藏灵菇中乳酸菌的鉴定及细菌素生物特性研究

从藏灵菇中筛选出一株具有抑菌活性的菌株,采用生理生化鉴定、16S rDNA序列分析确定菌种属性,采用硫酸铵沉淀法对该菌所产生的细菌素进行粗提取并对其抑菌活性和稳定性进行研究。结果显示,该菌为植物乳杆菌,除去有机酸和过氧化氢的影响,该菌产生的细菌素具有较好的抑菌活性。该菌所产的细菌素热稳定性较好,在100℃处理30 min抑菌活性降至54%,且对酸碱不敏感,在p H3~9的范围内都具有抑菌活性,在p H为3.82时抑菌活性最佳,对胃蛋白酶、α-凝乳酶有较强的耐受性,对蛋白酶K较敏感,在37℃下处理2 h抑菌活性为处理前活性的47.36%。对植物乳杆菌产细菌素的分析证明该菌产的细菌素在食品加工防腐中具有潜在的使用价值。     

不同植物乳杆菌发酵液抑菌活性及其主要有机酸组成比较（英文）

对分离自云南传统发酵食品的18株植物乳杆菌代谢产物的主要有机酸成分及对病原菌抑菌活性进行分析。采用Spot-on-lawn及琼脂扩散法研究不同植物乳杆菌代谢产物抑菌活性;通过高效液相色谱法分析主要有机酸的种类和产量;选取其中3株植物乳杆菌对其进行包括生长曲线、pH值、抑菌活性在内的动态监测。结果表明,抑菌活性取决于不同的植物乳杆菌菌株、病原菌及发酵碳源。当大肠杆菌O157:H7作为病原菌、葡萄糖作为碳源时,植物乳杆菌YmL-4-5具有最高的抑菌活性;当沙门氏菌ATCC 6538作为病原菌、果糖作为碳源时,植物乳杆菌S5抑菌作用最强。数据证明植物乳杆菌发酵液的抑菌活性受上清液低pH值的影响,且主要抑菌物质为有机酸。有机酸的主要成分是乳酸(930.9～3 008.7μg/mL),其次为苹果酸和乙酸。其中乳酸和乙酸的产量与其对大肠杆菌O157:H7的抑菌活性呈正相关(r分别为0.474、0.488,P0.05)。本研究为研发新的生物防腐剂提供了理论依据。     

1株产细菌素植物乳杆菌的筛选及其细菌素抑菌性质研究

从广西巴马地区取样的米粉中共分离出31株乳酸菌,以单核细胞增生李斯特菌为指示菌,采用牛津杯平板扩散法检测抑菌物质,筛选得到1株产细菌素的乳酸菌M23。通过微生物形态学与16S rRNA基因序列分析,鉴定该菌株为植物乳杆菌。植物乳杆菌M23代谢产生的乳酸菌细菌素在p H 2.0~10.0范围内具有良好的抑菌活性,121℃处理15 min的条件下依然具有抑菌活性,表明其具有良好的酸碱稳定性和热稳定性。发酵试验表明,该乳酸菌素的最佳收获时间为乳酸菌培养14 h。抑菌谱试验表明,该乳酸菌素能够有效抑制部分食源性革兰氏阳性、阴性致病菌。     

传统浆水中乳酸菌的筛选及抑菌性能分析

以甘肃传统发酵浆水为材料,采用平板划线法分离纯化其中的乳酸菌,并对纯化后的菌株进行形态学观察及生物学特性分析,筛选出其中具有抑菌活性的菌株,分别研究它们的抑菌能力以及抑菌物质的成分。结果表明:6株乳酸杆菌中,菌株SJ-1、SJ-2的发酵代谢产物对指示菌具有较高的抑菌活性。排除酸抑制作用和过氧化氢抑制作用后代谢产物仍具抑菌活性,且显示出良好的热稳定性。使用不同的蛋白酶对代谢产物进行处理后,其抑菌能力产生了程度不等的降低,表明抑菌物质具蛋白酶敏感性,因此判断抑菌物质中含有蛋白类抑菌成分。经鉴定发现菌株SJ-1为发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum),SJ-2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)。     

枯草芽孢杆菌SH-1发酵条件优化及抑菌活性物质稳定性研究

为开发应用于生物防治的生物农药,应用于食品防腐的新型高效的食品防腐剂,对一株能够抑制多种食品腐败菌和植物致病菌生长的芽孢杆菌菌株进行生理生化和16S分子生物学鉴定,初步确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为SH-1。用蜡样芽孢作为指示菌对SH-1菌株发酵条件进行优化,并研究活性物质稳定性。结果表明,SH-1菌株发酵条件在接种量2%、初始p H7.0、发酵时间为24 h、转速为180 r/min、温度37℃时抑菌活性最强,抑菌直径高达22 mm;SH-1菌株发酵液在p H(3.0~9.0)之间抑菌活性较稳定,p H9.0以上抑菌活性逐渐降低,p H达到11后活性丧失;发酵液经100℃内处理具有较高活性,121℃活性丧失;经不同时间段紫外线照射后,其发酵液抑菌活性缓慢降低并趋于稳定。     

不同植物乳杆菌发酵液抑菌活性及其主要有机酸组成比较

对分离自云南传统发酵食品的18 株植物乳杆菌代谢产物的主要有机酸成分及对病原菌抑菌活性进行分析。采用Spot-on-lawn及琼脂扩散法研究不同植物乳杆菌代谢产物抑菌活性;通过高效液相色谱法分析主要有机酸的种类和产量;选取其中3 株植物乳杆菌对其进行包括生长曲线、pH值、抑菌活性在内的动态监测。结果表明,抑菌活性取决于不同的植物乳杆菌菌株、病原菌及发酵碳源。当大肠杆菌O157:H7作为病原菌、葡萄糖作为碳源时,植物乳杆菌YmL-4-5具有最高的抑菌活性;当沙门氏菌ATCC 6538作为病原菌、果糖作为碳源时,植物乳杆菌S5抑菌作用最强。数据证明植物乳杆菌发酵液的抑菌活性受上清液低pH值的影响,且主要抑菌物质为有机酸。有机酸的主要成分是乳酸（930.9～3 008.7 μg/mL）,其次为苹果酸和乙酸。其中乳酸和乙酸的产量与其对大肠杆菌O157:H7的抑菌活性呈正相关（r分别为0.474、0.488,P＜0.05）。本研究为研发新的生物防腐剂提供了理论依据。     

具有抑菌作用乳酸菌的筛选及其抑菌物质特性的研究

从内蒙古地区传统谷物发酵食品——酸粥中分离并鉴定的13株乳酸杆菌中筛选具有抑菌活性的菌株,并对其抑菌能力及抑菌物质的特性进行研究。结果表明,菌株NSZL-2(鼠李糖乳杆菌L.rhamnose)和NSZL-12(植物乳杆菌L.plantarum)对指示菌具有较高的抑菌活性,且抑菌能力主要来自菌体的发酵代谢产物。排除酸和过氧化氢的干扰后代谢产物仍具有抑菌活性,且抑菌物质对热具有很高的稳定性。代谢产物经蛋白酶K、胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、过氧化氢酶、溶菌酶处理后,抑菌能力均有不同程度的降低,说明抑菌物质对蛋白酶敏感,故判定抑菌物质中有蛋白质类细菌素。     

传统发酵食品中具有抑菌活性乳酸菌筛选及其代谢产物稳定性分析

本文以传统发酵食品中筛选的39株乳酸菌为研究对象,采用牛津杯法筛选具有优良抑菌特性的乳酸菌,分别对菌株的生长曲线、产酸能力、耐胆盐、耐渗透压、耐酸碱、抑菌谱进行检测,并研究代谢产物的稳定性。结果表明：筛选出三株具有良好抑菌特性的菌株,分别为植物乳杆菌HS011、德氏乳杆菌HS023、嗜热链球菌HS033。三株菌经培养20 h后,发酵液pH分别由5.44、5.44、5.42下降到3.55、3.54、3.57;三株乳酸菌能耐受0.1%以下的胆盐和14%的NaCl溶液;在pH 5.0~8.0时生长情况良好;且具有较为广泛的抑菌谱,对大肠杆菌O157:H7、蜡样芽孢杆菌、单增李斯特氏菌、阪崎肠杆菌等均有较好抑制作用,但对霉菌和酵母无作用;代谢产物经温度（20~121 ℃）、pH（2.0~8.0）处理后仍有较好抑菌活性;经木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶、蛋白酶K、过氧化氢酶处理后菌株代谢产物抑菌活性未有明显变化。表明从传统发酵食品中筛选的乳酸菌具有良好益生特性,其代谢产物稳定性好,可作为发酵产品中的生产菌株,可进一步开发利用。     

植物乳杆菌SJ35的抑菌特性及复合保鲜剂配制

以藤黄微球菌、铜绿假单胞菌为指示菌,采用牛津杯双层琼脂扩散法测定植物乳杆菌SJ35代谢产物的抑菌特性,应用单因素试验选取最优的菌株发酵条件,选取亚氯酸钠与代谢产物复配制成复合保鲜剂并测定其抑菌效果。结果表明:菌株SJ35代谢产物的抑菌活性较强,热稳定性好,在酸性条件下稳定,对蛋白酶敏感,且具有细菌广谱抑菌性;最优发酵条件为34℃静置培养36 h,初始p H为6.0,其对藤黄微球菌、铜绿假单胞菌的抑菌圈直径达到25.68,19.96 mm;将80%的SJ35代谢产物与600 mg/L亚氯酸钠复配制成复合保鲜剂,不仅能增强对细菌的抑制作用,而且对霉菌也有一定的抑制作用。     

产肠球菌素乳酸菌的筛选及其生物学性质研究

从自制传统发酵酸菜中分离出34株乳酸菌,通过滤纸片法,筛选出一株对大肠杆菌有明显抑制作用的菌株屎肠球菌BC-3。其代谢产物经过排酸、排除过氧化氢后仍有抑菌活性,经过蛋白酶处理后,活性丧失,表明其产生的抑菌活性物质为细菌素。进一步对屎肠球菌BC-3产生细菌素的条件及细菌素粗提物性质进行研究,表明在37℃下,培养20h,抑菌活性最高,抑菌圈直径达16.34mm。对其发酵粗提液生物学性质进行分析,结果为:肠球菌素E3具有很高的耐热性,p H2.0¹0.0都具有很好的抑菌活性,金属离子、有机溶剂处理后抑菌活性几乎不受影响。     

抗烟草赤星病芽孢杆菌B102菌株的筛选及抑菌作用

从山东烟田烟草根际和根围土壤中分离到157株细菌,筛选出对烟草赤星病菌Alternaria alternata有明显抑菌作用的细菌菌株7个.其中B102菌株对烟草赤星病菌抑菌作用明显,抑菌带宽度达13.0 mm.采用异步培养、对峙培养、含细菌培养等方法,测定发酵滤液及代谢产物对病原菌的作用机制.结果表明,B102菌株对病原菌的抑制作用主要依赖于其产生的抗高温的代谢产物,可抑制病菌菌丝生长、孢子萌发、菌丝细胞破裂、内含物外泄,致使病菌丧失侵染能力.B102菌株代谢产物经高温及不同的pH值条件处理后仍表现出较高的抑菌活性,表明B102菌株对外界环境条件的稳定性强.     

瑞士乳杆菌产生的细菌素的抑菌活性研究

主要通过研究对从建昌板鸭发酵过程中分离瑞士乳杆菌产生细菌素的抑菌活性,考察不同温度,不同p H,不同种类酶作用对细菌素抑菌活性的影响。结果证明:蛋白酶能一定程度抑制细菌素的抑菌活性,且胰蛋白酶的抑制程度最强;该细菌素的抑菌活性对温度的耐受力强,即使在100℃处理后仍具有抑菌活性,在-20℃条件下保存时抑菌活性最强;该细菌素p H在1.5~4.0时具有抑菌活性,在p H为1.5时抑菌活性最强。     

一株芒果炭疽病拮抗菌抑菌活性的研究及其鉴定

从芒果表皮分离得到29株内生细菌,对峙培养法发现菌株B2-1对芒果炭疽病菌丝的生长具有较强的抑制作用。通过离体实验和活体实验对拮抗菌株B2-1抑菌活性进行了研究,离体实验结果表明,B2-1的发酵滤液、挥发性代谢产物以及非挥发性代谢产物都对芒果炭疽病菌丝的生长有很强的抑制作用,其中B2-1发酵液的非挥发性代谢产物对芒果炭疽病菌丝生长的抑制率达到了99.86%,抑菌效果显著。活体实验结果表明,B2-1的菌悬液和发酵液与对照相比显著降低了芒果炭疽病的发病率,提高了芒果的可食用果率。进一步对菌株B2-1进行鉴定,综合形态学观察和生理生化特征检测以及16S rDNA序列分析,B2-1菌株被鉴定为枯草芽孢杆菌。     

内生真菌绿色生态法合成纳米银的研究

从石斛中分离得到一株内生真菌DO-1,该菌株经鉴定为禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum),其菌体在去离子水中浸泡后分泌的代谢产物与硝酸银作用后,能还原银离子产生具有抗菌作用的纳米银粒子。以440~450 nm范围内纳米银的特征性等离子吸收峰以及产物抑菌活性为指标,研究光照条件、温度以及p H条件对制备纳米银粒子的影响。黑暗条件和适当高温有助于纳米银粒子的生成及其抑菌活性的增强。随着p H的增加,纳米银特征性吸收峰不断增强,但抑菌活性呈现先增强再减弱的趋势,p H 7~8范围内得到的纳米银粒子的抑菌活性较高。调节F.graminearum DO-1菌体浸泡液的p H为7,与终浓度为1 m M的Ag NO3溶液于80℃、黑暗条件下反应3 h,获得纳米银粒子,透射电镜分析显示制备的纳米银粒子为球形,直径范围2~50 nm。应用该内生真菌代谢产物制备具有抑菌功能的纳米银粒子,方法简单,条件温和,复合绿色生态的发展趋势。     

含抗菌肽基因的天然质粒在枯草杆菌中的表达

侧孢短芽孢杆菌抗菌肽具有高效、广谱、稳定的抗菌活性,该抗菌活性与其内源质粒密切相关。为研究侧孢短芽孢杆菌含抗菌肽基因质粒异源表达的可行性,本研究中将侧孢短芽孢杆菌S62~-9的天然质粒电转枯草芽孢杆菌Wb800受体细胞,筛选阳性转化子并对其表达产物性质进行研究。得到了产生抗菌活性产物菌株Z4,发酵6 h后开始产生抗菌物质,12~20 h产量达到最大,达620.96 AU/m L。Tricine~-十二烷基硫酸钠~-聚丙烯酰胺凝胶电泳看到S62~-9质粒在枯草芽孢杆菌中得到了成功的表达,反相高效液相色谱分析Z4表达产物含有与侧孢短芽孢杆菌抗菌肽相同物质。该物质抑菌谱广,稳定性好:对于G~+、G~-和真菌均有抑菌活性,而且对于G~+菌株的抑菌效果优于G~-菌株和真菌,121℃处理20 min后的效价保留率约为90%,100℃处理60 min后仍有81%的活性保留;p H 2~12的范围内效价保留率基本不发生变化;对蛋白酶较为敏感,胰蛋白酶和蛋白酶K处理后抗菌肽的效价保留率为60%左右,其他3种蛋白酶处理后也有一定程度的降低。本研究获得了抗菌肽的异源表达菌株Z4,为进一步工业生产抗菌肽提供支持,而且为该抗菌肽遗传基因定位于质粒上提供了证明。     

辽西传统发酵食品中抗单增李斯特菌乳酸菌的筛选与鉴定

目的:从传统辽西发酵食品中筛选对单增李斯特菌具有良好拮抗作用的乳酸菌菌株。方法:采用双层琼脂扩散法筛选乳酸菌优良菌株。采用酸性实验、热处理实验、蛋白酶敏感性实验分析拮抗特性,利用生长曲线分析拮抗物质形成过程,扫描电镜分析细胞结构完整性。通过生理生化实验和16S rRNA序列进行菌株鉴定。结果:从13株乳酸菌中筛选出1株抗单增李斯特菌活性较强的菌株DL3,抗菌物质存在于无细胞上清液中。经胃蛋白酶处理后抑菌活性丧失了27.50%,胰蛋白酶和木瓜蛋白酶可使抑菌活性完全丧失,经121℃处理15 min后,抑菌活性仍保留96.88%,在p H2.5~6.5时具有抑菌活性,表明菌株DL3产生的抑菌物质可能为细菌素。添加菌株DL3无细胞上清液可使单增李斯特菌的生长曲线延迟期和稳定期延长4 h,显著地缩短了其生长期。扫描电镜结果表明经菌株DL3无细胞上清液处理的单增李斯特菌菌体变小且边缘模糊不清,其中一端细胞原生质发生泄漏。经鉴定菌株DL3为植物乳杆菌。结论:获得1株对单增李斯特菌有较强拮抗活性的植物乳杆菌DL3,该菌的拮抗活性物质可能为细菌素,可作为食品防腐剂潜在的应用菌株。     

耐盐芽孢杆菌B11抗菌活性物质的分离纯化及其特征分析

对耐盐芽孢杆菌B11产生的抗菌活性物质进行了分离纯化及特性研究。从盐碱土壤中分离得到一株对金黄色葡萄球菌具有强拮抗活性的耐盐芽孢杆菌B11,其发酵液中抗菌活性物质具有良好的热稳定性、p H稳定性和紫外光照稳定性,100℃加热1 h,抑菌活性仅下降11.0%,且在p H为3和11环境下,抑菌活性也仅下降11.4%和10.9%,对酸碱环境具有耐受性。发酵液经预处理、离心、阳离子阴离子交换层析,经正丁醇抽提和半制备高效液相色谱得到活性物质A1和A2,其中A1分子量为1423.8 u且带有多电荷,氨基酸分析仪鉴定A1为非核糖体多肽(NRPS),对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为8.0μg/m L;A2活性很弱且含量较低,初步鉴定为小分子抗菌物质,分子量为373 u。耐盐芽孢杆菌B11的抗菌代谢产物应用于食品防腐具有很大的潜力。     

乌拉尔甘草内生真菌的分离及其抑菌活性研究

研究乌拉尔甘草内生真菌及其次生代谢产物的抑菌活性,旨在获得有良好抑菌活性的菌株,寻找新型抗菌物质。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金色葡萄球菌、短小芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、单增李斯特菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、酿脓链球菌、屎肠球菌、粪肠球菌和白假丝酵母为试验菌株,用菌饼法及纸片法对分离的真菌及其次生代谢产物进行抑菌试验。从乌拉尔甘草中分离到46株内生真菌,其中34株内生真菌对指示菌表现出不同的抑菌活性,占总分离菌株的74%;20株内生真菌的发酵液对指示菌株也有一定的抑制作用,占总分离菌株的43%。乌拉尔甘草的内生真菌及其次生代谢产物中存在着丰富的抑菌天然活性物质,这可为新型抗菌物质提供资源。     

乳杆菌代谢产生抑菌物质的特性研究

从内蒙古传统发酵食品中筛选出具有抑酵母作用的乳杆菌,对其特性进行研究。结果表明,ALAC-3和ALAC-4菌株经排酸后,对酵母仍有抑菌效果。活性物质对热有很好的稳定性,并且对紫外线辐射不敏感。Ca2+、Mn2+对ALAC-3代谢产物的抑菌作用起促进作用,而K+、Na+、Mg2+对其代谢产物的抑菌作用起抑制作用。K+,Ca2+,Na+,Mg2+,Mn2+对ALAC-4代谢产物的抑菌作用均起抑制作用。经过氧化氢酶处理后,仍有抑菌效果。经木瓜蛋白酶、蛋白酶K、胰蛋白酶、胃蛋白酶处理后,抑菌活性均有不同程度降低,说明抑菌物质对蛋白酶敏感,故判定抑菌物质中有蛋白类物质。     

具有抑菌活性植物乳杆菌的筛选及抑菌物质特性的研究

该研究通过牛津杯双层平板法,从分离自四川泡菜的114株植物乳杆菌中筛选对大肠杆菌O157:H7具有较强拮抗活性的菌株,并对其所产抑菌物质的特性进行了初步的研究。结果表明：114株植物乳杆菌的上清液均可抑制大肠杆菌,其中16株菌的上清液经排酸后仍有抑菌作用,并且抑菌作用不受过氧化氢酶影响,经蛋白酶处理后大幅降低甚至消失;在进一步筛选中发现植物乳杆菌IMAU80122所产抑菌物质具有耐酸（pH 3）、耐弱碱（pH 8）的特性,在80℃具有一定的稳定性,对不同的表面活性剂、有机溶剂、金属离子、盐浓度、紫外照射时间都具有良好的耐受性;对G^-菌株的抑菌活性强于G⁺菌株,但对供试的乳酸菌没有作用。综上所述,植物乳杆菌IMAU80122所产抑菌物质具有蛋白性质,不仅抑菌活性强,而且具有良好的稳定性和广谱抑菌效果,在食品加工和医药行业中具有一定的开发应用潜能。