藜麦蛋白肽的酶解制备及体外降血脂与降尿酸活性研究

为研究藜麦蛋白降血脂肽的最佳酶解工艺条件和降尿酸活性,本研究以藜麦为原料提取蛋白,采用胰脂肪酶抑制率为活性指标,通过单因素实验和响应面分析法优化降血脂肽的制备工艺,并对藜麦蛋白肽的胰脂肪酶抑制活性、牛磺胆酸钠结合活性、胆固醇酯酶抑制活性、黄嘌呤氧化酶抑制活性和氨基酸组成进行分析表征。结果表明,藜麦降血脂肽的最优酶解条件为pH1.6、酶解温度42.9℃、底物浓度3.03%、酶解时间1 h和酶底比0.2%,所得酶解液的胰脂肪酶抑制率理论值为90.43%,实际值为90.93%±0.10%。该条件下制备的最优酶解物表现出优异的体外降血脂效果,其胰脂肪酶抑制率和胆固醇酯酶抑制率的IC₅₀分别为7.49μg/mL和4.73 mg/mL,牛磺胆酸钠结合率的EC₅₀为0.53 mg/mL。此外,最优酶解物显示出良好的黄嘌呤氧化酶抑制效果(IC₅₀=5.97 mg/mL),表明其具有体外降尿酸的作用。氨基酸分析表明,藜麦蛋白肽的必需氨基酸含量丰富(34.23%),并且疏水性氨基酸和酸性氨基酸百分含量分别为34.11%和31.66%。藜麦蛋...     

英红九号茶蛋白降尿酸肽的酶解制备及不同分子量组分的活性对比

以英红九号红茶渣为原料,通过碱提酸沉提取茶叶蛋白,以黄嘌呤氧化酶抑制率为指标,采用单因素和响应面实验优化酶解制备降尿酸肽,对其氨基酸组成进行分析,并对最优酶解物进行超滤分离和活性评价。结果表明,在底物浓度2%（m/V）、加酶量0.3%（m/V）、温度39 ℃、pH值7.5和酶解时间3.4 h条件下,得到的降尿酸肽的黄嘌呤氧化酶抑制率为85.42%。氨基酸分析表明,降尿酸肽中必需氨基酸含量丰富（38.49%）,高比例的疏水性氨基酸（48.00%）和碱性氨基酸（13.67%）对黄嘌呤氧化酶抑制活性有重要作用。酶解物经过超滤分离后,与原酶解物的活性（IC50 0.72 mg/mL）比较,<3 ku组分的黄嘌呤氧化酶抑制活性显著提升（IC50 0.41 mg/mL）。该研究可为茶叶蛋白的高值化利用提供参考,为茶叶源新型降尿酸健康食品的开发提供了理论依据。     

筛选降尿酸肽的体外测定方法的建立与优化

由于紫外分光光度法、NBT/PMS显色法、荧光分析法,MTS/PMS还原法等黄嘌呤氧化酶(XO)抑制活性检测方法对多肽检测的局限性,本文建立了适用于筛选降尿酸多肽类物质的体外测定方法,采用双酶偶联法联合高效液相色谱法(HPLC法)测定多肽类物质的体外黄嘌呤氧化酶抑制活性。以双酶偶联法优化样品测定的反应体系,得到最适反应条件:黄嘌呤浓度0.22 mmol/L,酶浓度0.52 u/m L,缓冲液pH 8.0,反应温度30℃,反应时间20 min;优化尿酸分离的液相条件,确定最适检测条件:95%15 mmol/L NH4H2PO4+5%甲醇,pH 6.5,流速1 m L/min,柱温25℃,检测波长290 nm。实验表明,最适条件下双酶偶联法和HPLC法检测精密度良好,准确度达95%以上。双酶偶联法联合HPLC法可高效、准确进行多肽降尿酸活性检测。双酶偶联法联合HPLC法证明还原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)具有黄嘌呤氧化酶抑制活性,可作为降尿酸肽。     

基于黄嘌呤氧化酶活性抑制和斑马鱼高尿酸血症模型的降尿酸功效食药材筛选

结合体外（黄嘌呤氧化酶活性抑制）和体内（斑马鱼高尿酸血症模型）方法,对15种食药材乙醇粗提物的降尿酸活性进行筛选。体外实验设置空白组、酶反应组、抑制剂组、对照组,酶标仪295 nm测定吸光度,计算15种食药材对黄嘌呤氧化酶（XOD）活性的抑制率;体内实验随机选取受精后第5 d（5dpf）的斑马鱼,设置空白组、模型组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS）、食药材给药组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS+不同浓度提取物）、阳性对照组（200 μmol/L PO+10 μmol/L XSS+APL 2 mmol/L）,水溶浸泡,28.5 ℃培养箱中孵育24 h,测定尿酸含量,对具有良好XOD抑制活性的食药材做进一步降尿酸活性验证。体外试验结果表明,15种乙醇粗提物均具有XOD抑制活性,其中8种在400 μg/mL时抑制率达到50%以上,分别为:红景天、兔耳草、牡丹皮、败酱草、黄柏、绿萝花、决明子、雪菊。体内试验结果表明,8种处理组尿酸水平与模型组相比显著降低（P<0.05或P<0.01）,均显示出降尿酸活性。     

胰酶酶解猪骨素的工艺条件

利用胰酶酶解猪骨素并测定其酶解液的水解度.通过单因素试验确定胰酶水解猪骨素的酶解温度、pH值、酶用量、料液比(底物浓度)及水解时间,在此基础上用正交试验分析酶解的最佳工艺,在本试验条件下,酶解的最佳工艺为在温度45℃,pH7.5,酶用量8750U/g以及料液比1:12.5g/mL条件下酶解3h,此条件下水解度可以达到25.88%.     

茴香中总多酚和总黄酮含量及其抗氧化活性研究

测定茴香体外抗氧化活性,并分析茴香中总多酚与总黄酮含量与抗氧化活性的关系。结果表明,茴香乙酸乙酯部位和正丁醇部位具有体外抗氧化活性。其中,乙酸乙酯部位清除DPPH自由基和ABTS+自由基的能力(IC50分别为(37.67±0.21)、(24.88±0.07)μg/mL)比正丁醇部位的清除能力(IC50分别为(47.48±0.18)、(34.19±0.19)μg/mL)强,且具有显著性差异(p<0.05),而正丁醇部位对铁离子的还原能力(TEAC值为(569.9±0.69)μmol/g)比乙酸乙酯部位的还原能力(TEAC值为(281.23±4.73)μmol/g)强,且具有显著性差异(p<0.05)。乙酸乙酯部位清除DPPH和ABTS自由基的能力强可能与其总黄酮含量高有关,正丁醇部位还原铁离子的能力好与其总多酚含量高有关。     

木瓜蛋白酶酶解南极磷虾壳提取虾青素的研究

以南极磷虾鲜虾壳类物质为材料,利用木瓜蛋白酶酶解提取虾青素,通过优化实验确定酶解的最优条件.本实验通过优化确定丙酮的最优浸提条件为料液比1∶32(g∶mL)、浸提温度39℃、浸提时间416min.通过优化实验确定木瓜蛋白酶酶解的最优条件为固液比1∶113(g∶mL)、酶底比6∶100、酶解温度50℃、酶解时间185min、pH=5.浸提酶解后的鲜虾壳类物质,每克干鲜虾壳类物质可提取总类胡萝卜素(虾青素)(350.709± 12.060)μg,与丙酮直接浸提的(228.902±6.761) μg/g相比提高了53.214％.     

骨素酶解工艺条件的响应面法优化

通过响应面法分析了木瓜蛋白酶酶解骨素的工艺条件,以水解度、鲜味、酸味、苦味为评价指标,建立了水解度与酶解温度、酶解时间、pH及酶用量之间的相关性模型,并对最优酶解工艺进行了优化,验证结果表面所得模型可用于预测不同酶解条件下骨素的水解度;优化结果显示,酶解温度60℃、酶解时间5 h、pH4、酶用量8 750 U/g时,木瓜蛋白酶酶解骨素的水解度最高,所得酶解液的鲜味强于酸味,无苦味。     

响应面优化超声波辅助水酶法提取花生蛋白工艺

采用水酶法结合超声波预处理提取花生蛋白,在单因素实验基础上,选出最优的超声时间和超声温度,重点以酶用量、酶解pH、酶解温度、酶解时间和料液比为考察的影响因子,花生蛋白提取率为响应值。确定最优复合酶水解的水酶法提取花生蛋白工艺条件为：加酶量为1.59%,温度为56.5℃,酶解时间为3.9h,料水比为1∶4.4,pH为9.0,此时蛋白提取率为94.31%±0.37%。     

酶解斑点叉尾鮰内脏制备血管紧张素转换酶抑制产物

以斑点叉尾鮰内脏为原料,血管紧张素转化酶抑制率为指标,筛选出木瓜蛋白酶为酶解的最适蛋白酶,并研究该酶的酶解时间、酶添加量、初始pH 值、酶解温度、液料比(mL/g)对酶解产物抑制活性的影响,通过正交试验优化得到了具有ACE 抑制活性的酶解产物的最佳工艺条件。结果表明：最优酶解条件为初始pH7.5、酶解温度55℃、液料比2:1(mL/g),酶解产物ACE 抑制率为72.34%。     

响应面优化碱性蛋白酶提取火麻仁油的研究

运用水酶法提取火麻仁油,依次选用Alcalase2.4L(碱性蛋白酶)、Protamex(复合蛋白酶)、Neutrase0.8L(中性蛋白酶)、Celluclast1.5L(复合纤维素酶)、Viscozyme(复合植物水解酶)单独并复配对云麻一号和巴马火麻仁酶解提油,以提油率为指标,最终选取Alcalase2.4L提取云麻一号。研究了粉碎次数、液料比、酶用量、酶解初始pH、酶解温度和酶解时间对提油率的影响,并用响应面法进行了优化。得到的最优酶解条件为:粉碎次数4次(5 s/次),液料比3.5∶1,酶用量2.0%(以火麻仁质量计),酶解初始pH 7,酶解温度70℃,酶解时间3.5 h。在最优条件下,火麻仁的提油率可达83.81%。     

超声波辅助水酶法提取花生油工艺

采用水酶法结合超声波预处理提取花生油,在单因素试验基础上,选出最优的超声时间(20min)和超声温度(45℃),重点以加酶量、酶解pH、酶解温度、酶解时间和料液比为影响因素,以花生提油率为响应值,采用响应面试验确定最优水酶法提取花生油工艺条件为:加酶量1.7％,酶解温度56℃,酶解时间3.8h,料液比1∶4,酶解pH 9.3.在最优条件下,响应面有最优值(95.50 ±0.44)％.     

超声辅助酶解制备大米蛋白黄嘌呤氧化酶活性抑制肽的工艺条件优化

摘 要: 本文以大米蛋白为原料,研究了碱性蛋白酶酶解法制备黄嘌呤氧化酶（Xanthine Oxidase,XOD）活性抑制肽,并对其体外功能活性进行评价。研究了蛋白酶种类、底物浓度、酶解温度、加酶量、酶解pH、酶解时间对大米蛋白水解度（degree of hydrolysis,DH）及酶解产物对黄嘌呤氧化酶活性抑制率的影响,探讨了不同超声处理方式对酶解过程的影响,通过响应面法对实验条件进行了优化结果如下：采用碱性蛋白酶,底物浓度5 %,酶解温度为56 ℃,加酶量为8000 U/g,酶解pH为10,超声功率70 W,超声酶解60 min,对所制备的大米蛋白黄嘌呤氧化酶活性抑制肽的功能活性进行了评价。在最优条件下其黄嘌呤氧化酶抑制活性的IC50为1.55 mg/mL, ABTS自由基清除作用、羟基自由基清除作用、DPPH自由基清除作用的IC50值分别为0.49、12.48、3.88 mg/mL。     

岩藻低聚糖的酶法制备及其降尿酸效果

该文研究了岩藻低聚糖的最佳酶解条件及对高尿酸血症小鼠的降尿酸效果。采用岩藻多糖酶（专利授权号ZL201210555581.6）降解岩藻多糖获得岩藻低聚糖,以黄嘌呤氧化酶抑制率为指标探究其最佳酶解条件,并用高尿酸血症小鼠模型探究其降尿酸效果。研究结果表明,最佳酶解温度为30 ℃,最佳酶解时间为1.5 h,最佳酶添加量为2 000 U/g,最佳多糖质量浓度为10 mg/mL;酶解后,重均分子量由7.873×105 u降至8.508×103 u;酶解产物用超滤膜进行分级后,小于5 ku的岩藻低聚糖对黄嘌呤氧化酶的抑制作用最强,抑制率为88.65%,硫酸根含量为30.93%,岩藻糖含量为33.16%,葡萄糖醛酸含量为9.29%;与模型组相比,小于5 ku的岩藻低聚糖能够增加小鼠体重,缓解建模药物对肝脏、肾脏和脾脏的损伤,显著降低小鼠血清肌酐、尿素氮的含量,150 mg/kg、300 mg/kg样品组小鼠血清尿酸值分别降低42.10%和25.63%,小鼠黄嘌呤氧化酶活性分别降低10.04%和8.57%,小鼠腺苷脱氨酶活性分别降低2.83%和5.25%。小于5 ku的岩藻低聚糖对高尿酸血症小鼠具有显著的降尿素效果。该研究为岩藻低聚糖的开发利用奠定了理论基础。     

响应面法优化鹿鞭肽酶解工艺及体外补肾健骨活性分析

目的：确定碱性蛋白酶酶解鹿鞭肽最佳工艺条件,并探究其体外补肾健骨活性。方法：以酶解温度、pH、酶解时间和酶用量为影响因素,水解度为响应指标,在单因素实验的基础上,结合Box-Behnken方法进行响应面试验设计,获得酶解鹿鞭肽的最佳工艺;探究不同浓度的鹿鞭肽对小鼠睾丸间质细胞（TM3）的存活率以及睾酮（Testosterone,T）的分泌影响和对成骨细胞（MC3T3-E1）的存活率、碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase,ALP）活力以及骨钙素（Osteocalcin,OCN）的分泌影响。结果：最佳酶解工艺条件为温度51℃,pH8.7,时间4.1 h,酶用量1300 U/g,此时水解度为40.36%±0.22%;体外活性实验结果表明,TM3细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较,均可显著提高细胞存活率和睾酮的分泌（P<0.05）,并在50μg/mL质量浓度下,鹿鞭酶解肽对TM3细胞的T分泌促进作用最强,其分泌量为42.47 ng/mL;MC3T3-E1细胞不同浓度（25、50、100、200μg/mL）给药组与模型组相比较,细胞存活...     

酶解南美白对虾下脚料制备抗氧化酶解液的研究

以南美白对虾加工下脚料(虾头虾壳)为原料,采用内源酶、中性蛋白酶,通过控制pH、水料比、酶解温度、酶解时间和酶用量等条件进行酶解,从而制取抗氧化酶解液,以还原能力、清除羟基自由基能力为指标选择最优的酶解条件。结果表明,内源酶最佳酶解条件为:pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为40℃、酶解时间为6h,此时还原力为0.668,·OH清除率为67.24%;中性蛋白酶的最佳酶解条件为:酶用量为60U/g原料,pH为6,水料比为2∶1,酶解温度为60℃、酶解时间为5h,此时还原力为0.672,·OH清除率为68.43%。在最佳酶解条件下,两种酶解液的还原力与·OH清除率大小排列为:中性蛋白酶>内源酶,但两者相差不大,从经济能源的综合因素考虑,选用内源酶较合适。     

酶法辅助提取花生壳中木犀草素的工艺研究

目的：研究纤维素酶法辅助提取花生壳中木犀草素的最佳工艺条件。方法：采用HPLC法测定木犀草素含量,以提取率为指标,分别考察料液比、加酶量、pH值、温度、时间对纤维素酶酶解反应的影响,并将筛选工艺与目前文献的乙醇直接提工艺进行对比分析。结果：纤维素酶酶解花生壳的最佳工艺条件：料液比为1∶8（w/v）、酶用量为25U/g药材的量、酶解pH值为4.8、酶解温度50℃、酶解时间为6h。结论：与传统乙醇直接提取工艺相比,酶法辅助提取工艺提取花生壳中木犀草素的提取率提高了2.15倍。     

响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺研究

以可口革囊星虫为原料提取胶原蛋白,以总抗氧化能力和超氧阴离子清除率为考察指标,通过单因素实验和响应面法优化复合酶酶解制备可口革囊星虫胶原蛋白抗氧化肽工艺条件。结果表明,选用酶筛选试验中多肽抗氧化活性较高的木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和酸性蛋白酶进行单酶和复合酶试验,最佳方案确定为木瓜蛋白酶与中性蛋白酶复合酶解。在单因素实验基础上确定复合酶添加量（U/g）、酶解温度（℃）、酶解pH、酶解时间（h）为自变量,通过响应面法优化并参考实际因素,确定复合酶酶解的最优条件是:复合酶添加量8135 U/g、酶解温度51.6 ℃、酶解pH6.4、酶解时间4.2 h,在此条件下酶解制备的胶原肽总抗氧化能力为(1.333±0.021）μmol/mL,超氧阴离子清除率为78.75%±0.94%。     

克氏原螯虾虾壳中虾青素酯酶解工艺的研究

以克氏原螯虾虾壳为原料,脂肪酶为催化剂,水解虾青素酯制备游离虾青素,探讨了脂肪酶添加量、酶解温度、溶液pH及酶解时间对虾青素酯水解效果的影响。通过单因素和正交试验确定酶解最优条件为脂肪酶添加量10%、酶解温度50℃、溶液pH 5.5、酶解时间5 h,在此条件下虾青素提取量达到87.58μg/g;各因素对虾青素提取量的影响依次为:酶解时间脂肪酶添加量溶液pH酶解温度。     

海蜇胶原蛋白肽的酶解制备工艺

以海蜇加工下脚料为原料提取胶原蛋白,以还原力(RP)和水解度(DH)为指标,采用响应面法研究了酶解温度、酶解时间、pH、料液比、酶添加量对还原力和水解度的影响,得到最佳酶解胶原蛋白的工艺条件;并进一步与复合酶水解工艺进行比较,确定海蜇胶原蛋白肽的最优制备工艺。结果表明:胰蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、pH8.5、料液比0.50 g/mL、酶添加量3.0%和酶解时间4 h;风味蛋白酶的最优酶解条件为:温度44℃、pH7.5、料液比0.56 g/mL、酶添加量4.0%和酶解时间4 h;进一步进行复合酶实验,结果表明采用风味蛋白酶和胰蛋白酶分别在其最适条件下进行先后酶解获得的酶解液的DH和RP最高,分别为(71.56%±0.0076%)和(0.341±0.0101)。