玉米抗氧化肽的分离制备及其体外抗氧化活性的研究

本实验以2709碱性蛋白酶水解玉米蛋白粉制备玉米抗氧化肽，SephadexG-25、DEAE52纤维素纯化玉米抗氧化肽，并用几种不同的实验体系研究其体外抗氧化活性。结果表明，玉米抗氧化肽制备的最佳酶解条件为：pH=9．5，[E]／[S]=10％，时间4h，温度55℃。该条件下制备的玉米抗氧化肽对超氧阴离子自由基和羟基自由基有强烈的清除作用，并能显著地抑制细胞和组织脂质过氧化反应的发生（P〈0．01）。氨基酸组成分析表明其富含丙氨酸和亮氨酸，摩尔分数分别为17．39％和13．04％，并且含有5种人体必需的氨基酸，占玉米抗氧化肽氨基酸总含量的39．13％，因此在具有较高生物学活性的同时也具有较高的营养价值。     

玉米活性肽的分离纯化及抑制体外脂质过氧化作用研究

以玉米醇溶蛋白为底物,利用碱性蛋白酶进行水解反应获得了玉米活性肽组分,经离子交换和葡聚糖凝胶等方法对产物进一步分离纯化。以H2O2及Fe2+诱导的小鼠体外脂质过氧化反应为靶点,研究了玉米活性肽及其分离纯化组分对脂质过氧化的抑制作用。结果表明:活性肽及其分离纯化组分均具有抗脂质过氧化作用,其对小鼠肝组织体外脂质化抑制率达到30.65%。其中组分Ⅰ的抑制活性最强,分子量主要分布在400~1000u。     

脂质过氧化及抗氧化剂抗氧化活性检测方法

越来越多研究表明,很多疾病和衰老现象都与脂质过氧化有关。该文对近年脂质过氧化及抗氧化剂抗氧化活性检测方法作简单综述,包括气相色谱、液相色谱、质谱、化学发光法等,并对不同方法进行综合比较与评价。因各种检测技术对象各有不同,且各自各有优缺点,因此,要针对不同实验目的及条件以选择不同检测方法。     

泰和乌骨鸡活性肽的分离及其体外抗氧化作用

利用制备型HPLC 对泰和乌骨鸡活性肽进行分离,流动相为0.01mol/L 的磷酸盐溶液,采用强酸型离子交换树脂和强碱型离子交换树脂两步脱盐法对泰和乌骨鸡活性肽各分离组分进行脱盐处理。以肌肽和抗坏血酸为对照,通过清除羟自由基作用、抑制脂质过氧化作用以及对Fe2+ 和Cu2+ 螯合能力4 个体系测定泰和乌骨鸡活性肽及其分离组分的体外抗氧化能力。结果表明：泰和乌骨鸡活性肽分离所得13 个组分均具有一定的抗氧化能力,且与质量浓度呈量效关系,绝大部分分离活性肽组分比活性总肽有更强的羟自由基清除能力、脂质过氧化抑制能力以及Fe2+ 螯合能力。     

米糠肽抗氧化活性的研究

通过测定米糠肽的还原力、抗卵黄脂蛋白的脂质过氧化能力、抗油脂过氧化能力以及H2O2诱导的红细胞氧化溶血试验和大鼠肝匀浆脂质过氧化试验研究了米糠肽的抗氧化作用.结果表明:米糠肽具有较强的还原力,对脂质过氧化和油脂过氧化均具有良好的抑制作用,并能抑制H2O2诱导的红细胞氧化溶血反应和肝组织匀浆脂质过氧化反应的发生,有望作为天然抗氧化剂及功能性食品得到开发应用.     

不同苹果多酚提取物体外清除自由基及抗脂质过氧化的研究

目的：研究了不同苹果多酚提取物清除羟基自由基、超氧阴离了自由基和脂质体过氧化产生的丙二醛的效果。方法：采用D-脱氧核糖法，试剂盒法及改良的TBA比色法分别测定苹果多酚提取物清除羟基自由基、超氧阴离了自由基和脂质体过氧化产生的丙二醛的效果。结果：在这三种抗氧化体系中，不同的苹果多酚提取物均有抗氧化效果，但其抗氧化效果因体系的不同而不同，以AP Ⅰ，AP Ⅱ的抗氧化活性较强。结论：苹果多酚提取物具有抗氧化活性，其主要的抗氧化成分为分了量较小的酚类单体及原花青素低聚体。     

两步水解法制备玉米抗氧化活性肽及产物的稳定性

采用麦芽粉和碱性蛋白酶Alcalase对玉米醇溶蛋白进行两步水解制备玉米肽,以水解度、可溶性蛋白含量和抗氧化活性为指标,对第二步Alcalase的酶解条件进行优化,以确定制备玉米抗氧化肽的最适条件。另外,对玉米抗氧化肽的稳定性进行了研究。结果表明：制备玉米抗氧化肽的最适条件为：第一步麦芽粉水解,在底物浓度10%、pH5.5、温度50 ℃、酶底比30%条件下水解3 h;第二步Alcalase酶解,在底物浓度10%、pH8.5、温度60 ℃、酶底比0.75%条件下水解6 h。在此条件下,水解度、可溶性蛋白含量、羟基自由基清除率及亚铁离子螯合率分别为24.53%、33.43 mg/mL、30.59%、38.32%,分子量主要分布在300-6500 u（92.51%）范围内。玉米抗氧化肽具有热及贮藏稳定性,在中性和碱性条件下稳定,但不耐受酸性条件（pH3-5）。     

灵芝肽对脂质氧化的抑制作用研究

研究了灵芝肽在脂质体系中的抗氧化活性。结果表明：灵芝肽在豆油厦猪油体系中均具有良好的抗氧化活性，在豆油体系中其抗氧化性能优于BHT；并可有效地抑制脂肪氧合酶的活力，灵芝肽的半有效浓度IC50为16．9μg／mL。     

蜂胶对脂质过氧化的抑制作用

采用Fe2+诱导卵黄脂蛋白多不饱和脂肪酸发生脂质过氧化反应为模型,以硫代巴比妥酸反应物的光密度值为指标,观察了蜂胶对Fe2+诱导的脂质过氧化反应的抑制作用,结果表明,蜂胶可以抑制Fe2+诱导的脂质过氧化反应,呈现量效关系,同时对已受Fe2+诱导的脂质过氧化反应有一定的延缓和阻断作用,效果优于同浓度的芦丁和槲皮素。     

紫苏叶对脂质过氧化和活性氧自由基的作用

用化学发光法和硫代巴比妥酸法研究了紫苏叶的抗氧化作用。结果表明 ,紫苏叶对超氧阴离子自由基 (O- 2 ·)及羟基自由基 (OH·)均有较强的清除作用 ,并且能有效地抑制脂质过氧化。不同溶剂的紫苏叶提取物对亚油酸脂质过氧化的抑制效果不同 ,其顺序依次为 :水 >甲醇 >正己烷 >乙酸乙酯     

基于生物信息学技术的生物活性肽研究进展

传统的生物活性肽分离、纯化过程耗时费力,且鉴定难度较大,同时缺乏快速准确的活性评价方法,如何快速高效的提取制备活性肽仍是目前生物活性肽研究的重点。近年来发展迅速的生物信息学技术可为生物大数据分析提供方法和工具,正逐渐应用于生物活性肽的功能研究。本文首先总结了传统生物活性肽的分离、纯化及活性研究方法中的难点,然后重点阐述了生物信息学技术在模拟酶解、酶解产物的功能预测及与前体蛋白的选择,活性肽的识别和预测以及构效关系等方面的应用,以期为生物信息学在活性肽研究中的广泛应用提供参考。     

酶解蛋白制备生物活性肽进展

该文主要对国内外制取活性肽的蛋白质资源、其酶解物功能特性、蛋白酶解工艺和活性肽制取 方法进行分析;由于活性肽独特生理功能,在保健食品和饲料工业有着广泛应用。     

大豆生物活性肽的分离及其抗氧化活性研究

为制各具有抗氧化活性的大豆生物活性肽,本实验采用酶解处理大豆蛋白粉,对酶解产物进行葡聚糖Sephadex G-25凝胶柱层析分离,并对其各组分分子量分布及其抗氧化性进行了研究,对抗氧化活性最佳的肽段进行氨基酸组成分析。结果显示,大豆蛋白酶解物经Sephadex G-25分离后得到了六个肽片段,其中平均链长为4,即含有2～6个氨基酸残基的大豆功能短肽SPP4,对羟自由基具有最佳的清除作用,清除率达到80．13%,氨基酸组成分析发现该组分中缬氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸含量较高。结果表明,含2～6个氨基酸残基的大豆生理活性短肽具有较好的抗氧化活性。     

条斑紫菜活性肽的抗氧化作用

以条斑紫菜为原料,使用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶水解紫菜蛋白制备活性肽,采用还原能力、清除羟自由基和二苯代苦味酰基自由基作为抗氧化性评价指标,研究紫菜活性肽的体外抗氧化活性,并测定其分子质量分布。结果表明：3种蛋白酶对紫菜蛋白具有较好的酶解效果,酶解产物具有一定的还原能力;自由基清除率和底物浓度之间具有正相关关系,木瓜蛋白酶酶解活性肽清除羟自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.397mg/mL;胃蛋白酶酶解活性肽清除二苯代苦味酰基自由基活性最强,半数清除率质量浓度为0.261mg/mL;经测定,具有抗氧化活性的小分子肽分子质量分布在148～1963u之间。     

石斑鱼肉肽的酶法制备工艺及其抗氧化性

以冰鲜石斑鱼肉为原料,采用碱性蛋白酶酶解的方法制备蛋白肽。以水解度和1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH）自由基清除率为评价指标,在单因素试验的基础上,运用正交试验设计优化肽的制备工艺;利用DPPH自由基法、2,2’-联氮双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（2,2’-azinobis（3-ethylbenzothi azoline-6-sulfonic acid）ammonium salt,ABTS）自由基法、羟自由基（·OH）法和铁氰化钾还原法评价酶解物的抗氧化性。结果表明：石斑鱼肉肽的最佳制备条件为：酶解温度55 ℃、酶解pH 9、酶用量5 000 U/g、底物质量浓度8 g/100 mL、酶解时间5 h;石斑鱼肉肽酶解物具有较强的抗氧化性,清除DPPH自由基能力、ABTS+·能力、·OH能力和总还原力均随酶解物质量浓度的增加而增强;酶解物清除DPPH自由基、ABTS+·、·OH的半抑制浓度（IC50）值分别为（1.18±0.26）、（0.89±0.05） mg/mL和（0.35±0.02） mg/mL。     

大米蛋白酶解物体外清除自由基及抗脂质过氧化作用的研究

采用比色法测定了不同剂量的大米蛋白酶解物对清除超氧阴离子、羟自由基、DPPH自由基及抗脂质过氧化的作用。结果表明:(1)大米蛋白酶解物能有效地清除自由基O_2~-·、OH~-及DPPH,在50 mgpro/mL时,对活性氧自由基清除最佳;(2)大米蛋白酶解物可抑制小鼠肝组织的脂质过氧化,尤其对Fe~(2+)诱导的肝组织过氧化损伤更具有保护作用且在50 mgpro/mL时作用最强;能减少红细胞溶血的发生;(3)大米蛋白酶解物在体外试验中具有抗氧化活性,且在10～50 mgpro/mL作用最佳。     

应用酶膜反应器制备酪蛋白生物活性肽

研究酶膜反应器中超滤压力及循环流速对分离酪蛋白生物活性肽的影响.在截留相对分子质量为10 000切向流超滤酶膜反应器(EMRs)中,采用Alcalase 2.4FG在pH 8.5、温度为50℃条件下对酪蛋白进行连续水解.通过单因素实验研究了操作压力及循环流速对膜通量J、酪蛋白水解度DH、蛋白质回收率S、残余酶活AR、泄漏酶活AF及酶活损失AL等因素的影响,确定最佳的超滤工艺.研究结果表明:增大超滤压力会导致蛋白质回收率的大幅度提高,但会促使酶大量泄漏并对膜造成严重的污染;提高循环流量为140 mL/min时,酶泄漏较少,膜污染程度相对降低,并可获得较高的蛋白质回收率.     

Purification and Characterization of Nitric Oxide Inhibitory Peptides from Actinopyga lecanora Through Enzymatic Hydrolysis

Actinopyga lecanora, commonly known as sea cucumber, is a rich protein source. This marine protein source was hydrolyzed using six proteases to generate anti-inflammatory hydrolysates and bioactive peptides. Bromelain hydrolysates after 1 h hydrolysis exhibited the highest nitric oxide (NO) inhibitory activity reflecting anti-inflammatory activity. A sequence of two fractionation methods was employed to fractionate the peptides based on their hydrophobicity using a semi-preparative RP-HPLC and isoelectric points using isoelectric focusing technique. Based on these fractionation methods, basic peptides with relatively higher hydrophobicity provided higher NO-inhibitory activity than did acidic peptides. Furthermore, using Q-TOF mass spectrometry; 12 peptide sequences were successfully identified. The inhibitory effect of the purified peptides from A. lecanora on NO production by lipopolysaccharide (LPS)-stimulated RAW 264.7 cells was investigated. The three identified bioactive peptides, namely LREMLSTMCTARGA, AVGPAGPRG and VAPAWGPWPKG, exhibited the highest NO-inhibitory activity with values of 76.3, 66.6 and 69.9%, respectively. These results revealed that A. lecanora could be used as an economical protein source for the production of high-value bioactive peptides with potent anti-inflammatory activity using RAW 264.7 cell lines as model. These peptides may be useful ingredients in food and pharmaceutical applications.     

生物活性肽研究现况和进展

生物活性肽指对生物机体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物,包括内源性和外源性生物活性肽;其吸收机制优于游离氨基酸,且具有氨基酸不可比拟的生理功能和改善食品感官效应。海洋生物活性肽资源丰富,有增强免疫、抗氧化、抗高血压、抗肿瘤、抗菌和抗病毒等活性,开发利用前景广阔。