HPLC determination of caffeine and theophylline inPaullinia cupana Kunth (Guarana) and Cola spp. samples

Summary A reversed-phase high-performance liquid-chromatographic method for the determination of caffeine and theophylline in commercial guarana samples (drug obtained from the seeds ofPaulinia cupana Kunth,Sapindaceae of the Amazon Region) and inCola spp. samples is described and discussed.The methodology developed is simple and rapid with a minimum of samples preparation required. A comparision of five different techniques for the extraction of caffeine and theophylline is discussed. Furthermore the quantitative determination of caffeine and theophylline in five samples of Brasilian guarana, in two samples of dietetic products containing guarana, in two samples ofCola extract and in three ofCola seed powder are reported.

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HPLC-Bestimmung von Coffein und Theophyllin inPaullinia cupana- und in Cola spp.-Proben

Zusammenfassung Die Anwendung einer RP-HPLC für die mengenmässige Bestimmung von Coffein und Theophyllin in Guarana-Proben (Droge aus den Samen desPaullinia cupana-Baumgewächses Kunth, Familie:Sapindaceae) des Amazonas-Gebiet und in Cola spp.-Proben wird beschrieben. Die analytische Methode ist einfach, nicht zeitaufwendig und erfordert nur ein Mindestmaß an analytischen Operationen für die Proben-Zubereitung. Der Vergleich von 5 verschiedenen Extraktionstechniken für Coffein wird ebenfalls erörtert. Außerdem wurde der Gehalt von Coffein und Theophyllin in fünf verschiedenen brasilianischen Guarana-Proben, zwei Proben diätetischer Erzeugnisse mit Guarana-Gehalt, zwei Cola-Extraktund drei Cola-Samen-Proben bestimmt.

     

Gaschromatographische Bestimmung von Coffein in Kaffee

Zusammenlassung Es werden Methoden beschrieben zur Bestimmung von Coffein in sämtlichen handelsüblichen Kaffeeprodukten. Die quantitative Auswertung erfolgt gaschromatographisch mit Hilfe von Pyren als innerer Standard.

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Gas-chromatographic determination of caffeine in coffee

Summary Methods are described for the determination of caffeine in all types of marketed coffee products. The quantitative evaluation is carried out by gas chromatography using pyrene as an internal standard.

     

Bestimmung von 5-Methoxypsoralen in Sonnenschutzmitteln

Zusammenfassung Es wird eine Methode zur Bestimmung von 5-Methoxypsoralen in Sonnenschutzmitteln beschrieben. Nach säulenchromatographischer Reinigung wird der Extrakt mittels zweidimensionaler Dünnschichtchromatographie untersucht. Bei positiven Befunden wird das 5-Methoxypsoralen capillar-gaschromatographisch unter Verwendung von 5--Cholestan als innerem Standard quantitativ bestimmt. Die Ergebnisse werden durch Gaschromatographie-Massenspektrometrie (GC-MS) abgesichert. Die Wiederfindungsrate beträgt bei Kosmetika vom Emulsionstyp 70% und bei Sonnenölpräparaten 90%. Die Nachweisgrenze liegt je nach Probenart, zwischen 0,1 und 0,5 mg/kg.Mit dieser Methode wurden in 6 von 21 untersuchten Sonnenschutzmitteln bis zu 28 mg 5-Methoxypsoralen/kg nachgewiesen.

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Determination of 5-methoxypsoralene in suntan-cosmetics

Summary A method for the determination of 5-methoxypsoralene in suntan-cosmetics is described. After liquid chromatographic clean-up, the final extract is screened by twodimensional thin layer chromatography. For positive extracts 5-methoxypsoralene is analysed quantitatively by capillary gas chromatography, using 5--cholestane as an internal standard and flame ionization detection (FID). The results were confirmed by gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS). The recoveries for suntan-cosmetics of emulsion type were 70% and for tanning oils 90%. Detection limits of the method were 0,1 to 0,5 mg/kg, depending on the sample type.By application of this method 5-methoxypsoralene was detected in 6 of the 21 cosmetic products at levels up to 28 mg/kg.

     

Coffeinhaltige erfrischungsgetr?nke

Zusammenfassung Nach Überprüfung der z. Z. üblichen Verfahren zur Bestimmung von Coffein wird eine Methode bekanntgegeben, die es gestattet, bei Anwendung von nur 30 bis 40 ml des Erfrischungsgetränkes brauchbare Coffein-Werte zu erhalten und somit auch bei Doppelbestimmungen noch den Zuckergehalt, die Dichte, und gegebenenfalls den Phosphorsäuregehalt im Inhalt einer Flasche des Handels (200–250 ml) zu ermitteln.Zur Bestimmung der Phosphorsäure läßt sich das von O.Reichard für Wein und Most angegebene Verfahren auch auf coffeinhaltige Erfrischungsgetränke anwenden. Eine wesentliche Vereinfachung kann aber erzielt werden, wenn anstelle der umständlichen Veraschung eine Oxydation auf nassem Wege mit Kaliumpermanganat erfolgt. Die mit nur 10 ml Ausgangsmaterial durchgeführte Analyse liefert sowohl gravimetrisch, wie auch acidimetrisch gute Ergebnisse. Von 13 coffeinhaltigenErfrischungsgetränken des Handels werden Dichte ( 20°), p_H-Wert, Coffein und Phosphorsäuregehalt (letztere nur in 6 Proben enthalten) bekanntgegeben.     

A two-dimensional high-performance thin-layer chromatographic screening method for sulphonamides in animal tissues

Summary A procedure for the identification of sulphonamides in edible animal tissues by two-dimensional high-performance thin-layer chromatography is described. Sixteen sulphonamides can be detected at an absolute level of 10 ng. The absolute detection limit of the sulphonamide standards is 1 ng. After extraction of the sulphonamides with chloroform/acetone, the acidified extract is concentrated and purified using a cation-exchange solid phase extraction column. The column is treated with ammonia vapour and the sulphonamides are then eluted with methanol. Blank samples of edible animal tissues spiked with sulphonamides (frequently used in Belgium) result in very good separation.

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Identifizierung von sulfonamiden in geweben von schlachttieren mittels zweidimensionaler hochleistungsdünnschichtchromatographie

Zusammenfassung Eine Methode zur Identifizierung von Sulfonamiden in Geweben von Schlachttieren mittels zweidimensionaler Hochleistungsdünnschichtchromatographie wird beschrieben. 16 Sulfonamide können identifiziert werden, wobei die absolute Empfindlichkeitsgrenze bei 10 ng liegt. Die absolute Nachweisgrenze für die Referenzsubstanzen liegt bei 1 ng. Nach Extraktion der Sulfonamide mit Chloroform-Aceton wird die angesäuerte Extraktlösung auf einer Kationenaustausch-Extraktionssäule eingeengt und gereinigt. Die Säule wird mit Ammoniakdämpfen behandelt und die Sulfonamide werden anschliessend mit Methanol eluiert. Die den Gewebeextrakten zugefügten in Belgien häufig verwendeten Sulfonamide konnten sehr gut voneinander getrennt werden.

     

Influence of glutamic acid on the bitter taste of various compounds

Summary The bitter taste of L-valine, L-tryptophan, L-trileucine and a tryptic hydrolysate of _sl-caScin was diminished to 17–35% of its original strength by glutamic acid in a molar excess between 0.6 and 14. The bitter taste of compounds from other structural classes was not (naringin, limonin) or not seriously affected by glutamic acid. The maximal effects were decreases in bitterness to 77% (caffeine) and 71 % (quinine) of the original value, respectively. The results indicate the existence of various bitter receptors.

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Einfluß von Glutaminsäure auf den Bittergeschmack verschiedener Verbindungen

Zusammenfassung Der Bittergeschmack von L-Valin, L-Tryptophan, L-Trileucin und eines tryptischen Hydrolysats von _sl-CaScin wurde auf 17–35% des Ausgangswertes herabgesetzt durch Glutaminsäure im molaren Überschuß zwischen 0,6 und 14. Der Bittergeschmack von Verbindungen aus anderen Stoffklassen wurde durch Glutaminsäure nicht (Naringin, Limonin) oder nicht stark beeinflußt. Maximale Effekte waren eine Absenkung der Bitterkeit auf 77% (Coffein) und 71% (Chinin) des Ausgangswertes. Die Ergebnisse deuten auf das Vorkommen verschiedener Bitterrezeptoren.

     

Beitr?ge zur Biochernie der K?sereifung XV. Mitteilung Das Verhalten des Serins und Threonins im Verlaufe der Reifung

Zusammenfassung Ausgehend von Sauermilchquark, der mit übernormalen und normalen Reifungssalzmengen sowie ohne jede Salzgabe dem üblichen Reifungsprozeß von Harzer Käse unterworfen werden war, wurde für verschiedene Stadien der Reifungsführung die Stickstoff-, Serin- und Threoninbilanz aufgestellt. Käsemasse ohne Reifungssalze zeigt schon nach 7 Tagen Verluste an Serin und Threonin von 15–17%, die nach insgesamt 28 Tagen auf bis zu 20% ansteigen. Kase normaler Reifungsführung erleidet nach 7 Tagen eine Serineinbuße von rund 7%, jedoch keine merkliche Threoninminderung. Die deutlichen Threoninverluste bei der Schnellreifung (etwa 7%) lassen die letztgenannte Reifungsart als ernährungsphysiologisch nicht empfehlenswert erscheinen. Trotz der z. T. recht beträchtlichen Aminosäureverluste treten freies Serin und Threonin nur in äußerst geringen Mengen auf. Bebriitungsversuche mit gewaschenen Käsesuspensionen unter Zusatz von Pyridoxalphosphat, Pantothensäure, Folsäure und Biotin zeigten, daß zugegebene Oxyaminosäuren in großem Ausmaß abgebaut werden, wobei alle genannten Cofaktoren wesentliche Aktivitätssteigerungen der abbauenden Enzyme bewirken. Papierchromatographisch konnten -Aminobuttersäure und -Alanin als Abbauprodukte von Threonin und Serin nachgewiesen werden. Die Bedeutung der Untersuchungsbefunde für die Biochemie der Käsereifung wird erörtert.Die Arbeit wurde durch ERP-Mittel gefördert, deren Bereitstellung wir den Senatoren für Kreditwesen und für Volksbildung in Berlin verdanken.     

Zur Analytik antimikrobiell wirksamer Substanzen in nicht-emulsionsartigen kosmetischen Mitteln

Zusammenfassung Die Abtrennung und Bestimmung von 16 antimikrobiell wirksamen Substanzen aus tensidhaltigen nicht-emulsionsartigen Kosmetika wie Shampoos, Badepräparaten und ähnlichen Produkten wird beschrieben. Säulen-chromatographisch können alle Substanzen an Kieselgel 40 mit n-Hexan/Aceton (7+3 v/v) abgetrennt werden. Ein anderes Abtrennverfahren beruht auf der Extraktion des nach Gefriertrocknung erhaltenen Trocknungsrückstandes mit Aceton und anschließender dünnschicht-chromatographischer Reinigung an Kieselgel 60/Aceton. Zu beachten ist, daß bestimmte antimikrobiell wirksame Substanzen bei der Gefriertrocknung flüchtig sind und somit bei dieser Methode nicht erfaßt werden können. Die Identifizierung der abgetrennten antimikrobiellen Substanzen erfolgt mittels geeigneter Methoden wie DC, GC, GC/MS bzw. HPLC. Die quantitative Bestimmung nach entsprechender Abtrennung wird am Beispiel von Triclosan (Irgasan DP 300) und 5-Brom5-nitro-1,3-dioxan (Bronidox) beschrieben.

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Analysis of antimicrobial agents in non-emulsified cosmetics containing surfactants

Summary The separation and determination of 16 antimicrobial agents from non-emulsified cosmetics containing surfactants such as shampoos, bath preparations and similar products is described. All substances could be separated by column chromatography on silica gel 40 hexane/acetone (7+3 v/v). Another procedure for separation is the extraction of the residue obtained by freeze drying with acetone and subsequent thinlayer chromatographic clean up on silica gel 60/acetone. This method does not have general applicability because some antimicrobial agents are volatile during freeze drying. The identification of the isolated antimicrobials is performed by analytical methods such as TLC, GC, GC/MS resp. HPLC. As an example the quantitative determination of Triclosan (Irgasan DP 300) and 5-bromo-5-nitro-1,3-dioxane (Bronidox) after separation is described.

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Vortrag anläßlich des Deutschen Lebensmittelchemikertages 1982 in Braunschweig     

Eisenbestimmung im Wein

Zusammenfassung Zur Eisenbestimmung in Rot- und Weißweinen wurde eine Ionenaustauschermethode entwickelt, bei der der mit Salzsäure angesäuerte Wein durch eine mit Wasserstoffionen beladene Kationenaustauschersäule gegeben wird. Wenn die Konzentration an Salzsäure im Wein auf 0,3–0,5 mol/l gebracht wird, werden die im Wein vorhandenen Komplexverbindungen abgebaut und das Eisen sorbiert quantitativ an das Harz. Aus der Säule kann das Eisen mit Leichtigkeit mittels 3 n-Salzsäure wieder verdrängt werden.Das Eiseneluat wird nach Pufferung mit Natriumacetat auf p_H 4 in einer Alkohol-Wasserlösung mittels 4,7-Diphenyl-1,10-phenantrolin spektrophotometrisch analysiert. Bei einer Wellenlänge des Absorptionsmaximums von 531 m wurde mit diesem Reagens im genannten Lösungsmittel als molarer Extinktionskoeffizient des Eisens der Wert 21700 gemessen.Beim Naßverbrennungsverfahren werden die organischen Verbindungen des Weines mit konzentrierter Schwefelsäure zerstört, wobei zur Beschleunigung der Oxydation Wasserstoffperoxyd zugesetzt wird. Zur spektrophotometrischen Bestimmung wird der Eisen(II)-Komplex des 4,7-Diphenyl-1,10-phenantrolins mit Chloroform extrahiert. In der Chloroform-Alkohollösung wurde mit dem genannten Reagens als molarer Extinktionskoeffizient des Eisens der Wert 22200 gemessen, wobei das Absorptionsmaximum bei der Wellenlänge 531 m lag.Vergleichende Untersuchungen zwischen der Ionenaustauscher- und der Naßverbrennungsmethode wurden sowohl mit Rot- als auch mit Weißweinen durchgeführt. Die Eisengehalte der Proben schwankten zwischen 2 und 12 mg/l Fe. Die statistische Auswertung der Analysenresultate zeigte, daß beide Methoden von ein und demselben Wein im Mittel die gleichen Eisenwerte ergaben, so daß die Methoden insofern einander entsprechen. Wenn die beiden Verfahren aber nach der Größe ihrer jeweiligen Grundstreuung beurteilt werden, stellt man fest, daß die Grundstreuung der Ionenaustauschermethode wesentlich kleiner ist als diejenige des Naß-verbrennungsverfahrens, d. h. das Ionenaustauscherverfahren gibt bei einer mittleren Abweichung der Einzelbestimmung von 2,9% (3s) gleichmäßigere Werte, während entsprechend für das Naßverbrennungsverfahren eine Schwankungsbreite von 11 % erhalten wurde. Ein weiterer bemerkenswerter Vorteil der ersten Methode ist, daß die Konzentrierung für die spektrophotometrische Messung einfacher und ohne störende Nebenreaktionen durchgeführt werden kann, auch bei kleinen Eisenmengen. Infolgedessen kann die eigentliche spektrophotometrische Messung immer in der Nähe des optimalen Konzentrationsgebietes durchgeführt werden und die Extinktionen mit den bekannten Eisenlösungen verglichen werden, wodurch die Meßgenauigkeit zunimmt und die Resultate zuverlässiger werden. Aus dem gleichen Grund stellt auch das Ionenaustauscherverfahren keine übermäßigen Anforderungen in bezug auf die Eisenverunreinigungen der verwendeten Reagentien, was besonders beim routinemäßigen Arbeiten von nicht zu unterschätzender Wichtigkeit ist.     

An automated colorimetric method for the determination of free nicotinic ccid in minced meat

Summary An automated method for the determination of free nicotinic acid in minced meat with the Technicon AutoAnalyzer is described. The method is based on the extraction of free nicotinic acid into water and a subsequent reaction with cyanogen chloride after dialysation, after which the absorbante of the reaction product is measured at 470 nm. The reaction takes place in an aceton/water medium of such a water/aceton ratio that, at the given wavelength, an amount of nicotinamide equal to nicotinic acid gives only 5-6% of the absorbante caused by nicotinic acid. The recovery is 96.7-103.3% at a range of 6-60 mg nicotinic acid added to 100 g of meat with a mean recovery of 100.5%. The lowest detection limit is 0.1 g/ml. The coefficient of variation is 1.2% at 5 g/ml.

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Zusammenfassung Es wird eine automatische Methode zur Bestimmung freier Nicotinsäure im Hackfleisch mit dem Technicon AutoAnalyzer beschrieben. Nach Extraktion der freien Nicotinsäure mit Wasser, wird dialysiert und nach Reaktion mit Chlorcyan erfolgt die Colorimetrische Messung bei 470 nm. Die Reaktion erfolgt in einem Aceton/Wasser-Milieu einer derartigen Zusammensetzung, daß bei der gegebenen Wellenlänge Nicotinamid nur 5-6% der Absorption gibt wie eine gleiche Menge Nicotinsäure. Die Zurückgewinnung ist bei 6–60 mg zugegebener Nicotinsäure pro 100 g Fleisch 96,7–103,3% mit einem Mittelwert von 100,5%. Die Meßgrenze ist 0,1 g/ml. Die relative Standardabweichung wurde für 5 g/ml zu 1,2% bestimmt.

     

Aminos?uren des Branntweinessigs II. Mitteilung Quantitative Bestimmung der Aminos?uren; Unterscheidung von G?rungs- und Essenzessig

Zusammenfassung In der II. Mitteilung werden die quantitative Bestimmung der Aminosäuren im Branntweinessig und die Unterscheidung von Branntwein- und Essenzessig behandelt. Die sehr geringe Gesamtaminosäuremenge wurde nach der Isolierung mit dem in Mitteilung I geschilderten Ionenaustauscher-Verfahren colorimetrisch als Kupferkomplex bestimmt. Der Gesamtaminosäuregehalt verschiedener Branntweinessige lag zwischen 3,1 und 11,4 mg/l. Er steigt mit der Lagerzeit in Gegenwart von Bakterien und ist von der Herstellung abhängig.Die einzelnen Aminosäuren wurden nach papierchromatographischer Trennung an Hand von Vergleichschromatogrammen halbquantitativ bestimmt. Im untersuchten Branntweinessig sind am reichlichsten vorhanden: Prolin, Alanin, Glykokoll, Asparaginsäure und Glutaminsäure. Auch Phenylalanin, Valin, Leucin, Isoleucin, Serin, Lysin, Arginin und Threonin liegen in größerer Menge vor, während deutlich weniger Tyrosin und Histidin vorkommt.-Aminobuttersäure, Methionin und Cystin sind nur sehr wenig vorhanden.Die Mengenverhältnisse der einzelnen Aminosäuren in Submers-Essigbakterien entsprechen weitgehend denen im Branntweinessig. Somit dürften die in ihm enthaltenen Aminosäuren vorwiegend Autolyseprodukte der Bakterien sein.Submers-Essig- und Orléans-Bakterien unterscheiden sich in der quantitativen Aminosäurezusammensetzung nur geringfügig. Daraus ergibt sich, daß bei Essigen, die unter Verwendung verschiedener Bakterienstämme, sonst aber unter gleichen Bedingungen hergestellt wurden, keine nennenswerten Unterschiede hinsichtlich ihrer Aminosäurezusammensetzung auftreten dürften.Zuletzt wird ein Verfahren angegeben, mit dem an Hand des Aminosäuregehalts Gärungsessig von Essenzessig unterschieden werden kann. Die Aminosäuren werden aus dem Abdampfrückstand mit salzsäurehaltigem Aceton von störenden Substanzen abgetrennt und sowohl die Gesamt-Aminosäuren, wie speziell Prolin im Rundfilterchromatogramm nachgewiesen.