具有抑菌活性植物乳杆菌的筛选及抑菌物质特性的研究

该研究通过牛津杯双层平板法,从分离自四川泡菜的114株植物乳杆菌中筛选对大肠杆菌O157:H7具有较强拮抗活性的菌株,并对其所产抑菌物质的特性进行了初步的研究。结果表明：114株植物乳杆菌的上清液均可抑制大肠杆菌,其中16株菌的上清液经排酸后仍有抑菌作用,并且抑菌作用不受过氧化氢酶影响,经蛋白酶处理后大幅降低甚至消失;在进一步筛选中发现植物乳杆菌IMAU80122所产抑菌物质具有耐酸（pH 3）、耐弱碱（pH 8）的特性,在80℃具有一定的稳定性,对不同的表面活性剂、有机溶剂、金属离子、盐浓度、紫外照射时间都具有良好的耐受性;对G^-菌株的抑菌活性强于G⁺菌株,但对供试的乳酸菌没有作用。综上所述,植物乳杆菌IMAU80122所产抑菌物质具有蛋白性质,不仅抑菌活性强,而且具有良好的稳定性和广谱抑菌效果,在食品加工和医药行业中具有一定的开发应用潜能。     

肽类抑菌物质效价的测定

采用琼脂扩散法以Nisin为标准样品,对副干酪乳杆菌(LactobacillusparacaseiHD1.7)产生的肽类抑菌物质效价测定条件进行了研究,结果表明在2号检测培养基中添加0.75%琼脂、以浓度为106cfu/mL枯草芽孢杆菌为指示菌是最佳检测效价的条件,在此条件下测得的肽类抑菌物质的效价为1.6×104IU/g。     

植物乳杆菌MXG-68所产细菌素的抑菌特性分析

研究乳酸菌细菌素的抑菌特性,为其作为生物防腐剂奠定基础。以酸马奶来源的植物乳杆菌MXG-6所产的细菌素为研究对象,对其抑菌谱、作用方式、相对分子质量及耐受性进行分析。该细菌素对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌均具有抑菌活性,属于广谱细菌素,作用方式为杀菌,而不是抑菌和溶菌。变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-polyacrylamide gels electrophoresis,SDS-PAGE)确定植物乳杆菌MXG-6所产细菌素的分子质量约6 ku。60、80、100、121℃处理30 min及4、-20℃处理30 d对抑菌活性影响不显著(P 0. 05),在pH 1～10均表现出抑菌活性,表明细菌素具有较好的温度耐受性和酸碱耐受性。有机溶剂及表面活性剂对细菌素的抑菌活性基本无影响(P 0. 05),而EDTA有利于提高抑菌活性。细菌素的抑菌特性分析可为更好地实现细菌素的开发及应用提供一定的理论依据。     

基于复合诱变选育高抑菌活性植物乳杆菌

为了获得高抑菌性能的乳酸菌,以植物乳杆菌DY6为出发菌株,首先对其进行常压室温等离子体（atmospheric room temperature plasma, ARTP）和亚硝基胍（nitrosoguanidine,NTG）的复合诱变,获得了抑菌活性较强的诱变菌株AN-55、AN-58及AN-68,其抑菌活性分别提高了19.83%、21.91%和18.40%。随后,经遗传稳定性实验发现菌株AN-55的抑菌性能更加稳定,8次传代后其抑菌活性较野生型菌株仍能提高20.51%。与此同时,菌株AN-55的基因组重测序结果表明plnK、cps4G、pts9D等基因序列的改变可能对提高菌株抑菌活性有重要影响,为植物乳杆菌在天然防腐剂和抗生素替代物的应用奠定了理论基础。     

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CW5的筛选及细菌素抑菌活性的研究

为了提高抑菌活性,对植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)CW5产细菌素的发酵条件进行了优化,分别研究了培养时间、温度、接种量、培养基起始pH、培养基碳源、氮源等因素对细菌素产生的影响,通过单因素水平实验和正交实验,确定产细菌素的最佳培养基组合和最佳发酵条件为:葡萄糖3%,胰蛋白胨1.5%,蛋白胨1.5%,酵母膏1%,硫酸镁0.058%,吐温80 0.2%,30℃培养24 h,培养基起始pH为6.5,接种量2%。CW5在优化前效价为367.82 IU/mL,优化后效价为1619.85 IU/mL,提高了340.39%。     

不同植物乳杆菌发酵液抑菌活性及其主要有机酸组成比较

对分离自云南传统发酵食品的18 株植物乳杆菌代谢产物的主要有机酸成分及对病原菌抑菌活性进行分析。采用Spot-on-lawn及琼脂扩散法研究不同植物乳杆菌代谢产物抑菌活性;通过高效液相色谱法分析主要有机酸的种类和产量;选取其中3 株植物乳杆菌对其进行包括生长曲线、pH值、抑菌活性在内的动态监测。结果表明,抑菌活性取决于不同的植物乳杆菌菌株、病原菌及发酵碳源。当大肠杆菌O157:H7作为病原菌、葡萄糖作为碳源时,植物乳杆菌YmL-4-5具有最高的抑菌活性;当沙门氏菌ATCC 6538作为病原菌、果糖作为碳源时,植物乳杆菌S5抑菌作用最强。数据证明植物乳杆菌发酵液的抑菌活性受上清液低pH值的影响,且主要抑菌物质为有机酸。有机酸的主要成分是乳酸（930.9～3 008.7 μg/mL）,其次为苹果酸和乙酸。其中乳酸和乙酸的产量与其对大肠杆菌O157:H7的抑菌活性呈正相关（r分别为0.474、0.488,P＜0.05）。本研究为研发新的生物防腐剂提供了理论依据。     

乳杆菌代谢产生抑菌物质的特性研究

从内蒙古传统发酵食品中筛选出具有抑酵母作用的乳杆菌,对其特性进行研究。结果表明,ALAC-3和ALAC-4菌株经排酸后,对酵母仍有抑菌效果。活性物质对热有很好的稳定性,并且对紫外线辐射不敏感。Ca2+、Mn2+对ALAC-3代谢产物的抑菌作用起促进作用,而K+、Na+、Mg2+对其代谢产物的抑菌作用起抑制作用。K+,Ca2+,Na+,Mg2+,Mn2+对ALAC-4代谢产物的抑菌作用均起抑制作用。经过氧化氢酶处理后,仍有抑菌效果。经木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后,抑菌活性均有不同程度降低,说明抑菌物质对蛋白酶敏感,故判定抑菌物质中有蛋白类物质。     

南瓜皮提取物的体外抑菌活性

为了揭示南瓜较长贮存期与其皮部活性物质功能之间的关系,通过使用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、水5种不同极性强度的溶剂对南瓜皮进行连续梯度提取,采用孢子萌发抑制法、琼脂孔扩散法和对倍稀释法测定了不同提取物对5种真菌:扩展青霉(Penicillium expansum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑根霉(Rhizopus stolonifer)、互格交链孢(Alternaria alternate)和粉红单端孢(Trichothecium roseum)和5种细菌:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄葡萄球菌(Staphylicoccus aureus)、荧光假单孢杆菌(Pseudomonas fluorescence)和乳酸菌(Lactobacillus plantarum)的抑菌活性和最低抑菌浓度;并用扫描电镜观察了水提取物对菌体形态的影响。结果表明:除石油醚提取物外,四种提取物对供试菌有不同程度的抑制活性,其中水提取物的抑菌活性最强,水提取物处理使菌体外表形态发生明显的伤害性变化。初步说明南瓜皮中的预存抗菌物质是有助于南瓜较长贮存期的一个因素。     

植物乳杆菌耐受口腔不良环境及其抑菌特性研究

拟利用前期已经筛选出的可以抑制变异链球菌的植物乳杆菌,研究了能抑制变异链球菌的植物乳杆菌在口腔应用方面的特性的研究。本研究测定了植物乳杆菌对溶菌酶、抗生素、盐和酸的耐受性,测定了五株植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum,L.plantarum）K25、SKT109、YW3-2、YW5-1和YW1-1的自聚集能力以及分别与变异链球菌的共聚集能力,以及研究了添加植物乳杆菌对变异链球菌自聚集能力和产胞外多糖的影响。结果表明,五株植物乳杆菌对溶菌酶都有一定耐受性,远高于人体口腔唾液的溶菌酶浓度（157μg/m L）。五株植物乳杆菌对酸和盐也有一定的耐受性。L.plantarum YW5-1对抗生素的耐受性较强。添加L.plantarum K25、YW5-1和YW1-1上清液后可以降低变异链球菌合成胞外多糖的能力。5株植物乳杆菌中K25和YW5-1的自聚和共聚能力较强,并且添加了植物乳杆菌后,可以降低变异链球菌的自聚集能力。      

南瓜皮提取物的体外抑菌活性

为了揭示南瓜较长贮存期与其皮部活性物质功能之间的关系,通过使用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、水5种不同极性强度的溶剂对南瓜皮进行连续梯度提取,采用孢子萌发抑制法、琼脂孔扩散法和对倍稀释法测定了不同提取物对5种真菌:扩展青霉(Penicillium expansum)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、黑根霉(Rhizopus stolonifer)、互格交链孢(Alternaria alternate)和粉红单端孢(Trichothecium roseum)和5种细菌:枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)、金黄葡萄球菌(Staphylicoccus aureus)、荧光假单孢杆菌(Pseudomonas fluorescence)和乳酸菌(Lactobacillus plantarum)的抑菌活性和最低抑菌浓度;并用扫描电镜观察了水提取物对菌体形态的影响。结果表明:除石油醚提取物外,四种提取物对供试菌有不同程度的抑制活性,其中水提取物的抑菌活性最强,水提取物处理使菌体外表形态发生明显的伤害性变化。初步说明南瓜皮中的预存抗菌物质是有助于南瓜较长贮存期的一个因素。      

芽孢乳酸杆菌抑菌物质特性的研究

芽孢乳酸杆菌1033在乳酸发酵过程中能产生抑菌物质,通过对这种抑菌物质的产生与培养基组成关系的分析,对抑菌物质的分离和提取的研究,以及对理化性质和抑菌谱的测定,初步探明了芽孢乳酸杆菌1033产生的这种抑菌物质能抑制常见的肠道病原菌.     

短乳杆菌发酵香肠脂肪氧化的研究

以蔬菜汁为培养基,不添加亚硝酸盐及任何防腐剂,利用短乳杆菌HF1.2发酵生产香肠,测定了发酵香肠的过氧化物值和pH,并对感官进行了评定,试验获得了理化和感官指标优良的产品,产品的过氧化物值表明接菌发酵香肠比自然发酵香肠的脂肪氧化程度明显偏低,符合中式发酵香肠的特点和食品绿色健康的要求.     

硫酸二乙酯诱变选育弱后酸化保加利亚乳杆菌

对保加利亚乳杆菌进行硫酸二乙酯(DES)诱变,应用正交试验得到DES法诱变的最佳条件为:菌液浓度为107个/mL,DES剂量为0.8%,诱变时间为30 min,诱变温度为37℃.应用青霉索对突变菌株进行筛选,最终得到37℃培养时产乳酸量与出发菌株一样,10℃贮藏时,突变菌株产乳酸量明显减少的菌株N01*.     

保加利亚乳杆菌中的亚油酸异构酶的研究

对保加利亚乳杆菌中的亚油酸异构酶的提取和性质进行了研究.利用超声波对乳酸杆菌细胞进行破碎,以提取细胞中的亚油酸异构酶,并就超声波破碎条件对亚油酸异构酶释放的影响进行了研究.通过单因素试验和正交试验得出保加利亚乳杆菌的最佳超声破碎条件为：间歇破碎次数80次（每次破碎3s,中间间隔4s）,破碎菌液体积60mL,菌悬液浓度15g/50mL,破碎时的抽提缓冲液最佳pH值4.8,NaCl浓度0.3mol/L.保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的粗酶液经硫酸铵盐析、超滤、凝胶过滤层析等步骤进行分离纯化后,酶的纯化倍数为23.00.经SDS-PAGE后只显示一条谱带,分子量约为33000D.对保加利亚乳杆菌亚油酸异构酶的部分酶学性质也进行了研究,结果表明：能专一性地将亚油酸转化为共轭亚油酸,转化产物中活性异构体的比例达到93.626%.     

PURIFICATION OF THE ANTI-LISTERIAL BACTERIOCINLIKE INHIBITORY SUBSTANCE PRODUCED BY ENTEROCOCCUS FAECIUM 108

Extracellular antimicrobial substances produced by certain enterococci inhibit Listeria monocytogenes. Enterococcus faecium 108, a competitive food isolate, produced a heat-stable and protease-sensitive anti -L. monocytogenes bacteriocin-like substance (Ef108) in Listeria selective enrichment broth and other media. Ef108 activity was purified to homogeneity by a four-step procedure including (NH₄)₂SO₄ fractionation, chromatography on anion exchange QSepharose column, and two Superose 12 gel filtration columns. In activities represented by two peaks (Ef108A and Ef108B), 90% of the crude activity was due to peak B. Ef108A is believed to be a variable aggregate of the active moiety in Ef108B. All Listeria spp. and five L. monocytogenes serotypes were inhibited by Ef108B in several media including Listeria enrichment medium. The Ef108 activity may be due to a bacteriocin-like inhibitory substance produced by E. faecium 108 that may suppress the growth and predominance of Listeria monocytogenes during selective enrichment .     

嗜酸乳杆菌发酵大豆蛋白粉的工艺研究

对用嗜酸乳杆菌发酵大豆蛋白粉的最佳配方、生产工艺进行研究,结果表明:以10%大豆蛋白粉,添加5%葡萄糖和0.04%酵母抽提物,接种量为7%,在发酵温度为39℃下发酵48 h～56 h,总酸度可达到10mg/g以上,活菌数可达到4.3×109cfu/mL,乳酸含量可以达到于0.55g/100g.     

纳豆菌和乳酸菌的耐酸性比较研究

研究比较纳豆菌和乳酸菌的耐酸性,观察菌株的发酵过程.从不同分离源中分离出9株纳豆菌和35株乳酸菌,对这44株菌进行在人工胃液中耐酸性的测定,结果显示,纳豆菌的耐酸性普遍高于乳酸菌.最后,对耐酸性较强的两种菌的生长曲线分别进行测定和比较,结果表明纳豆菌的生长快于乳酸菌,并能在发酵过程中基本保持发酵液pH的稳定.     

乳酸片球菌素的抑菌方式

以单核细胞增多症李氏杆菌CVCC1595为指示菌,通过对乳酸片球菌素吸附率的研究,发现乳酸片球菌素的吸附受盐浓度、pH和细胞膜的成分影响显著.NaCl和磷酸盐浓度越高,吸附作用越小,在400mmol/LNaCl溶液中,乳酸片球菌素对菌体的吸附率为0;在pH 6.0吸附率最高(100%),pH 2.0和8.0的吸附率为24.4%,pH 10.0时乳酸片球菌素在菌体上无吸附.温度对吸附影响很小,在100℃时吸附率比室温时下降了1.56%;时间对吸附没有影响,乳酸片球菌素对指示菌的吸附作用应是由静电引力引起,其杀菌作用是使细胞膜形成孔洞,胞内物质外泄,从而导致细胞的死亡.     

洋葱汁的酶法制备及其酒精发酵特性研究

研究了洋葱汁的酶法制备工艺及其酒精发酵特性。对果胶酶处理洋葱汁最适条件进行了优化,确定的适宜条件为：酶用量0.04%;作用时间90min;作用温度35℃;最适pH3.8。并对洋葱汁酒精发酵过程中的酒度、酸度、糖度和还原糖等成分的变化规律进行了研究。