变大且长出较多伪足。由此可知,CSP-5具有激活巨噬细胞增强机体免疫力的潜在作用。     

刺参ACE抑制肽制备及降压功效分析

以刺参（Stichopus japonicus）体壁为原料,利用复合蛋白酶对其进行酶解,运用单因素法优化血管紧张素转化酶（angiotensin I-converting enzyme,ACE）抑制肽的酶解制备工艺。获得最佳工艺参数为：料液比1∶6（g/mL）、加酶量0.8%（质量分数）、反应时间6?h、pH?7.0。将酶解产物用3?kDa膜超滤,其中小于3?kDa组分具有较高的ACE抑制活性,IC50为0.8?mg/mL,对ACE表现为非竞争性抑制作用。刺参ACE抑制肽在高温、酸性和碱性条件下均具有较好的稳定性,同时具有较强的抵抗胃蛋白酶、胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶消化的能力。动物实验结果表明,刺参ACE抑制肽对雄性自发性高血压大鼠具有良好的降压功效。因此,利用复合蛋白酶酶解刺参体壁制备的ACE抑制肽在降血压功能性食品的开发利用方面具有研究价值。     

纳豆菌糖肽对RAW264.7巨噬细胞的免疫调节作用

为考察纳豆菌糖肽(BNGP)对正常状态及脂多糖(LPS)激活状态巨噬细胞的免疫调节作用,本文用不同浓度的BNGP单独处理或LPS和不同浓度的BNGP共同处理RAW264.7巨噬细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖作用,中性红吞噬试验检测吞噬能力,Griess试剂检测细胞培养上清液中NO含量,酶联免疫分析法(ELISA)检测细胞培养上清液中细胞因子(IL-1β、TNF-α)、促炎介质(PGE2)含量,Western Blot检测COX-2和i NOS蛋白表达水平。试验结果表明:BNGP在62.5~500μg/m L浓度范围内能提高正常状态的RAW264.7巨噬细胞的代谢活力,增加NO、IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌量,提高COX-2和i NOS的表达量,高浓度(125μg/m L)能增强巨噬细胞的吞噬能力;当细胞处于LPS激活状态时,BNGP在62.5~500μg/m L浓度范围内能抑制IL-1β、TNF-α、PGE2的分泌,浓度为500μg/m L时可抑制NO的产生及i NOS的表达,高浓度(125μg/m L)则能下调COX-2的表达。     

海鲈鱼免疫肽的制备及对RAW264.7细胞双向免疫调节作用研究

为探究海鲈鱼免疫调节肽(Lateolabrax maculatus immunomodulatory peptides,LIP)的免疫和抗炎活性,以小鼠脾淋巴细胞刺激指数为指标,通过单因素和响应面优化实验确定LIP的最佳制备条件。利用RAW264.7巨噬细胞模型,探究LIP的免疫调节活性。并构建脂多糖诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症模型,探讨LIP的抗炎活性。研究结果表明,LIP的优化制备条件为料液比1.0∶3.8(g/mL)、酶质量分数2.14%、木瓜蛋白酶酶解时间56min,此条件下的LIP对小鼠脾淋巴细胞刺激指数为2.57。巨噬细胞免疫活性研究结果表明,LIP具有良好的免疫调节作用。当LIP质量浓度为400μg/mL时,LIP主要是通过促进了RAW264.7细胞的增殖活性、吞噬能力、一氧化氮和胞内活性氧的生成、一氧化氮合酶表达以及促炎因子分泌。研究结果表明:LIP具有免疫调节作用；400μg/mL的LIP还可抑制一氧化氮合酶和环氧化酶-2的mRNA过度表达,降低一氧化氮、前列腺素E₂和促炎因子的过度分泌,展现出良好的抗炎作用。研究结果表明,LIP可以发挥“提高免疫应答”和“抑制过度免疫应答”的双向调节作用。研究旨在为开展双向免疫调节功能性食品的研究提供理论基础。     

紫外线诱导海参体壁基因表达的研究

本论文对紫外线(58μW/cm2,30 min)诱导的海参体壁自溶进行了基因表达的研究。采用TRIzol法提取海参体壁中的总RNA,以细胞色素B(Cyt B)为内标,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对组织蛋白酶C(CC)、纤维蛋白原A(FGL)、衰老相关蛋白(SAP)和主要卵黄蛋白2(MYP2)、组织蛋白酶L(CL)、钙网蛋白(Calreticulin)、基质金属蛋白酶14(MMP14)、乙酰胆碱酯酶(Ach E)等29种分子进行基因扩增。结果显示,紫外线照射30 min后,海参体壁组织蛋白酶C、纤维蛋白原A、衰老相关蛋白和主要卵黄蛋白2的基因表达水平显著上调(p0.05),上调水平分别较对照组提高了71.4±44.8%、27.1±18.4%、43.7±21.6%和165.5±122.7%,而组织蛋白酶L、钙网蛋白、基质金属蛋白酶14、乙酰胆碱酯酶等基因表达没有显著变化。这些结果表明组织蛋白酶C、纤维蛋白原A、衰老相关蛋白和主要卵黄蛋白2可能参与海参体壁的自溶过程。     

海参二肽基肽酶Ⅳ抑制肽的酶解制备及结构鉴定

通过抑制二肽基肽酶IV(Dipeptidyl-peptidase IV, DPP-IV)的活性,从而减少GLP-1的降解,提高血液中胰岛素的水平,是控制血糖水平的一种重要手段。本文以海参(Holothariatubulosa)为原料,通过探究蛋白酶种类、加酶量和酶解时间对酶解产物DPP-IV抑制活性、蛋白回收率和水解度的影响,确定了海参DPP-IV抑制肽的制备条件,并进一步测定了其分子量分布和总氨基酸组成,最后通过UPLC-MS/MS鉴定了其潜在的活性肽序列。结果发现,木瓜蛋白酶与复合蛋白酶1:1的复配酶解具有最佳的酶解效果,其产物的得率和DPP-IV抑制活性均最高,且在加酶量为干海参质量的1%,酶解时间为4 h时,海参酶解产物在终浓度为2 mg/mL时的DPP-IV抑制率为66.97%,蛋白回收率为76.25%,水解度为6.10%。酶解产物的分子量大都小于5000 u,且富含脯氨酸(Pro)和丙氨酸(Ala)等与抑制DPP-IV活性有关的氨基酸。将获得的酶解物中的肽段进行液质联用检测,并通过Mascot分析筛选得到28条具DPP-IV抑制肽的肽序列,分子量在500～1936 u。本实验结果为以海参为原料进行降血糖产品的开发奠定了基础。     

海参加工过程中蒸煮工艺对产品品质的影响

为探究蒸煮工艺对海参产品品质的影响,以刺参为试验原料,研究了其经低压、常压和高压蒸煮处理后,质量损失率、质构特征、组织形态、复水效果以及营养成分等的变化情况。结果表明,低压蒸煮处理的海参质量损失率明显低于常压组(P0.05)和高压组(P0.01);不同蒸煮压力处理的海参均具有良好的外观形态,但硬度差异较大,蒸煮后海参的水发速度和最大复水倍数也有明显不同,且呈现出与硬度值负相关的规律;低压处理对海参体壁组织结构的破坏程度相对较轻,相应的硬度值较大,水发速度较慢、复水倍数较小;另外,与常压和高压蒸煮工艺相比,低压蒸煮可以显著减少蛋白质和海参多糖损失(P0.05)。研究结果将为海参加工过程中蒸煮工艺的选择和优化提供参考。     

海参功能特性及其食品的研究进展

海参是一种名贵的滋补品,列为"海八珍"之首,以其丰富的营养和保健功能而深受人们的青睐。文中介绍了海参的保健功能和抗菌活性的研究进展,营养成分及功能性海参食品开发现状,并分析了功能性海参食品的开发前景和存在的问题。