重组纳豆激酶工程酵母菌发酵研究

利用在纤维蛋白平板法基础上进行改造的纤维蛋白原一琼脂糖平板法，筛选具有纳豆激酶活性的基因工程酵母菌。并用纤维蛋白平板法测定纳豆激酶纤溶活性。通过甲醇诱导从近100个菌落中筛选出5株纳豆激酶活性较高的重组纳豆激酶工程菌。同时确定了重组纳豆激酶酵母菌的最佳甲醇诱导浓度2％，产酶高峰时间为96h。     

纳豆发酵过程中纳豆激酶及活性物质的变化

研究纳豆菌在脱脂大豆发酵过程中,对健康很有益的纳豆激酶和大豆活性物质——大豆异黄酮的变化。结果显示:纳豆菌在脱脂大豆固态发酵中,发酵初始pH为8.0,水分质量分数为70%时,在37℃发酵48 h,产纳豆激酶活力最高;固态发酵条件为:发酵初始pH为7.0~9.0,水分质量分数80%时,40℃发酵48~96 h,原料中大部分大豆异黄酮苷转化为大豆异黄酮苷元。     

纳豆激酶的活性测定

归纳总结了目前关于纳豆激酶溶栓活性测定的各种方法,并简介人体溶栓过程的生理学背景和医学上检查血栓病情的各种常用方法,发现有待继续研究并建立一种更精确、更灵敏、更简便、更经济的NK溶栓活力的测定方法。     

纳豆发酵过程中纳豆激酶及活性物质的变化

研究纳豆菌在脱脂大豆发酵过程中,对健康很有益的纳豆激酶和大豆活性物质--大豆异黄酮的变化.结果显示纳豆菌在脱脂大豆固态发酵中,发酵初始pH为8.0,水分质量分数为70%时,在37 ℃发酵48 h,产纳豆激酶活力最高;固态发酵条件为发酵初始pH为7.0～9.0,水分质量分数80%时,40 ℃发酵48～96 h,原料中大部分大豆异黄酮苷转化为大豆异黄酮苷元.     

纳豆枯草杆菌的筛选和纳豆激酶发酵条件优化

纳豆激酶是由纳豆枯草杆菌产生的一种具有纤溶活性的丝氨酸蛋白酶.针对目前常用菌株的产酶活力较低、不能完全满足要求的问题,采用酪蛋白平板初筛摇瓶复筛的筛选策略,从纳豆中筛选获得了一株高产纳豆激酶的菌株,该菌株在筛选培养基上进行摇瓶培养,发酵液中纳豆激酶的酶活达到970 IU/mL.用Plackett Burman方法对影响液体发酵的各因素的效应进行了评价,并筛选出了有显著效应的四个主要因素:胰蛋白胨浓度、种龄、发酵温度和Na2HPO4浓度;在此基础上,用最陡爬坡路径逼近最大产酶条件区域;最后通过中心组合实验及响应面分析优化了纳豆枯草杆菌液体发酵的条件.通过在初始发酵条件和优化发酵条件下的对比研究,液体发酵液中纳豆激酶浓度从1 005 IU/mL提高到1 314 IU/mL,表明响应面法优化可成功地用于纳豆枯草杆菌液体发酵的条件优化.     

纳豆激酶分离纯化技术的研究

纳豆激酶具有很强的体内外溶栓作用,并具口服吸收溶栓的优点,是一具有开发潜力的食源性溶栓药物.对纳豆激酶分离纯化技术的研究现状和发展趋势进行了综述,讨论了传统的柱层析与新型的超顺磁性聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)微球、膨胀床吸附和反胶团萃取等分离方法,提出了将新型分离技术应用于纳豆激酶的分离以提高其纯度和产率,对大规模生产的分离纯化有一定的指导意义.     

纳豆激酶的生理学功能研究现状

通过血栓形成和溶解的生理学背景,阐述了纳豆激酶发挥溶栓功能的生理学机理,对纳豆激酶溶栓功能的相关实验研究进行了综述,并对纳豆激酶的开发应用前景进行了展望。     

不同干燥方式对纳豆纤溶活性影响的研究

干燥方式对纳豆纤溶活性有直接的影响．通过实验对比了3种干燥方式在不同干燥条件下对纳豆纤溶活性的影响,确定出3种干燥方式中真空冷冻干燥效果最佳．在-55℃、真空度0．08Mbar条件下干燥18-26h,纳豆纤溶活性损失10％～15％;电热鼓风干燥在50-60℃条件下干燥16-32h,纳豆纤溶活性损失25％～50％;电热真空干燥在50-60℃条件下干燥16-32h,纳豆纤溶活性损失40％～60％,实验证明电热鼓风干燥效果总体优于电热真空干燥．     

纳豆枯草杆菌的分离鉴定及发酵条件优化

从日本食品纳豆样品中,分离得到11株具有纤溶酶活性的产酶菌株,对其中酶活力最高一菌株N 06进行菌落形态、菌体形态及生理生化特性鉴定,鉴定为芽孢杆菌属枯草芽孢杆菌。并对该菌株进行液体发酵研究,优化了N 06菌株的最佳液体发酵培养基的碳源、氮源以及碳氮比的组成,即葡萄糖1.5%,蛋白胨1.5%,碳氮比1∶1。     

以豆粕为原料固态发酵产纳豆激酶工艺的优化

以食品级豆粕为唯一培养基成分,通过纳豆芽孢杆菌固态发酵产纳豆激酶的培养基的优化实验,确定优化条件为：接种量5%,装量为40,g于250,mL锥形瓶,培养基含水量60%,浸泡水pH,7.5,发酵温度37,℃.在培养24,h后达到产酶高峰,产酶活力达到1,662,FU/g.比较了在相同的发酵条件下,以食品级豆粕为培养基比大豆为培养基获得的酶活力和活菌数,都高出50%左右.     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌高密度发酵

高密度发酵是提高发酵产品、产量的一个非常有效的手段。对一株巴斯德毕赤酵母的植酸酶工程菌Gs115 /phyAⅡ ,采用酵母高密度发酵方法 ,葡萄糖的补加采用逐渐增加的方式 ,控制溶氧和还原糖浓度 ,获得细胞密度为 80g/L。甲醇诱导后 ,最高植酸酶活力达到 4 .1× 10 4U/mL。     

氧化亚铁硫杆菌分离复壮的研究

用稀释涂布平板法从已退化的氧化亚铁硫杆菌菌液中分离出氧化活性较高，生命力强的氧化亚铁硫杆菌T1，对其菌落，细胞形态和生长特性进行了初步研究，结果表明其最适生长条件为培养温度30℃，pH=2.0，分离出的T1菌株氧化活性是分离前菌株氧化活性的1．2倍。     

黑曲霉葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达及其高效发酵研究

葡萄糖氧化酶是一类能催化β-D-葡萄糖生成葡萄糖酸-8-内酯的酶类,在食品、药品以及生物传感器等领域具有广泛的应用前景.从黑曲霉中克隆出葡萄糖氧化酶编码序列,在毕赤酵母中实现了组成型和诱导型表达并分析了其酶学性质和发酵条件.结果 表明:黑曲霉葡萄糖氧化酶的编码基因长度为1 818 bp,编码605个氨基酸,具有21个氨...     

分泌型人胸腺素α1基因工程菌高密度发酵工艺的研究

探索分泌型重组人胸腺素α1工程菌的高密度高表达发酵工艺.在摇瓶培养获得大肠杆菌分泌型重组人胸腺素α1融合蛋白发酵的最佳条件的基础上,用15 L自控发酵罐进行分批补料培养,发酵中分阶段限制性流加氮、碳源,保持溶氧在30%以上,OD600约为25的时候,添加0.5 mmol/LIPTG于28℃诱导10 h.最终菌体密度OD600可达40以上,目的产物占菌体总蛋白25%以上.分泌型人胸腺素α1基因工程菌高密度发酵工艺的建立为工业化生产重组人胸腺素α1提供基础.     

建筑工程并行设计的研究

随着世界范围内市场竞争的激烈，以缩短产品开发时间为目的、综合考虑产品生命周期各相关环节的并行工程（或称并行设计、同步工程）日益受到工业界和学术界的广泛关注。本文介绍了并行设计的基本概念和建筑工程ＣＡＤ技术发展趋势，对建筑工程并行设计理论与方法学进行了初步的研究与探索。     

现浇钢筋混凝土楼板裂缝的成因及防治

论述现浇钢筋混凝土楼板裂缝的成因及防治措施。     

人γ-干扰素基因工程菌培养条件的研究

对表达重组人γ-干扰素的基因工程菌的培养条件进行了较详细的研究．确定了最佳的培养及诱导时间，并利用正交试验设计，对影响工程菌生长和重组人γ-干扰素表达的条件如培养基中葡萄糖、蛋白胨、酵母提取物的量及摇床转速、装液量、接种量、pH等进行了优化．结果表明，在优化条件下，表达的γ-干扰素包涵体占菌体总蛋白的60％以上，每升发酵液可获得包涵体约为1．6g．