高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1。对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株。通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT。采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化。借助于SAS软件,首先利用Plackett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值。在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始pH值为4.52。结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26μg/g,硒总含量为10654.62μg/L,为出发菌株的1.62倍。     

富硒益生菌的筛选及其富硒条件的优化

为了获得能耐受较高亚硒酸钠质量浓度和具有富硒能力的益生菌菌株,对7株酵母菌和12株乳酸菌进行了筛选。结果表明,所有菌株均能在亚硒酸钠质量浓度为20~80μg/m L的平板上生长,乳酸菌YQRS菌株和酵母菌FJYJM3菌株具有较高的耐受性和富硒能力。对它们进行发酵条件的优化,表明YQRS菌株在亚硒酸钠添加量为15μg/m L、添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最好,菌体生物量为2.66 g/L,总硒含量能达到2 300.26μg/L。而FJYJM3菌株在亚硒酸钠添加量为20μg/m L,添加硒的时间为对数期前期时,富硒效果最显著,生物量能达到4.86 g/L,总硒含量能达到5 790.99μg/L。     

高生物量富硒酵母菌的选育

以酿酒酵母PT为出发菌株,采用梯度浓度筛选的方法对其进行驯化,得到1株生物量较高和对亚硒酸钠抗性较高的菌株GB-1.对其进行紫外诱变处理,当致死率达91.85%时,获得多株突变株.通过多次平板初筛和摇瓶复筛,得到1株高生物量富硒酵母UV-PT.采用响应面法对富硒酵母UV-PT发酵条件进行了优化.借助于SAS软件,首先利用Plaekett-Burman试验设计筛选出影响富硒的3个主要因素,即转速、温度、初始pH值.在此基础上,再利用Box-Behnken试验设计及响应面分析法对发酵条件进行优化,确定最佳发酵条件:转速为203r/min,发酵温度为30.3℃,初始PH值为4.52.结果表明,优化后富硒酵母的生物量和含硒量分别为10.62g/L、1003.26ug/g,硒总含量为10654.62ug/L,为出发菌株的1.62倍.     

高富硒酵母菌诱变选育研究

对36株不同来源的酵母菌进行了硒耐受性分析和比较,获得1株硒耐受性和富硒能力较强的热带假丝酵母菌(Candida tropicalis)菌株1254。以该菌株为出发菌株,进行了亚硝基胍诱变和亚硒酸钠抗性筛选、紫外线诱变和乙硫氨酸抗性筛选等两轮突变和筛选,获得突变菌株1254-6-1,其生物量、总硒含量、有机硒的含量及转化率达到7.60 g/l、5 626.00μg/g、4 879.99μg/g、86.74%,分别为原始出发菌株的1.85倍、7.90倍、9.35倍、1.18倍;各种氨基酸的含量均高于出发菌株,其中蛋氨酸和胱氨酸的含量分别是出发株的135%和194.10%。     

富硒酵母的分离鉴定及富硒条件的优化

富硒酵母生产发酵食品是补充硒元素的有效方法,以实验室保存的酵母菌为材料,通过选择培养基平板稀释法,分离纯化得 到四株富硒酵母,经形态学和分子生物学鉴定,初步鉴定菌株Z4、Z5、Z7、Z9均为库德毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）。 通过对比四株菌 的生长曲线及富硒能力,发现Z5菌株生长状况最好,选取接种量、碳源（葡萄糖）和氮源（蛋白胨）添加量作为单一因素,通过单因素 试验和正交试验,探究各影响因素对菌株Z5富硒能力的影响。 结果表明,Z5菌株的最佳富硒发酵条件为接种量10%,葡萄糖2.4%,蛋 白胨1.8%。 在此最佳条件下,菌株Z5生物量为9.63 g/L,总硒含量可达到862 μg/g。     

响应面法优化富硒酵母的营养条件优化

试验所用酵母菌种是经过诱变在实验室保存的富硒酵母的菌种,经过活化,对富硒酵母的营养条件优化进行优化,选取了3个主要因素,采用响应面法,以富硒酵母生物量和其富硒能力为响应值,经过优化后富硒酵母的培养基组成及比例为:碳源选用蔗糖,浓度为6.07%,氮源选用等比例的牛肉膏和蛋白胨作为复合氮源,浓度为2.03%,无机盐选用硫酸亚铁,浓度为0.137%。经培养验证,最终获得的酵母生物量为17.534 2 g/L,富硒能力为1 420μg/g。比原始菌株生物量提高23.4%,富硒能力提高41.3%。     

富硒猕猴桃果酒酵母的筛选及鉴定

通过酵母菌的分离、显微镜观察和WL培养基的筛选,初筛出酵母菌10 株。采用猕猴桃果汁发酵法、CO2损失质量比较法、以及生理生化的鉴定,从中复筛出一株发酵能力好、产果香酒香浓郁的菌株Y-41。查阅《酵母菌的特征与鉴定手册》,初步鉴定该菌株为毕赤酵母属,再通过分子生物学鉴定,确定该菌株为库德里阿兹威氏毕赤酵母（Pichia kudriavzevii）。对Y-41菌种进行了耐受性检测,结果表明Y-41对葡萄糖、酒精度、pH值具有较高耐受性,可作为富硒猕猴桃果酒发酵专用菌种。     

高生物量富硒产朊假丝酵母菌株的选育

从5株优良的发酵酵母菌中筛选出耐硒和富硒能力较好的产朊假丝酵母,采用耐酸驯化和梯度浓度的耐硒驯化增加菌株的抗性。研究表明,产朊假丝酵母Ⅰ的富硒能力更好。在此基础上,经复合诱变、亚硒酸钠抗性平板初筛和摇瓶复筛,筛选出生物量和含硒量都较高的菌株D-5,再将突变株D-5进行紫外诱变,筛选出1株高生物量和高含硒量的菌株U-16,其菌株生物量为5.86 g/L,总硒量为1 575.40 μg/g,有机硒量为1 500.90 μg/g,其有机硒占胞内总硒比重的95.26%。与出发菌株相比,筛选菌株的生物量提高了67.90%,有机硒量增加了95.95%。     

富硒酵母发酵工艺的优化

以富硒酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）SY2为发酵菌种,利用5 L发酵罐培养富硒酵母。以富硒酵母生长及硒转化率为评价指标,优化其发酵工艺条件,比较溶氧反馈补料与拟指数补料两种方式对富硒酵母生长、硒转化率等的影响。结果表明,富硒酵母最适发酵条件为：初始pH 5.0,发酵温度30℃,接种量8%,硒添加量30 mg/L,发酵时间24 h。在此优化条件下,富硒酵母生物量为9.8 g/L,硒转化率为77.5%。在拟指数补料方式下,培养周期为34 h,富硒酵母得率为0.252 g/g,硒含量为1 920.5μg/g,硒的转化率为82.7%;在溶氧反馈补料方式下,培养周期为46 h,富硒酵母得率为0.317 g/g,硒含量为1 759.5μg/g,硒转化率为90.1%。结果显示,拟指数补料培养周期短,生产强度、酵母硒含量较高,是适宜补料方式。     

宜春明月山富硒土壤中耐硒酵母菌株的筛选与鉴定

从宜春明月山毛竹林采集的富硒土壤中,筛选出耐硒酵母菌株并进行鉴定。采用PDA培养基、营养琼脂培养基、马丁氏培养基筛选出耐亚硒酸钠浓度较高的酵母菌株,根据菌株形态学特征和26S rDNA基因序列分析,对其进行分类鉴定。从土壤中分离得到7株耐硒菌株,其中2株具有典型酵母菌特征的菌株,经鉴定结果表明:菌株A₁为Saitozymapodzolica,菌株P为Cyberlindnerasaturnus。得到2株耐硒酵母菌株,丰富了耐硒酵母资源。     

富硒酵母的诱变及突变株的筛选研究

以实验室冷藏的从馒头酵子中提取的馒头酵母作为出发菌株,把有机硒的含量作为筛选的指标,在诱变过程中,采用紫外线进行物理诱变和硫酸二乙酯(DES)进行化学诱变,诱变的菌种用10倍梯度稀释法稀释至10-5,取10-3,10-4和10-5涂平板,每个梯度涂3个平板,记录平板上的菌落数,并计算致死率。选用物理诱变和化学诱变的最佳致死率作为复合诱变的试验条件。通过初筛,从而选出较强的菌株12株,编号为Y1~Y12,接下来测定烘干的酵母生物量以及有机硒的含量,选育出一株生物量和富硒能力都最高的菌株Y9,该菌株的生物量为12.91 g/L,硒的含量为879μg/g,此菌株硒的含量比原始菌株提高了1.5倍,生物量比原来提高了39%。对Y9菌株连续传代三次,原菌株与三次传代菌株一起发酵培养,用吸光光度法测定有机硒的含量,通过吸光度的比较,得出硒的含量分别为875,869,870和872μg/g,硒的含量没有明显的变化,说明菌株没有发生回复突变,具有一定的稳定性。     

常压室温等离子体诱变选育富硒纳豆芽孢杆菌

纳豆芽孢杆菌可以转化亚硒酸钠为有机硒。对一株纳豆芽孢杆菌的生长曲线进行测定,确定了亚硒酸钠适宜的添加时间和添加量。以纳豆芽孢杆菌BSN424为出发菌株,采用常压室温等离子体诱变系统进行诱变,根据耐硒和富硒能力筛选,经连续传代培养后筛选出了富硒纳豆芽孢杆菌。结果表明,适宜加硒时间为培养后3 h,培养时间为24 h,培养基适宜硒质量浓度为6μg/mL,常压室温等离子体诱变系统功率为100 W,诱变时间为25 s。诱变后筛选得到一株具有较高富硒能力的诱变菌株BN-44,经摇瓶发酵后的富硒量为1136.43μg/g,相比出发菌株的742.12μg/g提高了53.13%。研究表明常压室温等离子体诱变育种能有效地对纳豆芽孢杆菌BSN424进行诱变,旨在为有机硒生物转化法中寻找益生菌富硒载体及其诱变育种提供一定依据。     

富硒酵母菌株的选育

以酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae L-11为出发菌株,通过DES多次诱变,Na2SeO3和乙硫氨酸抗性平板选择,得到一株高硒和高蛋氨酸含量的菌株L-11-7-2,其蛋氨酸含量达到1.37%,是L-11的169%.对L-11-7-2进行富硒培养,细胞内总硒和硒蛋氨酸分别为2452μg/g和1650μg/g,分别为出发株的280.2%和369.1%.     

基于麦汁培养基的富硒酵母培养条件优化

以啤酒酵母为材料,对富硒酵母的最适培养条件进行研究。结果显示：以2oBx 的麦汁培养酵母菌,其生长得率最高,过高的麦汁质量浓度会产生克拉勃脱效应而影响酵母生长。在2oBx 的麦汁培养基中适当添加酵母提取物,可显著提高酵母的生物量,而添加硫酸铵和磷酸二氢钾对酵母生物量的提高不明显;添加葡萄糖在一定程度上也能增加酵母的生物量,但这种增加会被硫酸铵抑制。培养基中的初始硒含量能显著影响酵母的生物量和细胞中硒的积累,在初始质量浓度为10mg/L(最终质量浓度为50mg/L)的Na2SeO3 初始质量浓度下培养24h,酵母的生物量可达2.83g/L,细胞中积累的总硒量为266.3mg/kg。     

高富硒酵母菌株的筛选及其富硒特性分析

以酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae）为出发菌株,NaN3为诱变剂、H2O2为选择压力进行菌株诱变筛选,以总硒及有机硒的含量与产率、硒磷酸合成酶（SPS）活性和蛋白硒含量为评价指标进行菌株富硒特性研究。结果表明,经10 mol/L NaN3处理40 min和2.50%H2O2筛分,从出发菌株中得到两株富硒水平高、富硒能力稳定的菌株HXS-01和HXS-02,经48 h摇瓶富硒培养后,菌株HXS-01和HXS-02总硒和有机硒含量及产率、SPS活性和蛋白硒含量分别比出发菌株高3.4～4.0倍、2.9～3.5倍、0.7～1.1倍和0.9～1.1倍,且以菌株HXS-02的富硒能力更高,其总硒含量和产率分别为2 303.97 μg/g和7 945.19 μg/L,有机硒占总硒的百分比超过97%。利用H2O2作为一种新的选择压力可以有效筛选出具有高SPS活性的富硒酵母菌株。     

富硒酵母的选育及其发酵条件的优化试验

通过对一株耐硒酵母进行UV和60Co逐级诱变,获得一株产量高的突变株Y7,发酵液的硒总含量达19mg/L,是出发菌株的1.58倍,经多次传代试验,证明其稳定性良好。通过单因素、L16(37)正交试验对其发酵培养基和培养条件进行优化,试验表明富硒酵母发酵培养基的最佳配方是:蔗糖6%,牛肉膏1%,蛋白胨1%,K2HPO4 0.15%,亚硒酸钠35μg/L;最佳培养条件:初始pH为4.0,温度32℃,装液量60mL/250mL摇瓶,转速200r/min,10%(v/v)接种量,培养48h。富硒酵母的硒总含量达23mg/L以上,是出发菌株的1.92倍。     

啤酒酵母的富硒条件和效果研究

研究了硒添加量、接种量、培养时间及装液量对啤酒酵母富硒作用的影响。结果表明，培养基中的硒添加量是影响啤酒酵母富硒效果的最主要因素，在初步确定的优化培养条件下（硒添加量20mg／L，接种量5％，培养时间20h，装液量60mL／250mL三角瓶），富硒酵母中的硒含量达920．3μg／g，硒总含量达4038．7μg／L，富硒效果较好。     

高生物量富硒酵母的选育和培养条件的初步研究

对富硒酵母进行了选育并进行了条件优化，得到了摇瓶培养时富硒酵母的最适发酵条件：温度30℃，10％接种量，转速200r／min，发酵培养基最适初始硒浓度为25μg／ml，初始pH为4．0，发酵培养时间48h，经测定成品硒酵母生物量达到10g／L，硒含量超过1500μg／g，硒总含量超过15000μg／L，其中有机硒含量超过90％。     

不同红曲菌菌株耐硒能力和富硒能力的初步研究

为比较不同红曲菌菌株的耐硒能力和富硒能力，以5株红曲菌菌株为研究对象，通过接种于亚硒酸钠浓度为0、10、20、50、100、200μg/mL的PDA培养基中培养，测量其生长曲线和菌丝体中硒含量和总硒产量。结果显示：不同亚硒酸钠浓度对红曲菌菌株生长的影响与硒的富集均存在差异，其中耐硒能力最强的菌株为紫色红曲菌CICC 5046，其在亚硒酸钠浓度为50μg/mL的PDA培养基平板上培养15 d后菌落直径可达(53.8±1.5)mm；富硒能力最强的菌株为红色红曲菌M7，其在亚硒酸钠浓度为50μg/mL的PDA培养基平板(25 mL培养基)上培养15 d后总硒产量达到最高，为(124.43±2.01)μg；而当PDA培养基中亚硒酸钠浓度为200μg/mL时，红色红曲菌M7菌丝体中的硒含量达到最高，为(3120.59±193.63)μg/g。因此，不同红曲菌对亚硒酸钠的耐受能力和富集能力均不同，这种差异性可能与菌株的基因型或其抗氧化能力有关。     

原生质体诱变选育高富硒量冬虫夏草菌株的研究

以冬虫夏草菌丝体为材料,经原生质体诱变获得了生物量和富硒能力均高于出发菌株的无性型菌株。实验结果表明:经紫外线诱变的8号再生菌株的生物量和富硒能力分别是13.445mg/mL和125.8μg/g,分别比出发菌株提高55.16%和50.12%。