野油菜黄单胞菌基因组DNA快速提取方法和酶切

本文建立了一种野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris)基因组DNA的简便快速提取方法。用去污剂SDS和CTAB破坏细胞膜结构,使胞内核酸释放,用酚/氯仿/异戊醇去除蛋白质,经异丙醇沉淀DNA,TE溶解DNA。采用此SDS和CTAB结合的方法提取的DNA琼脂糖电泳图谱与试剂盒UNIQ-10提取的基因组DNA及D-5010A试剂盒法提取的基因组DNA图谱相同,DNA经紫外分光光度计检测OD260/OD280在1.80～1.90之间。DNA能被EcoRI、XbalI酶切消化。本方法能快速简便地提取野油菜黄单胞菌DNA,提取的DNA含量较高、纯度较好,比试剂盒更经济,也可用于酶切分析、构建文库和PCR扩增。     

黄酒麦曲微生物总DNA提取方法比较

为得到高质量提取麦曲总DNA的方法,采用SDS法、氯化苄法、CTAB法、超声波法、Soil DNA kit法、SDS高盐法及SDS-CTAB法对黄酒麦曲中总DNA的提取效果进行了比较,通过凝胶电泳、PCR、紫外分光光度计及Real-time PCR对不同方法提取产物进行分析得出7种方法中SDS-CTAB法对于提取麦曲总DNA效果最好,蛋白、多糖及小分子等污染较少,DNA提取的质量浓度达到149.6 ng/μL,相对于SDS法,细菌和真菌模板数分别达到其2.343倍和1.753倍。     

雪蛤基因组DNA提取方法的研究及条形码分子鉴定

高质量的DNA是开展分子生物学研究的基础,雪蛤基质由于含有大量脂肪、蛋白质和多糖,严重干扰其基因组DNA的提取。采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、加酶洗洁精法、十二烷基苯磺酸钠(SDS)法、SDS结合CTAB法提取雪蛤基因组DNA,通过紫外分光光度法、凝胶电泳法及CoⅠ序列扩增法比较了4种提取方法得到的DNA质量。结果显示,加酶洗洁精法、SDS法、SDS结合CTAB法均可提取到雪蛤DNA,其中以SDS结合CTAB法获得的DNA质量最佳。通过与基原物种的DNA条形码进行比对,证明3种方法均可提供符合要求的DNA,为雪蛤的分子生物学研究奠定了基础。     

农田土壤中病原真菌DNA提取方法的研究

通过比较不同的研磨、洗涤、裂解和沉淀方法,成功获得一种适于土壤真菌DNA提取的方法.结果表明,采用石英砂研磨、TENP和PBS联合洗涤、SDS高盐裂解、异丙醇沉淀等一系列步骤,所获取的土壤微生物DNA质量最佳.该试验方法可以直接从土壤中提取微生物基因组,尤其适用于土壤病原真菌的提取,所得DNA完全可以直接用于酶切和PCR扩增.该方法高效、价廉、操作简单,对改进土壤病原菌生态的研究方法具有重要价值.     

金黄色葡萄球菌基因组DNA提取方法的优化

实验分别采用CTAB法、碱法、改良型碱法、改良型SDS法等提取金黄色葡萄球菌基因组DNA,比较其提取质量,对金黄色葡萄球菌总DNA提取方法进行优化,以便高效、节约的应用于聚合酶链式反应(PCR)等分子生物学研究。结果表明:改良型SDS法稳定性好,能够有效破壁,DNA的质量高,A260/A280为1.76,介于1.75~1.85之间。提取所需时间较少,仅需40 min,有利于金黄色葡萄球菌总DNA高效、快捷的提取。     

麦芽糊精基因组DNA不同提取方法的比较

采用不同方法对麦芽糊精基因组DNA进行提取,从中选取满足麦芽糊精材料进行分子标记检测的最好的DNA提取方法。以市售麦芽糊精为材料,分别采用CTAB、SDS和异硫氰酸胍3种方法提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。光密度检测结果显示,异硫氰酸胍法的提取量和纯度均优于SDS法和CTAB法;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示异硫氰酸胍法提取的基因组DNA谱带清晰、重复性好,SDS法和CTAB法提取的基因DNA观察不到谱带;3种方法提取的麦芽糊精基因组DNA都能够满足PCR分析的需要。结果表明,3种方法均能有效地从麦芽糊精中获得DNA,然而异硫氰酸胍法优于SDS法和CTAB法。      

麦芽糊精基因组DNA不同提取方法的比较

采用不同方法对麦芽糊精基因组DNA进行提取,从中选取满足麦芽糊精材料进行分子标记检测的最好的DNA提取方法。以市售麦芽糊精为材料,分别采用CTAB、SDS和异硫氰酸胍3种方法提取基因组DNA,比较不同方法的提取效果。光密度检测结果显示,异硫氰酸胍法的提取量和纯度均优于SDS法和CTAB法;琼脂糖凝胶电泳检测结果显示异硫氰酸胍法提取的基因组DNA谱带清晰、重复性好,SDS法和CTAB法提取的基因DNA观察不到谱带;3种方法提取的麦芽糊精基因组DNA都能够满足PCR分析的需要。结果表明,3种方法均能有效地从麦芽糊精中获得DNA,然而异硫氰酸胍法优于SDS法和CTAB法。     

银耳芽孢基因组DNA五种提取方法的比较

采用酚仿法、CTAB法、蛋白酶K法、氯化苄法和盐析法五种方法分别提取银耳芽孢基因组DNA,用吸光度估计DNA的纯度和得率、RAPD(随机扩增多态DNA)技术和限制性内切酶酶切反应评价DNA的质量.结果表明:五种方法所提的DNA纯度及产率有差别,氯化苄法和蛋白酶K法的产率要高于另外三种方法,但CTAB法所提DNA纯度最高.综合而言,CTAB法是五种方法中最为适合银耳芽孢基因组DNA提取的方法.     

一种快速提取裂殖壶菌基因组DNA的方法

研究建立快速有效提取裂殖壶菌基因组DNA的方法。以裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512为试验材料,比较了十六烷基三乙基溴化铵（cetyltriethylammnonium bromide,CTAB）法、十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）法、SDS快速法和裂解法4种DNA提取方法在裂殖壶菌中的提取效果。4种方法均能从裂殖壶菌中提取到长度大约为23Kb的DNA片段,不同的提取方法获得的DNA产量存在明显差异。运用真菌18S rDNA通用引物和β-酮脂-酰基ACP合酶（beta-ketoacyl[ACP]synthase,KS）引物分别PCR扩增均能得到目的片段。结论：CTAB法提取DNA的效率更高、操作步骤快速简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。     

动物肌肉组织基因组DNA两种提取方法的比较

以猪、牛、羊、鸡等动物新鲜冷冻样品为实验材料,采用SDS法和异硫氰酸胍法提取动物肌肉组织基因组DNA,对提取的DNA进行光密度、琼脂糖凝胶电泳和PCR检测,比较了这两种方法的提取效果。结果表明:采用SDS法和异硫氰酸胍法均能从动物肌肉组织提取到完整的基因组DNA,均可满足PCR等后继分子生物学实验的要求。但是异硫氰酸胍法提取的基因组在纯度和浓度及稳定性方面优于SDS法,且操作简单,耗时短,更利于快速检测。      

一种适用于高通量测序的红曲霉基因组DNA提取方法

通过比较5种红曲霉基因组DNA的提取方法,旨在获得一种简便高效、大量提取高质量基因组DNA的优化方法。分别使用改进CTAB法、改进氯化苄法、蜗牛酶法、SDS法、试剂盒法提取红曲霉基因组DNA,结果显示:除蜗牛酶外,其余4种方法均能够提取出红曲霉基因组DNA,其中利用改进CTAB法能够快速、经济地得到大量高纯度的DNA样品,完全满足高通量测序、分子标记等一系列精密分子生物学研究的要求。     

小麦表面微生物总DNA提取方法的比较与改进

对小麦表面微生物总DNA提取方法进行了探讨，从液氮冻融，裂解剂，蛋白酶K的加入，缓冲液等方面对SDS与SDS／CTAB两种方法加以改进。结果表明，改进后SDS法提取的DNA降解现象与纯度有很大改善，量也有所增加；SDS／CTAB法改进后浓度与提取率明显增加，纯度也较高。两种方法改进后提取的DNA分子量大小都集中在23kb左右，且不经纯化可直接扩增出16SrRNA基因。     

猪肉类罐头食品中总DNA提取方法的比较

以7种猪肉类罐头食品为研究对象,比较了EE101-02 DNA提取试剂盒、SDS法、CTAB法和异硫氰酸胍法对猪肉罐头食品DNA的提取效果。以4种方法提取的总DNA为模板,根据猪线粒体基因组(mt DNA)16s r RNA基因和Cyt b基因,利用3对通用引物分别扩增片段大小为244 bp(16s r RNA)、376 bp(Cyt b)、472 bp(Cyt b)的目的片段,以评价不同方法提取的总DNA的效果。结果表明:不同提取方法提取效果差异明显——异硫氰酸胍法提取效果最好,其提取的7种罐头的总DNA均可利用16s r RNA和Cyt b通用引物分别有效扩增出244bp、376 bp目的 DNA片段,CTAB法和SDS法次之,EE101-02 DNA提取试剂盒提取效果最差。另外绝大多数猪肉类罐头样品中未能扩增获得472 bp大小的目的片段,表明猪肉类罐头产品中DNA降解严重。     

浓香型白酒黄水、窖泥中微生物总DNA提取方法比较

为高效地获得浓香型白酒窖池中窖泥和黄水中的微生物总DNA以更好地分析其过程中微生物区系,该文设计了4种不同的总DNA提取方法,分别提取了泸州某知名浓香型白酒企业黄水和窖泥的DNA,并用紫外吸收和PCR-DGGE方法比较了不同提取方法所获得总DNA的纯度及其所代表的原核微生物多样性状况。结果显示,4种提取方法均能从2种样品中提取到纯度较高的DNA;以这些DNA为模板均能扩增出细菌和古菌16S rDNA的部分片段的特异性条带;其DGGE电泳图谱均呈现出较为丰富的条带多样性,但条带存在明显差异。综合评价DNA纯度、扩增效果以及DGGE谱图,对于黄水和窖泥,“酶+SDS+液氮法”提取样品中原核微生物DNA的效果最优。     

酒醅微生物总DNA提取方法研究

高质量的微生物基因组DNA是进行微生物分子生态研究分析的基础。目前关于微生物基因组DNA的提取方法较多,根据研究对象的不同而方法各异。本实验针对浓香型白酒酒醅环境,对比了SDS高盐提取法和CTAB提取方法获得酒醅中微生物基因组DNA,对提取DNA进行PCR特异性扩增和DGGE多样性检测,获得适合不同研究目标的酒醅环境微生物基因组DNA提取方法。结果表明,(石英砂+CTAB)法可获得最大浓度总DNA;(液氮+SDS+溶菌酶)法可获得最高纯度总DNA。     

食品质量与安全专业探究性试验教学的实践——以肉制品基因组DNA提取为例

以肉制品为试验材料,对改良CTAB法、高盐法、改良SDS法三种不同基因组DNA提取方法,以及五种不同的样品前处理方法进行比较研究。通过紫外分光光度法测定A260/280、琼脂糖凝胶电泳法、实时荧光定量PCR测定Ct三种不同的方法评估所提取的DNA质量。最终确定60℃烘干处理结合高盐法提取的DNA质量最好。该实践教学中涉及资料检索、试验方案设计、试验结果分析等科研探索步骤,有助于提高学生的试验技能及综合能力,从而培养符合现代社会发展需求的创新型、应用型人才。     

适合于银柴胡饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法的研究

目的:建立适合银柴胡中药饮片的DNA条形码分析的DNA提取方法。方法:本实验利用试剂盒提取法(对照)、改良高盐低pH法、改良CTAB法、改良SDS法,对银柴胡饮片样本进行总DNA提取,并对于提取结果进行紫外检测、琼脂糖凝胶电泳检测,并选取最优结果进行PCR扩增检测。结果:三种DNA提取的改良方法中,改良CTAB法效果最好,提取的DNA纯度好、含量多。结论:改良CTAB法提取获得的银柴胡DNA,经PCR扩增结果可满足后续DNA条形码鉴定。     

莲雾果实高质量总RNA提取方法的建立

为从莲雾果实中提取高质量RNA,以“黑珍珠”莲雾果实为材料,采用试剂盒法、十二烷基磺酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）法、十六烷基三甲基溴化铵（hexadecyltrimethylammonium bromide,CTAB）法、改良CTAB法和Trizol法5 种总RNA提取方法进行比较分析。结果表明,SDS法得到的总RNA质量较差,有严重的降解和DNA污染;Trizol法提取物中有较多蛋白和多糖等残留,无条带出现。CTAB法、改良CTAB法和试剂盒法均能获得质量较好的莲雾果实总RNA,经实时荧光定量聚合酶链反应验证得到条带与目的片段大小一致,表明该RNA均能满足后续分子生物学研究。     

几种提取转基因木瓜DNA的方法比较

目的 比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果, 以提高转基因木瓜的检测准确率。方法 对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR, 同时对基因表达零件CaMV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR, 以检测提取DNA的质量。结果 分析电泳产物发现, SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求, 其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示, 3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论 比较3种提取方法及3种木瓜材料, 发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。     

几种提取转基因木瓜DNA方法的比较

目的比较CTAB法、SDS法及试剂盒法分别提取木瓜果皮、果肉、种籽DNA的效果,以提高转基因木瓜的检测准确率。方法对转基因木瓜内源基因Papain及外源基因NPTII、CP进行普通PCR,同时对基因表达零件Ca MV35S启动子和NOS终止子进行荧光PCR,以检测提取DNA的质量。结果分析电泳产物发现,SDS法提取木瓜种籽样品的DNA未能适合普通PCR检测的要求,其他方法均能满足普通PCR要求。荧光PCR结果显示,3种方法提取的DNA都满足荧光扩增要求。结论比较3种提取方法及3种木瓜材料,发现用CTAB法或SDS法以果皮为材料提取DNA质量最佳。